發(fā)布時(shí)間：2021-01-06 03:07

　　地爾硫卓是一種非二氫吡啶類鈣離子拮抗劑,作為臨床藥物具有高選擇性、高耐受性、廣適用性等特點(diǎn),目前已廣泛用于治療高血壓、心絞痛以及心律失常等心血管疾病。地爾硫卓在體內(nèi)代謝可生成多種代謝產(chǎn)物,這些代謝產(chǎn)物多具有藥物活性,對(duì)鈣離子通道有著不同的抑制作用。地爾硫卓及其代謝物在體內(nèi)的脫乙酰作用依賴于一種來源于腸道微生物多形擬桿菌的乙酰酯酶BT4096（GenBank,NP₈13007.1）。本實(shí)驗(yàn)以BT4096蛋白為研究對(duì)象,對(duì)其進(jìn)行表達(dá)、純化及晶體結(jié)構(gòu)解析。BT4096截去其N端信號(hào)肽后有440個(gè)氨基酸,分子量為51 kDa,全基因合成并構(gòu)建在pET32a載體上,后轉(zhuǎn)入工程菌株BL21（DE3）中進(jìn)行表達(dá)。通過兩次鎳親和層析純化,獲得了符合結(jié)晶純度的BT4096蛋白溶液。晶體條件的初篩通過微量蒸汽擴(kuò)散-坐滴法,使用商業(yè)化結(jié)晶試劑盒對(duì)晶體條件進(jìn)行篩選。晶體衍射數(shù)據(jù)的收集在同步輻射中心進(jìn)行。利用單波長反常散射的方法解析了BT4096的相位,通過PHENIX搭建初始結(jié)構(gòu)模型,使用COOT進(jìn)行結(jié)構(gòu)修正,最終獲得分辨率為2.33 A的結(jié)構(gòu)。BT4096的結(jié)構(gòu)可分為兩個(gè)部分,N端結(jié)構(gòu)... 

【文章來源】：中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．２?ＳＧＮＨ家族水解�。ǎ牵模樱碳易澹┐呋瘷C(jī)制??注：催化三聯(lián)體和水分子用黑色表示，氧陰離子洞為藍(lán)色，底物為紅色??

?第３章結(jié)果與討論???第３章結(jié)果與討論??３．１?ＢＴ４０９６生物信息學(xué)預(yù)測??（１）?ＢＴ４０９６信號(hào)肽預(yù)測??用在線軟件ＳｉｇｎａｌＰ５．０對(duì)ＢＴ４０９６氨基酸序列進(jìn)行分析，結(jié)果如圖３．１。序??列ＡＦＡ－ＱＴ間有信號(hào)肽切點(diǎn)，重組蛋白的表達(dá)需除去信號(hào)肽部分，在基因合成時(shí)??截去Ｎ端２０個(gè)氨基酸。??Ｓｉ＾ｎａｌＰ－５．０?ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ?（Ｅｕｋａｒｙａ）：?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ??ｉ?ｊ＂?＇＇?????＂?ＳＰ（Ｓｅｃ／ＳＰＩ）???Ｊ?ｉ?ＯＴＨＥＲ??０．８－?ｐ??安?ｉ??『?！??：?ａ?＾??ｏ－?－一????ｗ?????—??－?■?■?—＇?■＇?????ＮＫＫＦＬＶＬＶＡＡＶＣＭＡｙＴＴＡＰＡＱＴＶＫＰＦＫＥ６ＤＲＡＶＦＬＧＮＳｌＴ〇６ＧＲｙＨ￥ＦＺＭＬＹＹｎＴＲＦＰＮＭＰＩＲＶＦＮＧＧＩＧ??ｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｓｃｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘｘ??Ｉ?１?Ｉ?１?Ｉ?１?Ｉ?＇??０?２０?４０?６０??Ｐｒｏｉｒｉｎ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ??圖３．１?ＢＴ４０９６信號(hào)肽預(yù)測??（２）?ＢＴ４０９６跨膜區(qū)預(yù)測??用在線軟件ＴＭＨＭＭ?２．０對(duì)ＢＴ４０９６氨基酸序列進(jìn)行分析，結(jié)果如圖３．２所??示，ＢＴ４０９６不含跨膜螺旋。??ＴＭＨＭＭ?ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ?ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｉｅｓ?ｆｏｒ?ＷＥＢＳＥＱＵＥＮＣＥ??１．２????■???■???????????１?？?ｉ?＊??Ｉ??

圖３．２?ＴＭＨＭＭ跨膜預(yù)測??


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