趨化因子12[chemokine（C-X-C motif）ligand 12,CXCL12]作為一種化學引誘劑,具有促進干細胞增殖的作用,在干細胞治療中可用于治療心肌梗死等疾病。但由于CXCL12蛋白分子結(jié)構(gòu)復雜,半衰期較短,注射給藥后作用時間短暫。本試驗在保持CXCL12生物活性的前提下,制備其長效微球。首先,將CXCL12溶于含葡聚糖和聚乙二醇（PEG）的混合溶液中,通過冷凍相分離法制備蛋白-葡聚糖顆粒,從而維持蛋白的分子構(gòu)象。然后,分別通過水包油包固（s/o/w）法和水包油包水（w/o/w）法,以具有生物可降解性的聚乳酸-羥基乙酸共聚物（PLGA）為載體制備載CXCL12-葡聚糖顆粒或CXCL12的微球（F1和F2微球）。結(jié)果顯示,s/o/w法和w/o/w法制備的微球粒徑為（63.17±21.54）和（28.98±10.29）μm,包封率分別為（46.07±1.75）%和（30.86±1.17）%。F1微球中的藥物可持續(xù)釋放超過60 d,且較符合零級釋放模型,突釋低（3%）;而F2微球的突釋率高（9%）,持續(xù)釋放時間僅為25 d。通過大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的增殖試驗測定了體外釋放過... 

【文章來源】：中國醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2020年08期 北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

F1和F2微球中不同時間點釋出的1的生物活性(n=3)

以“2.5.1”項下制備的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞為模型,探究PLGA微球載藥體系的體外安全性與穩(wěn)定性。體外安全性試驗主要探究體外釋放試驗中僅包載DEX的微球和PLGA空白微球(即F3和F4微球)的釋放液對細胞增殖的影響,而體外穩(wěn)定性試驗則考察了在-20 ℃干燥狀態(tài)下保存3個月的F1微球中1生物活性的變化。各組微球照“2.4”項下方法進行體外釋放試驗,在d1、d7、d22和d49時取釋放液,以PBS為陰性對照組,照“2.5.2”項下方法進行增殖試驗,并用CellTiter-Blue細胞活力測定試劑盒來測定細胞活力,以探究釋出蛋白對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞增殖的影響,進而驗證該體系的安全性和穩(wěn)定性。試驗結(jié)果見圖7。由圖7可見,在其他條件相同的前提下,F3微球組和F4微球組的細胞增殖數(shù)目相較于PBS組無顯著性差異,證明此微球體系對細胞增殖的影響不顯著,具有較高的體外安全性。而新鮮制備及貯存3個月的F1微球組的細胞增殖數(shù)目相較于PBS組具有顯著性差異,說明2組微球釋放液中的1都具有較高的生物活性。對比2組F1微球的效果,雖然從熒光強度來看,放置3個月后的F1微球組,尤其是釋放試驗后期時,所得細胞的熒光強度稍弱,但彼此間無顯著性差異,說明在一定時間內(nèi)此微球載藥體系對藥物生物活性的保護效果良好,即該載藥體系的體外穩(wěn)定性較好。

另稱取多組載藥微球10 mg,照上述操作進行體外釋放試驗,用于觀察其在釋放試驗的7、21和49 d的形貌。具體操作為:在體外釋放試驗的7、21和49 d,將不同組微球的體外緩釋體系于-40 ℃冰箱中冷凍,而后轉(zhuǎn)移至凍干機中,于-48 ℃、10 Pa條件下冷凍干燥48 h后,用掃描電鏡觀察微球形貌,結(jié)果見圖5。圖5 微球在體外緩釋過程中的SEM照片(A和B:×100 000,C～F:×10 000)

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：2926415