發(fā)布時(shí)間：2021-01-12 02:25

　　目的:二甲雙胍主要作為治療二型糖尿病的胍類藥物在臨床上的使用已超過(guò)三十多年,近年來(lái)二甲雙胍可調(diào)控癌癥的現(xiàn)象已經(jīng)被提出。然而,二甲雙胍參與癌細(xì)胞調(diào)控的分子機(jī)制尚不十分明確,其中與失調(diào)的microRNAs有直接的相關(guān)性。腫瘤細(xì)胞在能量代謝方面與健康細(xì)胞有所不同,而AMPK不僅對(duì)能量轉(zhuǎn)換有關(guān),還對(duì)腫瘤細(xì)胞的凋亡至關(guān)重要�？傊�,我們確立了二甲雙胍與miR-365/PTEN/AMPK信號(hào)通路在胃癌細(xì)胞凋亡中的作用,為胃癌的診斷治療提供新的思路。方法:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人胃癌細(xì)胞AGS、MGC-803、SGC-7901接種于培養(yǎng)板中,用不同濃度二甲雙胍（1、1.5、3、4.5、6 mM）分別干預(yù)24、48、72小時(shí),含等量無(wú)菌水培養(yǎng)基處理為對(duì)照組,CCK-8和EdU試劑盒檢測(cè)胃癌細(xì)胞的增殖且計(jì)算二甲雙胍對(duì)胃癌細(xì)胞的IC50值為5 mmol/L;用5 mmol/L二甲雙胍干預(yù)三種胃癌細(xì)胞24、48、72小時(shí),Western Blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、BAX、BCL-2和細(xì)胞色素C的表達(dá)水平并計(jì)算BAX/BCL-2比值,流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況;用二甲雙胍作用癌細(xì)胞不同時(shí)間和濃度檢測(cè)... 

【文章來(lái)源】：武漢科技大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 前言
第2章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞系和菌種
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)組織樣品
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.1 培養(yǎng)細(xì)胞所需試劑及配制方法
        2.2.2 提取質(zhì)粒所需相關(guān)試劑
        2.2.3 Western bloting相關(guān)試劑
        2.2.4 提取RNA及 RT-PCR相關(guān)試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.2 CCK-8細(xì)胞增殖試驗(yàn)
        2.4.3 轉(zhuǎn)化
        2.4.4 小提質(zhì)粒
        2.4.5 中提質(zhì)粒
        2.4.6 寡核苷酸及siRNA設(shè)計(jì)和瞬時(shí)轉(zhuǎn)染
        2.4.7 EdU（5-乙炔基-2’-脫氧尿苷）細(xì)胞增殖測(cè)定
        2.4.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.4.9 RNA提取及實(shí)時(shí)熒光定量PCR（q RT-PCR）
        2.4.10 蛋白質(zhì)印跡分析（Western Blot）
        2.4.11 細(xì)胞免疫熒光（IF）
        2.4.12 熒光素酶報(bào)告基因測(cè)定（Luciferase）
        2.4.13 慢病毒包裝
        2.4.14 Caspas-3 酶聯(lián)免疫分析（ELISA）
        2.4.15 H&E染色
        2.4.16 組織切片的免疫組化（IHC）
        2.4.17 組織切片的TUNEL
        2.4.18 裸鼠成瘤
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 二甲雙胍抑制胃癌細(xì)胞的活力和增殖
    3.2 二甲雙胍誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡
    3.3 二甲雙胍上調(diào)miR-365表達(dá)
    3.4 MiR-365誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡
    3.5 MiR-365和二甲雙胍協(xié)同上調(diào)胃癌細(xì)胞凋亡
    3.6 Mi R-365 靶向PTEN調(diào)控表達(dá)
    3.7 二甲雙胍調(diào)節(jié)AMPK表達(dá)及定位
    3.8 PTEN影響AMPK的磷酸化誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
    3.9 二甲雙胍和miR-365抑制裸鼠腫瘤組織生長(zhǎng)
第4章 結(jié)論
第5章 討論與展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄1 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
附錄2 攻讀碩士學(xué)位期間參加的科研項(xiàng)目



本文編號(hào)：2971952