研究背景與目的多藥耐藥（MDR）是指耐藥腫瘤對(duì)結(jié)構(gòu)與功能部分或完全不相關(guān)的抗腫瘤藥物表現(xiàn)顯著抗藥性。研究表明,多藥耐藥現(xiàn)象是導(dǎo)致惡性腫瘤化療失敗的關(guān)鍵原因�；熕幬锏呐R床廣泛應(yīng)用過程中出現(xiàn)的多藥耐藥現(xiàn)象,嚴(yán)重限制藥物的治療效果與應(yīng)用周期。口腔癌是一種嚴(yán)重的、死亡率高的惡性腫瘤疾病。長春新堿（vincristine）是治療口腔癌的基礎(chǔ)化療藥物之一,多藥耐藥現(xiàn)象是降低長春新堿對(duì)口腔癌臨床療效的主要因素。與靶向紫杉醇類結(jié)合位點(diǎn)（如紫杉醇）或長春堿類結(jié)合位點(diǎn)（如長春新堿）藥物相比,靶向秋水仙堿結(jié)合位點(diǎn)的化合物可能具有克服P-gp調(diào)控的腫瘤多藥耐藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)優(yōu)勢。6a是一種能與秋水仙堿結(jié)合位點(diǎn)展現(xiàn)高親和力的新型化合物。在本論文中,我們篩選了 6a對(duì)多種敏感株及其耐藥株腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性,在此基礎(chǔ)上探討了 6a對(duì)長春新堿耐受的人口腔癌表皮樣細(xì)胞KB/V的生長抑制作用及分子機(jī)制。實(shí)驗(yàn)方法1.6a對(duì)耐藥腫瘤細(xì)胞株的體外活性檢測。采用MTT法檢測多種耐藥細(xì)胞（BEL7402/5-FU,MCF-7,KB/V）的耐藥性,在確定細(xì)胞具有穩(wěn)定耐藥性的基礎(chǔ)上,采用MTT法、克隆形成方法檢測了 6a與秋水仙堿對(duì)多... 

【文章來源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說明
前言
    1. 腫瘤多藥耐藥性（ MDR）的現(xiàn)狀與治療策略
        1.1. P-gp與MDR
        1.2. P-gp與克服腫瘤多藥耐藥
        1.3. PTEN/Akt信號(hào)通路與MDR
    2. 長春新堿及其臨床應(yīng)用現(xiàn)狀
        2.1. 長春新堿與口腔癌
        2.2. 長春新堿與腫瘤耐藥
    3. 微管蛋白抑制劑
        3.1. 微管蛋白抑制劑與細(xì)胞周期
        3.2. 秋水仙堿類微管蛋白抑制劑
    4. 本課題的研究內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)材料
    1. 化合物與藥物
    2. 細(xì)胞株
    3. 試劑
    4. 試劑配制
    5. 儀器設(shè)備
實(shí)驗(yàn)方法
    1. 細(xì)胞培養(yǎng)
    2. 抗腫瘤耐藥細(xì)胞活性篩選實(shí)驗(yàn)
        2.1. 耐藥倍數(shù)測定實(shí)驗(yàn)
        2.2. 6a與秋水仙堿抑制耐藥細(xì)胞生長的活性篩選
    3. 細(xì)胞生長抑制實(shí)驗(yàn)
    4. 克隆形成抑制實(shí)驗(yàn)
    5. 裸鼠移植瘤生長抑制實(shí)驗(yàn)
    6. 羅丹明123胞內(nèi)蓄積實(shí)驗(yàn)
    7. 微管蛋白免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)
    8. 細(xì)胞周期檢測
    9. Hoechst 33342染色實(shí)驗(yàn)
    10. Annexin V-FITC/PI雙染實(shí)驗(yàn)
    11. JC-1染色檢測線粒體膜通透性實(shí)驗(yàn)
    12. Western blotting實(shí)驗(yàn)
        12.1 蛋白提取實(shí)驗(yàn)
        12.2 電泳及顯影實(shí)驗(yàn)
    13. 統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1. 抗耐藥細(xì)胞株的活性篩選
        1.1. 耐藥倍數(shù)的測定結(jié)果
        1.2. 6a和秋水仙堿對(duì)耐藥細(xì)胞株的生長抑制作用
    2. 6a對(duì)KB細(xì)胞及KB/V細(xì)胞的生長抑制作用
    3. 6a抑制KB/V細(xì)胞的克隆形成
    4. 6a抑制裸鼠KB/V移植瘤的生長
    5. 6a對(duì)KB/V細(xì)胞內(nèi)耐藥蛋白P-gp功能和表達(dá)的影響
        5.1. 6a對(duì)KB/V細(xì)胞內(nèi)P-gp外排功能的影響
        5.2. 6a對(duì)P-gp蛋白表達(dá)水平的影響
    6. 6a抑制KB/V細(xì)胞內(nèi)微管蛋白的聚合
    7. 6a對(duì)KB/V細(xì)胞周期分布的影響
        7.1. 6a 誘導(dǎo)KB/V細(xì)胞G2/m期阻滯
        7.2. 6a調(diào)節(jié)KB/V細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)
    8. 6a誘導(dǎo)KB/V細(xì)胞凋亡
        8.1. Hoechst 33342染色法觀察細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化
        8.2. Annexin V-FITC/PI雙染法定量檢測細(xì)胞凋亡作用
        8.3. 6a誘導(dǎo)KB/V細(xì)胞凋亡作用的機(jī)制研究
    9. 6a抑制KB/V細(xì)胞內(nèi)的PTEN/Akt/NF-κB信號(hào)通路
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表



本文編號(hào)：2924739