達(dá)卡巴嗪是治療惡性黑色素瘤的一線化療藥物。它在體內(nèi)主要經(jīng)肝臟代謝,同時(shí)部分藥物仍以原藥形式經(jīng)尿液排出。這就意味著可以通過監(jiān)測尿液中達(dá)卡巴嗪的含量評估其在人體內(nèi)的利用率和轉(zhuǎn)化率,進(jìn)而對其治療效果進(jìn)行評價(jià)。針對達(dá)卡巴嗪,人們發(fā)展了多種分析方法,但多基于高效液相色譜-質(zhì)譜平臺(tái)。然而達(dá)卡巴嗪為強(qiáng)極性弱堿性化合物,采用常規(guī)反相色譜法分析時(shí)會(huì)出現(xiàn)出峰時(shí)間過早、峰形拖尾的現(xiàn)象,導(dǎo)致定量不準(zhǔn)確�；诖�,該文建立了一種測定尿液中達(dá)卡巴嗪含量的高效液相色譜方法以克服上述問題。小鼠尿液經(jīng)丙酮沉淀法去除蛋白后,采用Shimadzu-GL ODS柱（150 mm×4.6 mm, 5μm）分離,色譜條件如下:流動(dòng)相為甲醇/乙腈（1∶1, v/v）-0.01 mol/L磷酸二氫鈉溶液（pH=6.5）（20∶80, v/v）,流速1 mL/min,檢測波長280 nm,柱溫35℃,洗脫時(shí)間15 min。在該色譜條件下,達(dá)卡巴嗪保留時(shí)間為5.3 min且峰形良好。其在0.25～1 000μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r²=0.999）。基于信噪比（S/N）=3和S/N=10,計(jì)算出檢出限和定量限分... 

【文章來源】：色譜. 2020年11期 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

達(dá)卡巴嗪的結(jié)構(gòu)式

健康C57BL/6雌性小鼠,體重18±2 g,購于成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。自由進(jìn)食飲水,適應(yīng)性飼養(yǎng)5天后采用皮下注射法將B16-F10細(xì)胞(1×106個(gè)/mL)接種于小鼠右下腋,每只100 μL,正常組注射等量生理鹽水。每日觀察皮毛、食欲、活動(dòng)及成瘤情況。造模成功后,隨機(jī)分為正常組(未接種腫瘤的正常黑色素瘤小鼠)、模型組(接種腫瘤但未進(jìn)行給藥的黑色素瘤小鼠)、BA組(22.5 mg/kg;灌胃給藥[i.g.];每日一次), DTIC組(70 mg/kg;腹腔注射[i.p.];每4日一次)、BA+DTIC組(BA及DTIC給藥方式同上),每組8只,正常組及模型組灌胃等量的生理鹽水,每日1次。每3天測量一次腫瘤體積,給藥結(jié)束后,小鼠脫頸處死(實(shí)驗(yàn)流程見圖2)。1.5 尿液的收集及處理

從圖1可以發(fā)現(xiàn),DTIC含有多個(gè)雜原子,極性較大,同時(shí)又含有多個(gè)氨基,說明其具有一定堿性。選擇常規(guī)流動(dòng)相體系時(shí),DTIC在C18柱上的保留較弱,同時(shí)會(huì)出現(xiàn)峰形拖尾的情況。為改善峰形,增加保留時(shí)間,提高定量準(zhǔn)確性,考察了DTIC在不同pH值的緩沖鹽體系(磷酸鹽、醋酸銨等)、乙腈、甲醇及乙腈/甲醇不同體積比的混合液等流動(dòng)相體系中的保留行為,以保留時(shí)間和分離度為指標(biāo),確定最優(yōu)色譜條件(見1.3節(jié))。在此條件下正常組小鼠尿液樣品和正常組小鼠加標(biāo)尿液樣品的色譜圖見圖3。從圖3中可以看出,達(dá)卡巴嗪保留時(shí)間在5.3 min,尿液中的內(nèi)源性物質(zhì)對達(dá)卡巴嗪干擾少,峰形良好。表 1 DTIC在C57BL/6小鼠尿液中3個(gè)加標(biāo)水平下的 回收率(n=5)Table 1 Recovery of DTIC spiked in a urine sample of C57BL/6 mouse (n=5) Added/(μg/mL) Found (Mean±SD)/(μg/mL) Recovery/% RSD/% 50.0 49.5± 1.6 98.9 3.2 375 381± 5 102 1.3 500 485± 6 99.1 1.2 表 2 DTIC在C57BL/6小鼠尿液中的日內(nèi)及日間精密度(n=6) Table 2 Inter-day and intra-day precision of DTIC in C57BL/6 mouse urine (n=6) Test Added/(μg/mL) Found/(μg/mL) RSD/% Inter-day 50.0 49.2± 1.7 3.4 250 258± 10 3.7 500 500± 5 0.9 Intra-day 50.0 47.5± 2.0 4.3 250 254± 4 1.5 500 495± 5 1.1


本文編號(hào)：2920965