本文第一部分實(shí)驗(yàn)探究了 Combretastatin A4phosphate（CA4P）與人參皂苷Rd聯(lián)合用藥對HepG2細(xì)胞及HepG2異種移植瘤的抑制作用和可能機(jī)制。CA4P是一種血管破壞劑,可導(dǎo)致腫瘤血管迅速關(guān)閉,進(jìn)而造成腫瘤中心大面積壞死,從而引起腫瘤缺氧加劇和缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）的升高。人參皂苷Rd屬于人參皂苷的二醇型,對多種腫瘤細(xì)胞具有顯著的抗增殖作用。最近有文獻(xiàn)報道,人參皂苷Rd可以下調(diào)HIF-1α的表達(dá)并抑制PI3K/AKT/mTOR信號通路,從而在體外和體內(nèi)抑制MDA-MB-231細(xì)胞的生長。因此我們推測,CA4P和人參皂苷Rd的組合可能是一種抗腫瘤的可行思路。本部分實(shí)驗(yàn)采用MTT檢測了 CA4P和人參皂苷Rd單獨(dú)或聯(lián)合使用時對HepG2細(xì)胞存活率的影響并分析了兩藥聯(lián)合指數(shù);采用TUNEL試劑盒分析了 CA4P和人參皂苷Rd單獨(dú)或聯(lián)合使用時對HepG2細(xì)胞凋亡的影響;在裸鼠體內(nèi)建立HepG2異種移植腫瘤模型考察了 CA4P和人參皂苷Rd聯(lián)合用藥在體內(nèi)的抗腫瘤作用;使用免疫組化檢測了腫瘤組織內(nèi)Ki67的表達(dá)情況,使用TUNEL法檢測了腫瘤細(xì)胞凋亡情況,采用M... 

【文章來源】：南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１?ＣＡ４Ｐ的分子結(jié)構(gòu)［３］??Ｆｉｇ．?１－１?Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ?Ａ４?ｐｈｏｓｐｈａｔｅ．??

?第三章ＤＮＡ熒光檢測新方法的構(gòu)建???＾ＨＨｉ??ｒ＾ＢｃｙｒＭＭＵＨｍＰＴＴｎＴＴ＾?ｕ?＞?＊ｉ！??ｉｊｊｒ．ｒｖ．Ｈｉ－?？ＭＶｉｉｔｉ．ｉｔ?Ｔ．ｉｒ＾ｐ＾ｙｎ＾ｔ．．ＵＴ，｜ｉ＾＾Ｂ？？７ｒｆｎ＾＾＾Ｂ??ｐ？ｉ＿ｎｆｆｌＢＭｎｆｉｆｗＢ�。睿椋恚蓿椋椋罚蟆觥�？＞ｗ３ｉ＿ｉｉ＾ｉｆＵＴ４—Ｅ５ｇｆＴｒ！ｇｓ５—??？ｗｉｉｉｇ？７ｇ？７５ｔＭｉ??圖３－２?ｔＤＮＡ濃度為１?ｎＭ時硅片表面的ＳＥＭ圖像??Ｆｉｇ．?３－２?ＳＥＭ?ｉｍａｇｅ?ｏｆ?ｓｉｌｉｃｏｎ?ｓｕｒｆａｃｅｓ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔＤＮＡ?ｗａｓ?１?ｎＭ．??３．３．３實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化??為了獲得該方法的最佳分析性能，需要考察幾個重要的實(shí)驗(yàn)條件。單鏈ＤＮＡ的濃度??需要通過測量熒光標(biāo)記物的熒光強(qiáng)度來實(shí)現(xiàn)，標(biāo)記時間越長，可以引入的熒光標(biāo)記物越多，??所以該方法的分析性能受標(biāo)記時間的影響較大。因此，我們首先考察了最佳熒光標(biāo)記時間。??如圖３－３Ａ所示，隨著反應(yīng)時間的增加，美光強(qiáng)度從１５?ｍｉｎ到９０?ｍｉｎ顯著增強(qiáng)，而９０?ｍｉｎ??后沒有觀察到明顯的熒光強(qiáng)度增加。這可能是由于９０ｍｉｎ后聚合物鏈的生長已經(jīng)終止。因??此，在隨后的實(shí)驗(yàn)中選擇９０?ｍｉｎ作為最佳標(biāo)記時間。??另一個必要的參數(shù)是分析性能中的ＦＯＡ濃度。因此，我們分析了?ＦＯＡ濃度對熒光強(qiáng)??度的影響。如圖３－３Ｂ所示，隨著ＦＯＡ濃度的增加，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)，并在１５ｐＭ后趨??于穩(wěn)定。因此，在以下實(shí)驗(yàn)中使用的ＦＯＡ的最佳濃度為１５?ｐＭ。??除了?ＦＯＡ標(biāo)記時間及其濃度外，ＤＮＡ雜交時間也是影響分析能力的重要因素之一，??雜交時間的增加會

?南京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文???ｌ１２０＇?ｉ－?ｉ－?／??Ｉ■游?／?ｆ９０－?ｆ１６０＇?／??Ｊｖ?�。海�?＂：／??６０－Ｉ?＾?。｜?丨?７〇Ｊ?°???１５?３０?４５?６０?７５?９０?１０５?０?５?１０?１５?２０?３０?４５?６０?７５?９０?１０５?１２０??ｒ？？ｃｔｉｏｎ?ｔｉｍｏ?（ｍｉｎ）?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?（＾Ｍ）?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ｌｉｍ＊?（ｍｉｎ）??圖３－３熒光標(biāo)記時間（Ａ），熒光素鄰丙烯酸濃度（Ｂ）和ＤＮＡ雜交時間（Ｃ）的影響??Ｆｉｇ．?３－３?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｌａｂｅｌｉｎｇ?ｔｉｍｅ?（Ａ），?ｔｈｅ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ?ｏ－ａｃｒｙｌａｔｅ??（Ｂ），?ａｎｄ?ｔｈｅ?ＤＮＡ?ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ?ｔｉｍｅ?（Ｃ）．??３．３．４分析性能研究??在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，用０．１?的ｔＤＮＡ或ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ與發(fā)夾ＤＮＡ雜交，如圖３－４Ａ??所示，可以觀察到大量熒光斑點(diǎn)，而對照組幾乎沒有顯示熒光斑點(diǎn)（圖３－４Ｂ）。??Ｈ??圖３－４濃度為０．１｜ｉＭ的ｔＤＮＡ（Ａ）和ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ（Ｂ）的表面熒光圖像（放大倍率：１０ｘ２０，??曝光時間：４００?ｍｓ）??Ｆｉｇ．?３－４?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｍａｇｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｈｉｐ?ｓｕｒｆａｃｅ?ｔｏｗａｒｄ?０．１?｜．ｉＭ?ｔＤＮＡ?（Ａ）?ａｎｄ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ＤＮＡ??（Ｂ）．?（Ｍａｇｎｉｆｉｃａｔｉｏｎ：?１０ｘ２０，?ｅｘｐｏｓｕｒｅ?ｔｉｍｅ：?４００


本文編號：2965745