【研究背景】肝細胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原發(fā)性肝癌的百分之八十到九十。肝癌的發(fā)病率死亡率均位于腫瘤前列,其中,我國肝癌的病死率位居所有腫瘤的第二位,僅次于肺癌。我國肝癌患者被診斷時多已處于進展期或晚期,同時伴隨著血行轉移和癌栓形成,直接導致我國肝癌術后五年生存率與歐美發(fā)達國家相比處于較低的水平。因此,如何治療肝癌和改善肝癌手術的預后尤為重要。目前,化療是臨床上治療肝癌常用的手段之一。常用的化療藥物有索拉非尼、貝伐單抗、舒尼替尼、厄洛替尼等。索拉非尼（Sorafenib,SOR）是多激酶抑制劑,主要通過抑制腫瘤血管的生成抑制腫瘤進展,在中晚期肝癌的治療中取得了較好的效果,能顯著延長中晚期肝癌患者的生存期。然而,臨床研究發(fā)現(xiàn)在索拉非尼治療中,會有一部分患者對其產(chǎn)生耐藥性,并會產(chǎn)生一定的毒副作用,給該藥物的臨床應用造成較大的影響。因此,深入研究索拉非尼的耐藥機制、提高其療效已成為索拉非尼抗腫瘤研究的熱點之一。近年來的研究表明,從中草藥中提取的多種活性成份具有較好的抗腫瘤潛力。中藥活性成分聯(lián)合化療藥物使用可以有效降低其耐藥性,減少毒副作用,提高其抗腫... 

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蟾毒靈對肝癌細胞LDH釋放毒性實驗

第一章蟾毒靈抑制肝癌細胞增殖的研究7圖1-2.蟾毒靈對肝癌細胞LDH釋放毒性實驗。Fig1-2ThetoxicityofBufalintoHCCwasdeterminedbyLDHmethod.*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.3.2乳酸脫氫酶(LDH)釋放檢測蟾毒靈對肝癌細胞的毒性乳酸脫氫酶在包漿內含量豐富，當細胞受損或死亡時會引起細胞膜結構發(fā)生破壞，導致細胞漿內的酶釋放到培養(yǎng)液中，并與細胞死亡數(shù)目成正比。因此，可以通過檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶的活性大小來間接評估藥物對細胞的毒性作用。根據(jù)MTT實驗結果選取IC50實驗結果顯示，與對照組相比，給藥組的LDH釋放量與最大酶活性組的比率而逐漸上升，500nM為16.21%、1000nM為18.22%、2000nM為25.43%。說明細胞死亡的數(shù)目也增多，大劑量的給藥濃度對細胞的毒性較大。圖1-1不同藥物濃度的蟾毒靈對SNU-739細胞存活率的影響（sx，n=5）*P<0.05，**P<0.01與對照組相比Fig1-1EffectsofdifferentdrugconcentrationsofbufalinonthesurvivalrateofSNU-739cellsThemeanvaluesweresignificantlydifferentcomparedwiththecontrolgroup.*P<0.05,**P<0.01.

蟾毒靈聯(lián)合索拉非尼對肝癌細胞增殖的影響8圖1-4.蟾毒靈影響肝癌細胞細胞克隆形成。Fig1-4BufalinsuppressedcolonyformationinHCCcancercells.*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0013.3顯微鏡下觀察蟾毒靈對肝癌細胞形態(tài)的影響為了研究蟾毒靈對肝癌細胞生存的影響，根據(jù)MTT結果可知蟾毒靈對肝癌細胞IC50為1000nM。選取IC50前后濃度梯度，分別設0nm、500nM、1000nM、2000nM的濃度梯度，分為四組。藥物作用48h后，用倒置顯微鏡觀察拍照，500nM組雖然有部分細胞開始變圓脫落，但總體細胞量與對照組相比差異較�。�1000nM時細胞脫落較多，細胞培養(yǎng)板內出現(xiàn)較多空隙。2000nM組在細胞培養(yǎng)孔中的肝癌SNU-739細胞量很少，表明隨著蟾毒靈藥物濃度的增大，藥物對細胞的殺傷能力也加大，與MTT結果一致。圖1-3不同濃度蟾毒靈作用下肝癌細胞形態(tài)的變化（×20倍）Fig1-3TheBufalinchangesofHCC.Therepresentativeimageswereobtainedbyphasecontrastmicroscopyat20×magnification.3.4克隆形成實驗檢測蟾毒靈對肝癌細胞增殖的影響。采用克隆形成實驗檢測蟾毒靈作用于肝癌細胞SNU-739細胞10天后對肝癌細胞克隆性增殖的影響。實驗結果顯示，蟾毒靈均能明顯抑制肝癌細胞的克隆能力，其中抑制作用隨著蟾毒靈的藥物濃度的增大而上升。（圖1-4）

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
[1]5-氟尿嘧啶磁性脂質體納米粒在肝癌動物模型中的靶向性及藥動學研究[D]. 劉鑫.中南大學 2006

碩士論文
[1]青蒿琥酯聯(lián)合索拉非尼抗腫瘤作用的研究[D]. 劉碩.安徽理工大學 2019
[2]蟾酥化學成分及抗腫瘤活性篩選研究[D]. 趙彥敏.南京中醫(yī)藥大學 2017



本文編號：2951730