已知和未知代謝物的反向轉(zhuǎn)化可能影響到生物分析的準(zhǔn)確度和精密度,由于這種反向轉(zhuǎn)化是由代謝物引起的,而方法學(xué)考察的研究樣品是由空白基質(zhì)制備的,其中不存在代謝物,最終不能反映出是否存在代謝物反向轉(zhuǎn)化的情況。生物樣品中分析物的不穩(wěn)定性將使分析驗(yàn)證復(fù)雜化,有些原形藥物/代謝物的不穩(wěn)定性是不容易預(yù)測的,這就需要在方法開發(fā)和驗(yàn)證的早期階段進(jìn)行必要的評估,以確認(rèn)代謝物逆轉(zhuǎn)為母體分析物的可能性。 

【文章來源】：中國臨床藥理學(xué)雜志. 2020年08期 北大核心

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

氯吡格雷的代謝途徑

用正離子模式分析時(shí),內(nèi)酯和羥基酸之間的質(zhì)量數(shù)相差18,而這2種化合物的[M+H]+與[M+NH4]+離子之間質(zhì)荷比相差17,二者只有一個質(zhì)量數(shù)的差別。因此羥基酸使用[M+H]+離子作為母離子時(shí),內(nèi)酯的[M+NH4]+離子的A+1同位素響應(yīng)會對其產(chǎn)生干擾,必須將二者色譜分離[13]。隨著質(zhì)譜快速極性切換功能的改進(jìn),同時(shí)監(jiān)測正負(fù)離子(正離子模式下檢測辛伐他汀,負(fù)離子模式下檢測辛伐他汀酸)可以避免這種干擾的發(fā)生。見圖2。1.3 代謝物的源內(nèi)裂解

氯氮平(CLZ)主要經(jīng)肝臟代謝,主要代謝物有N-去甲基氯氮平(DMC)和氯氮平N-氧化物(NOX),N-去甲基氯氮平的藥理活性與原形藥物相當(dāng),而N-氧化物本身沒有藥理活性。由于CLZ向NOX的轉(zhuǎn)化是可逆的,其生物分析過程需要格外注意。使用APCI源分析氯氮平和N-氧化物時(shí),如果原形藥物與其代謝物共同洗脫,則原形藥物濃度可能會被高估,NOX能產(chǎn)生2個m/z值與([CLZ+H] +和[DMC+H]+)相同的碎片離子,可能是NOX在源內(nèi)還原為CLZ以及消除了NOX中的OCH2的結(jié)果。使用APCI源時(shí),由于NOX存在源內(nèi)轉(zhuǎn)化,應(yīng)該將CLZ,DMC和NOX的色譜峰完全分離,以避免NOX的干擾;而使用ESI源進(jìn)行檢測時(shí)則找不到這2種m/z值相同的碎片離子[15]。見圖3。在一項(xiàng)奧卡西平(OCN)的生物等效性研究中[16],藥物和代謝物ISR結(jié)果均符合接受標(biāo)準(zhǔn),但隨后的樣品分析時(shí),偶爾會觀察到一個肩峰,該峰有時(shí)會干擾OCN定量,有時(shí)能夠與OCN完全分離。因此為了評估此額外峰的性質(zhì)和影響,啟動了一項(xiàng)調(diào)查。通過分析,可能的影響來自于II相代謝產(chǎn)物的源內(nèi)轉(zhuǎn)化。在驗(yàn)證的方法條件下,將OCN-葡萄糖醛酸苷標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣,并與OCN溶液進(jìn)行比較。在該檢測條件下,OCN-葡萄糖醛酸苷未引起額外的峰,這表明OCN-葡萄糖醛酸苷沒有與OCN的額外峰共洗脫,也沒有對其信號做出貢獻(xiàn)。最終發(fā)現(xiàn),該情況是由于OCN硫酸鹽結(jié)合物與OCN共洗脫,在源內(nèi)SO3損失,從而觀察到硫酸奧卡西平向奧卡西平的源內(nèi)轉(zhuǎn)化,最終對OCN定量產(chǎn)生了一定的影響。


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