目的:通過高糖高脂離體培養(yǎng)大鼠H9c2心肌細(xì)胞,模擬心肌細(xì)胞的糖尿病環(huán)境,再給予西格列汀處理,觀察高糖高脂造模組與正常對照組及造模后藥物處理組細(xì)胞的自噬和凋亡表達(dá)情況。方法:實(shí)驗(yàn)分為三部分:（1）大鼠H9c2心肌細(xì)胞在體外培養(yǎng),隨機(jī)分為正常對照組（Con組）、高糖高脂組（HP組）和高糖高脂+不同濃度西格列汀組（0.1、1、5、10、20和50μmol·L-1）（HP+Sit組）,采用CCK-8檢測細(xì)胞活力,選擇最佳的西格列汀作用濃度;（2）將體外培養(yǎng)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為正常對照組（Con組）、高糖高脂組（HP組）、西格列汀組（Sit組）和高糖高脂+西格列汀組（HP+Sit組）,運(yùn)用蛋白免疫印跡法（Western Blot,WB）檢測自噬相關(guān)蛋白LC3和Beclin-1的表達(dá)情況,采用單丹磺酰戊二胺（Monodansylcadaverine,MDC）熒光染色法檢測細(xì)胞內(nèi)自噬體的形成,通過以上實(shí)驗(yàn)觀察西格列汀對高糖高脂條件下H9c2細(xì)胞自噬的影響;（3）體外培養(yǎng)的大鼠H9c2心肌細(xì)胞隨機(jī)分為正常對照組（Con組）、高糖高脂組（HP組）、西格列汀組（Sit組）和高糖高脂+西格列汀組... 

【文章來源】：湖北科技學(xué)院湖北省

【文章頁數(shù)】：42 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

高糖高脂單獨(dú)處理及高糖高脂聯(lián)合不同濃度西格列汀處理H9c2細(xì)胞(x±，n=3）

圖 2 高糖高脂單獨(dú)處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理 H9c2 細(xì)胞(x ± ，n =3）。 A. 分析高糖高脂單獨(dú)處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H9c2 細(xì)胞 24h，對胞內(nèi) LC3 積累的影響，*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P <0.05；B. 分析高糖高脂處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H9c2 細(xì)胞 24h，對胞內(nèi) Beclin-1積累的影響，*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P <0.05。2.2 西格列汀對高糖高脂環(huán)境下心肌細(xì)胞內(nèi)自噬體形成的影響MDC 標(biāo)記的自噬空泡表現(xiàn)為分布在細(xì)胞質(zhì)或核周空間中的不同點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)。MDC熒光染色結(jié)果顯示：與 Con 相比，HP 組 MDC 陽性細(xì)胞所占比例降低，給予 Sit 后有明顯增多，單獨(dú)給予 Sit 組表達(dá)與 Con 組無明顯差異。見圖 3。由 Western blot 和 MDC熒光染色檢測結(jié)果可見，HP 抑制 H9c2 細(xì)胞的自噬表達(dá)，Sit 則可以逆轉(zhuǎn) HP 對 H9c2細(xì)胞的自噬抑制。

糖高脂單獨(dú)處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理 H9c2 細(xì)析高糖高脂單獨(dú)處理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H積累的影響，*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P理及高糖高脂聯(lián)合西格列汀處理心肌 H9c2 細(xì)胞 24h，對*與 Con 組相比，P <0.05，#與 HP 組相比，P <0.05。汀對高糖高脂環(huán)境下心肌細(xì)胞內(nèi)自噬體形成的影記的自噬空泡表現(xiàn)為分布在細(xì)胞質(zhì)或核周空間中的不同點(diǎn)顯示：與 Con 相比，HP 組 MDC 陽性細(xì)胞所占比例降低，獨(dú)給予 Sit 組表達(dá)與 Con 組無明顯差異。見圖 3。由 Weste結(jié)果可見，HP 抑制 H9c2 細(xì)胞的自噬表達(dá)，Sit 則可以逆制。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]糖尿病心肌病發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 黃婭茜,王憲,孔煒.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2010(01)



本文編號：2901649