目的:二甲雙胍主要作為治療二型糖尿病的胍類(lèi)藥物在臨床上的使用已超過(guò)三十多年,近年來(lái)二甲雙胍可調(diào)控癌癥的現(xiàn)象已經(jīng)被提出。然而,二甲雙胍參與癌細(xì)胞調(diào)控的分子機(jī)制尚不十分明確,其中與失調(diào)的microRNAs有直接的相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞在能量代謝方面與健康細(xì)胞有所不同,而AMPK不僅對(duì)能量轉(zhuǎn)換有關(guān),還對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡至關(guān)重要�？傊�,我們確立了二甲雙胍與miR-365/PTEN/AMPK信號(hào)通路在胃癌細(xì)胞凋亡中的作用,為胃癌的診斷治療提供新的思路。方法:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞AGS、MGC-803、SGC-7901接種于培養(yǎng)板中,用不同濃度二甲雙胍（1、1.5、3、4.5、6 mM）分別干預(yù)24、48、72小時(shí),含等量無(wú)菌水培養(yǎng)基處理為對(duì)照組,CCK-8和EdU試劑盒檢測(cè)胃癌細(xì)胞的增殖且計(jì)算二甲雙胍對(duì)胃癌細(xì)胞的IC50值為5 mmol/L;用5 mmol/L二甲雙胍干預(yù)三種胃癌細(xì)胞24、48、72小時(shí),Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、BAX、BCL-2和細(xì)胞色素C的表達(dá)水平并計(jì)算BAX/BCL-2比值,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況;用二甲雙胍作用癌細(xì)胞不同時(shí)間和濃度檢測(cè)... 

【文章來(lái)源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和菌種
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)組織樣品
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.1 培養(yǎng)細(xì)胞所需試劑及配制方法
        2.2.2 提取質(zhì)粒所需相關(guān)試劑
        2.2.3 Western bloting相關(guān)試劑
        2.2.4 提取RNA及 RT-PCR相關(guān)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.2 CCK-8細(xì)胞增殖試驗(yàn)
        2.4.3 轉(zhuǎn)化
        2.4.4 小提質(zhì)粒
        2.4.5 中提質(zhì)粒
        2.4.6 寡核苷酸及siRNA設(shè)計(jì)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.4.7 EdU（5-乙炔基-2’-脫氧尿苷）細(xì)胞增殖測(cè)定
        2.4.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.4.9 RNA提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR（q RT-PCR）
        2.4.10 蛋白質(zhì)印跡分析（Western Blot）
        2.4.11 細(xì)胞免疫熒光（IF）
        2.4.12 熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定（Luciferase）
        2.4.13 慢病毒包裝
        2.4.14 Caspas-3 酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
        2.4.15 H&E染色
        2.4.16 組織切片的免疫組化（IHC）
        2.4.17 組織切片的TUNEL
        2.4.18 裸鼠成瘤
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 二甲雙胍抑制胃癌細(xì)胞的活力和增殖
    3.2 二甲雙胍誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡
    3.3 二甲雙胍上調(diào)miR-365表達(dá)
    3.4 MiR-365誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡
    3.5 MiR-365和二甲雙胍協(xié)同上調(diào)胃癌細(xì)胞凋亡
    3.6 Mi R-365 靶向PTEN調(diào)控表達(dá)
    3.7 二甲雙胍調(diào)節(jié)AMPK表達(dá)及定位
    3.8 PTEN影響AMPK的磷酸化誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
    3.9 二甲雙胍和miR-365抑制裸鼠腫瘤組織生長(zhǎng)
第4章 結(jié)論
第5章 討論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目



本文編號(hào)：2971952