目的:采用LC-MS/MS法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中6個(gè)酶代謝底物對(duì)應(yīng)代謝產(chǎn)物（1-7二甲基黃嘌呤、7-羥基香豆素、4-羥基美芬妥英、1-羥基咪達(dá)唑侖、6-羥基氯唑沙宗、4-羥基甲苯磺丁脲）的濃度。方法:生物樣品用液-液萃取法進(jìn)行預(yù)處理;采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈（2.1 mm×150 mm,5μm）色譜柱,以甲醇-水（75∶25）為流動(dòng)相,流速為0.3 mL·min^-1,柱溫為35℃,硝西泮為內(nèi)標(biāo),通過(guò)電噴霧離子化四極桿串聯(lián)質(zhì)譜,分別以正、負(fù)離子選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式（SRM）檢測(cè)。結(jié)果:6個(gè)酶代謝產(chǎn)物的線性范圍均為1～500 ng·mL^-1,定量下限均為1 ng·mL^-1;日內(nèi)和日間RSD分別小于9.9%和10.7%;準(zhǔn)確度在92.9%～110.0%;提取回收率為71.9%～98.6%;基質(zhì)效應(yīng)為90.1%～106.5%;穩(wěn)定性良好。結(jié)論:該方法靈敏、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速,可用于細(xì)胞培養(yǎng)液中6個(gè)CYP450酶代謝產(chǎn)物的測(cè)定。 

【文章來(lái)源】：藥物分析雜志. 2020年09期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：10 頁(yè)

【部分圖文】：

ESI正離子同時(shí)測(cè)定4個(gè)酶代謝產(chǎn)物的色譜圖

ESI負(fù)離子同時(shí)測(cè)定2個(gè)酶代謝產(chǎn)物的色譜圖

測(cè)定結(jié)果顯示檢測(cè)到5個(gè)代謝產(chǎn)物，分別為1-7二甲基黃嘌呤、7-羥基香豆素、1-羥基咪達(dá)唑侖、6-羥基氯唑沙宗、4-羥基甲苯磺丁脲，說(shuō)明誘導(dǎo)后的細(xì)胞具備CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4酶的活性，經(jīng)過(guò)蛋白定量后的結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各組酶產(chǎn)物均顯著升高（P<0.05);CYP1A2酶活性在LHS-5d組最高；其次是CCl4-LHS-3d組、CCl4-LHS-5d、7d組逐漸降低（P<0.05);CYP2A6酶活性在LHS-5d、CCl4-LHS-3d、CCl4-LHS-5d時(shí)最高（P<0.05);CYP2C9酶活性各組間無(wú)顯著性差別（P>0.05);CYP2E1酶活性在LHS-3d、LHS-5d時(shí)最高（P<0.05);CYP3A4酶活性在LHS-3d時(shí)最高（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)圖3。與LHS-3d組相比，CCl4-LHS-3d組3個(gè)指標(biāo)的表達(dá)水平顯著升高，1個(gè)指標(biāo)表達(dá)水平顯著降低；1個(gè)指標(biāo)的表達(dá)水平不變；與LHS-5d組相比，CCl4-LHS-5d組3個(gè)指標(biāo)的表達(dá)水平顯著降低，2個(gè)指標(biāo)的表達(dá)水平不變；與LHS-7d組相比，CCl4-LHS-7d組1個(gè)指標(biāo)表達(dá)水平顯著降低，4個(gè)指標(biāo)的表達(dá)水平不變（P<0.05）。結(jié)果見(jiàn)表7。

【參考文獻(xiàn)】：
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