目的:對(duì)重組Arg³⁴-GLP-1[7-37]生產(chǎn)制備過程中的潛在雜質(zhì)進(jìn)行分離純化和結(jié)構(gòu)確證。方法:將發(fā)酵后的料液進(jìn)行高效液相色譜分析檢測(cè),利用離子交換色譜和制備液相純化得到Arg³⁴-GLP-1[7-37]純品和雜質(zhì)組分,將純品進(jìn)行高溫、酸堿等不同條件下的破壞實(shí)驗(yàn),來探知雜質(zhì)產(chǎn)生機(jī)理,利用LC-MS、MALDI-TOF質(zhì)譜、蛋白質(zhì)全序列測(cè)序等方式推斷雜質(zhì)的分子量與結(jié)構(gòu)。結(jié)果:經(jīng)陰離子交換色譜及反相制備純化后,Arg³⁴-GLP-1[7-37]的純度可達(dá)97.9%,雜質(zhì)組分經(jīng)LC-MS解析得到6個(gè)單體組分的分子量,分別為1033.1500,1302.8308,2743.9113,3381.4459,2488.5400,3108.8330,推測(cè)其可能結(jié)構(gòu)序列。反相制備分離出三種主要雜質(zhì)并將其純化至91.4%、99.2%和96.7%。通過MALDI-TOF測(cè)得其[M+H]⁺分子量分別為1033.5446,2744.2397和3112.4475,根據(jù)Arg³⁴-GLP-1[7-37]... 

【文章來源】：成都大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：85 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

氨基酸側(cè)鏈反應(yīng)產(chǎn)生雜質(zhì)Figure1.1Aminoacidsidechainreactionproducesimpurities

GLP-1類似物雜質(zhì)研究5（4）旋光色散（ORD），旋光色散（ORD）測(cè)量樣品根據(jù)波長旋轉(zhuǎn)線性偏振光的能力。這種與CD密切相關(guān)的技術(shù)在過去非常流行用于肽和蛋白質(zhì)的構(gòu)象分析，但現(xiàn)在有了更先進(jìn)的技術(shù)，如CD。振動(dòng)圓二色（VCD）可以看作是CD和IR方法的組合，利用CD的帶形變化和IR的頻率分辨率。該技術(shù)可用于肽和蛋白質(zhì)的定量和定性分析。或者也可以使用二維IR（2D-IR）[36]。1.6本課題的研究技術(shù)路線本研究的技術(shù)路線如圖1.2。圖1.2本課題的研究技術(shù)路線Figure1.2Researchtechnologyrouteofthistopic

GLP-1類似物雜質(zhì)研究13圖2.2重組Arg34-GLP-1[7-37]粗品HPLC圖譜Fig.2.2HPLCchromatogramofcrudeArg34-GLP-1[7-37]經(jīng)高效液相色譜分析檢測(cè)，粗品多肽的純度為58.9%，檢測(cè)到的雜質(zhì)峰數(shù)目為17個(gè)，疏水性雜質(zhì)含量較高。2.5小結(jié)本章通過文獻(xiàn)調(diào)研確定了四種重組Arg34-GLP-1[7-37]的HPLC分析方法，將其進(jìn)行篩選并優(yōu)化后作為初步檢測(cè)方法。篩選了不同規(guī)格及性質(zhì)的色譜柱，確定了色譜柱規(guī)格及粒徑，然后以相同規(guī)格的15根不同的色譜柱為對(duì)象，以目標(biāo)物面積、純度、峰個(gè)數(shù)、分離度區(qū)間0<R<1峰個(gè)數(shù)和分離度區(qū)間1≤R峰個(gè)數(shù)為5個(gè)評(píng)價(jià)指標(biāo)，依據(jù)HPLC檢測(cè)結(jié)果，運(yùn)用熵權(quán)法進(jìn)行分析，計(jì)算出了每根色譜柱的綜合評(píng)價(jià)值，最終選擇SWELL-Ultimate-XB-C4的色譜柱，并進(jìn)一步優(yōu)化方法確定了重組Arg34-GLP-1[7-37]的HPLC分析方法，檢測(cè)獲得了重組多肽Arg34-GLP-1[7-37]粗品的HPLC圖譜，獲知了粗品純度及雜質(zhì)數(shù)目。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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