【研究背景】肝細(xì)胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）占原發(fā)性肝癌的百分之八十到九十。肝癌的發(fā)病率死亡率均位于腫瘤前列,其中,我國肝癌的病死率位居所有腫瘤的第二位,僅次于肺癌。我國肝癌患者被診斷時(shí)多已處于進(jìn)展期或晚期,同時(shí)伴隨著血行轉(zhuǎn)移和癌栓形成,直接導(dǎo)致我國肝癌術(shù)后五年生存率與歐美發(fā)達(dá)國家相比處于較低的水平。因此,如何治療肝癌和改善肝癌手術(shù)的預(yù)后尤為重要。目前,化療是臨床上治療肝癌常用的手段之一。常用的化療藥物有索拉非尼、貝伐單抗、舒尼替尼、厄洛替尼等。索拉非尼（Sorafenib,SOR）是多激酶抑制劑,主要通過抑制腫瘤血管的生成抑制腫瘤進(jìn)展,在中晚期肝癌的治療中取得了較好的效果,能顯著延長中晚期肝癌患者的生存期。然而,臨床研究發(fā)現(xiàn)在索拉非尼治療中,會(huì)有一部分患者對(duì)其產(chǎn)生耐藥性,并會(huì)產(chǎn)生一定的毒副作用,給該藥物的臨床應(yīng)用造成較大的影響。因此,深入研究索拉非尼的耐藥機(jī)制、提高其療效已成為索拉非尼抗腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。近年來的研究表明,從中草藥中提取的多種活性成份具有較好的抗腫瘤潛力。中藥活性成分聯(lián)合化療藥物使用可以有效降低其耐藥性,減少毒副作用,提高其抗腫... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

蟾毒靈對(duì)肝癌細(xì)胞LDH釋放毒性實(shí)驗(yàn)

第一章蟾毒靈抑制肝癌細(xì)胞增殖的研究7圖1-2.蟾毒靈對(duì)肝癌細(xì)胞LDH釋放毒性實(shí)驗(yàn)。Fig1-2ThetoxicityofBufalintoHCCwasdeterminedbyLDHmethod.*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.3.2乳酸脫氫酶(LDH)釋放檢測蟾毒靈對(duì)肝癌細(xì)胞的毒性乳酸脫氫酶在包漿內(nèi)含量豐富，當(dāng)細(xì)胞受損或死亡時(shí)會(huì)引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞，導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)的酶釋放到培養(yǎng)液中，并與細(xì)胞死亡數(shù)目成正比。因此，可以通過檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶的活性大小來間接評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞的毒性作用。根據(jù)MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果選取IC50實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，給藥組的LDH釋放量與最大酶活性組的比率而逐漸上升，500nM為16.21%、1000nM為18.22%、2000nM為25.43%。說明細(xì)胞死亡的數(shù)目也增多，大劑量的給藥濃度對(duì)細(xì)胞的毒性較大。圖1-1不同藥物濃度的蟾毒靈對(duì)SNU-739細(xì)胞存活率的影響（sx，n=5）*P<0.05，**P<0.01與對(duì)照組相比Fig1-1EffectsofdifferentdrugconcentrationsofbufalinonthesurvivalrateofSNU-739cellsThemeanvaluesweresignificantlydifferentcomparedwiththecontrolgroup.*P<0.05,**P<0.01.

蟾毒靈聯(lián)合索拉非尼對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響8圖1-4.蟾毒靈影響肝癌細(xì)胞細(xì)胞克隆形成。Fig1-4BufalinsuppressedcolonyformationinHCCcancercells.*P<0.05,**P<0.01,***P<0.0013.3顯微鏡下觀察蟾毒靈對(duì)肝癌細(xì)胞形態(tài)的影響為了研究蟾毒靈對(duì)肝癌細(xì)胞生存的影響，根據(jù)MTT結(jié)果可知蟾毒靈對(duì)肝癌細(xì)胞IC50為1000nM。選取IC50前后濃度梯度，分別設(shè)0nm、500nM、1000nM、2000nM的濃度梯度，分為四組。藥物作用48h后，用倒置顯微鏡觀察拍照，500nM組雖然有部分細(xì)胞開始變圓脫落，但總體細(xì)胞量與對(duì)照組相比差異較��；1000nM時(shí)細(xì)胞脫落較多，細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)出現(xiàn)較多空隙。2000nM組在細(xì)胞培養(yǎng)孔中的肝癌SNU-739細(xì)胞量很少，表明隨著蟾毒靈藥物濃度的增大，藥物對(duì)細(xì)胞的殺傷能力也加大，與MTT結(jié)果一致。圖1-3不同濃度蟾毒靈作用下肝癌細(xì)胞形態(tài)的變化（×20倍）Fig1-3TheBufalinchangesofHCC.Therepresentativeimageswereobtainedbyphasecontrastmicroscopyat20×magnification.3.4克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測蟾毒靈對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響。采用克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測蟾毒靈作用于肝癌細(xì)胞SNU-739細(xì)胞10天后對(duì)肝癌細(xì)胞克隆性增殖的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，蟾毒靈均能明顯抑制肝癌細(xì)胞的克隆能力，其中抑制作用隨著蟾毒靈的藥物濃度的增大而上升。（圖1-4）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]瓜蒂水提物和醇提物對(duì)食管癌TE-1、EC-1細(xì)胞的增殖、遷移、克隆形成的影響及機(jī)制研究[J]. 趙雯宇,司富春.  中國藥房. 2020(03)
[2]紫杉醇聯(lián)合索拉非尼治療中晚期肝癌效果分析[J]. 蘇月華,鄧小蓉,云琴.  當(dāng)代醫(yī)學(xué). 2020(04)
[3]晚期原發(fā)性肝癌的藥物治療[J]. 潘亭亭,崔曉楠.  臨床肝膽病雜志. 2020(01)
[4]魚藤素誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯的分子機(jī)制[J]. 陳彥潔,柳傳毅,呂滿霞,方瓊彤,吳新榮.  中國藥理學(xué)通報(bào). 2019(08)
[5]葉黃素通過PI3K/AKT信號(hào)通路調(diào)控胃癌干細(xì)胞增殖與凋亡[J]. 杜銳玲.  中國組織工程研究. 2019(29)
[6]藏紅花素聯(lián)合順鉑通過抑制ERK信號(hào)通路調(diào)控胃癌細(xì)胞的增殖和凋亡[J]. 許存庚,駱玉霜.  山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(07)
[7]多傘阿魏對(duì)人胃癌MGC-803裸鼠移植瘤生長及凋亡的影響[J]. 喬美玲,駱驕陽,楊明翰,吳建杰,盛萍,楊美華.  中國中藥雜志. 2019(13)
[8]雷公藤內(nèi)酯醇對(duì)小鼠H22腹水瘤細(xì)胞凋亡及PD-L1表達(dá)的影響[J]. 鄒玉蓮,黃秀旺,甘陳靈.  福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2019(01)
[9]姜黃素聯(lián)合索拉菲尼對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG-2細(xì)胞增殖及自噬的影響[J]. 劉國齡,沈方臻,孟令君,王耀庭,張炳遠(yuǎn).  現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2018(12)
[10]索拉非尼治療國人晚期肝細(xì)胞癌的臨床研究進(jìn)展[J]. 龔新雷,秦叔逵.  臨床腫瘤學(xué)雜志. 2015(02)

博士論文
[1]5-氟尿嘧啶磁性脂質(zhì)體納米粒在肝癌動(dòng)物模型中的靶向性及藥動(dòng)學(xué)研究[D]. 劉鑫.中南大學(xué) 2006

碩士論文
[1]青蒿琥酯聯(lián)合索拉非尼抗腫瘤作用的研究[D]. 劉碩.安徽理工大學(xué) 2019
[2]蟾酥化學(xué)成分及抗腫瘤活性篩選研究[D]. 趙彥敏.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2017



本文編號(hào)：2951730