目的:采用LC-MS/MS法測定細胞培養(yǎng)液中6個酶代謝底物對應代謝產物（1-7二甲基黃嘌呤、7-羥基香豆素、4-羥基美芬妥英、1-羥基咪達唑侖、6-羥基氯唑沙宗、4-羥基甲苯磺丁脲）的濃度。方法:生物樣品用液-液萃取法進行預處理;采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈（2.1 mm×150 mm,5μm）色譜柱,以甲醇-水（75∶25）為流動相,流速為0.3 mL·min^-1,柱溫為35℃,硝西泮為內標,通過電噴霧離子化四極桿串聯質譜,分別以正、負離子選擇反應監(jiān)測方式（SRM）檢測。結果:6個酶代謝產物的線性范圍均為1～500 ng·mL^-1,定量下限均為1 ng·mL^-1;日內和日間RSD分別小于9.9%和10.7%;準確度在92.9%～110.0%;提取回收率為71.9%～98.6%;基質效應為90.1%～106.5%;穩(wěn)定性良好。結論:該方法靈敏、準確、簡單、快速,可用于細胞培養(yǎng)液中6個CYP450酶代謝產物的測定。 

【文章來源】：藥物分析雜志. 2020年09期 北大核心

【文章頁數】：10 頁

【部分圖文】：

ESI正離子同時測定4個酶代謝產物的色譜圖

ESI負離子同時測定2個酶代謝產物的色譜圖

測定結果顯示檢測到5個代謝產物，分別為1-7二甲基黃嘌呤、7-羥基香豆素、1-羥基咪達唑侖、6-羥基氯唑沙宗、4-羥基甲苯磺丁脲，說明誘導后的細胞具備CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4酶的活性，經過蛋白定量后的結果顯示，與對照組相比，各組酶產物均顯著升高（P<0.05);CYP1A2酶活性在LHS-5d組最高；其次是CCl4-LHS-3d組、CCl4-LHS-5d、7d組逐漸降低（P<0.05);CYP2A6酶活性在LHS-5d、CCl4-LHS-3d、CCl4-LHS-5d時最高（P<0.05);CYP2C9酶活性各組間無顯著性差別（P>0.05);CYP2E1酶活性在LHS-3d、LHS-5d時最高（P<0.05);CYP3A4酶活性在LHS-3d時最高（P<0.05）。結果見圖3。與LHS-3d組相比，CCl4-LHS-3d組3個指標的表達水平顯著升高，1個指標表達水平顯著降低；1個指標的表達水平不變；與LHS-5d組相比，CCl4-LHS-5d組3個指標的表達水平顯著降低，2個指標的表達水平不變；與LHS-7d組相比，CCl4-LHS-7d組1個指標表達水平顯著降低，4個指標的表達水平不變（P<0.05）。結果見表7。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]UPLC-MS法同時檢測大鼠血漿中6種CYP450探針藥物濃度[J]. 景嫻,江海,陳琛.  陜西理工大學學報(自然科學版). 2018(01)
[2]細胞色素P450酶的表觀遺傳學調控及研究進展[J]. 張軼雯,方羅,鄭小衛(wèi),李清林,童瑩慧,鮑美華,黃萍.  中國現代應用藥學. 2017(02)
[3]LC-MS/MS法研究Cocktail探針藥物咖啡因、右美沙芬、奧美拉唑、咪達唑侖及其代謝產物在大鼠血漿中的藥代動力學[J]. 徐利云,候叢頌,楊志宏,孫曉波.  中國藥理學通報. 2017(02)
[4]決明子水提液對大鼠肝臟CYP450酶的影響[J]. 許龍龍,湯響林,馬增春,王宇光,梁乾德,譚洪玲,肖成榮,李樺,原梅,高月.  中國中藥雜志. 2016(08)
[5]細胞色素P450酶催化反應動力學研究進展[J]. 呂銳,孔愛紅.  現代生物醫(yī)學進展. 2009(09)



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