發(fā)布時間：2017-04-06 14:15

  本文關(guān)鍵詞：腎素抑制劑類化合物對人腎近端小管上皮細胞HK-2的毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腎素抑制劑是治療高血壓病的一種有效手段,對該類藥物/化合物進行腎細胞毒性研究,可以為研制該類藥物的安全性評價提供依據(jù)。本課題以人腎近端小管上皮細胞(HK-2)作為體外細胞模型,采用多種方法評價陽性對照物阿霉素和包括阿利吉侖在內(nèi)的24個腎素抑制劑類化合物對該細胞的毒性效應(yīng)。采用刃天青試驗檢測化合物對細胞存活率/線粒體代謝活性的影響,測定細胞外乳酸脫氫酶(LDH)含量檢測化合物致細胞膜損傷,測定細胞內(nèi)Caspase-3和Caspase-7蛋白活性檢測化合物致細胞凋亡,使用熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)磷脂質(zhì)化。陽性對照物阿霉素作用HK-2細胞的結(jié)果表明,阿霉素對HK-2細胞有明顯的毒性作用,細胞外LDH活性、細胞內(nèi)Caspase蛋白活性與細胞的存活率/代謝活性負相關(guān)(R2=0.9854和R2=0.9904),胞內(nèi)Caspase蛋白活性和胞外LDH活性正相關(guān)(R2=0.9988),表明阿霉素可以誘導細胞內(nèi)磷脂質(zhì)蓄積,引起線粒體功能障礙,進而激活細胞凋亡程序,引起細胞壞死,從而表現(xiàn)出對HK-2細胞的細胞毒性作用。研究表明,阿利吉侖對HK-2細胞的存活率/線粒體的代謝功能沒有抑制作用,也不引起細胞的凋亡和細胞膜損傷,但可以誘導HK-2細胞發(fā)生輕微的磷脂質(zhì)化；23個腎素抑制劑類化合物中,化合物R397在高劑量下可以致HK-2細胞形態(tài)改變,發(fā)生嚴重磷脂質(zhì)化,對HK-2細胞的存活率/代謝活性有顯著抑制作用,但不引起細胞凋亡或細胞膜損傷。高劑量的R407可以抑制HK-2細胞的存活,引起細胞膜結(jié)構(gòu)損傷,致細胞死亡；R404和R438可以抑制細胞線粒體代謝活性；R421、R581和R585可以誘導HK-2細胞發(fā)生凋亡并引起細胞膜結(jié)構(gòu)損傷；R423、R425、R484和R522能引起細胞膜結(jié)構(gòu)損傷,但不影響細胞線粒體功能。高劑量的R423、R425和R522能誘導HK-2細胞發(fā)生嚴重磷脂質(zhì)化。其余化合物12個腎素抑制劑類化合物在HK-2細胞上,未顯示出對細胞存活和對細胞線粒體代謝功能的抑制,也不引起細胞的凋亡和細胞膜結(jié)構(gòu)破壞,但在高劑量下都可以誘導HK-2細胞發(fā)生和同劑量阿利吉侖相近或稍強于阿利吉侖的磷脂質(zhì)化。
【關(guān)鍵詞】：腎素抑制劑 HK-2細胞 細胞毒性 磷脂質(zhì)
【學位授予單位】：華東理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R96
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第1章 前言8-21
• 1.1 本課題的研究背景8-9
• 1.2 RAAS的主要機制和相關(guān)抗高血壓藥物9-16
• 1.2.1 RAAS的主要機制9-10
• 1.2.2 作用于RAAS的抗高血壓藥物10-16
• 1.3 體外模型在新藥安全性評價中的重要性16-18
• 1.4 體外腎毒性評價方法18-20
• 1.5 本課題研究的目的和意義20-21
• 第2章 腎素抑制劑類化合物對人腎HK-2細胞的毒性研究21-50
• 2.1 引言21-22
• 2.2 實驗方法22-26
• 2.2.1 細胞、試劑及儀器22
• 2.2.2 腎素抑制劑類化合物藥效檢測22-23
• 2.2.3 藥物處理細胞23
• 2.2.4 細胞活力檢測23
• 2.2.5 乳酸脫氫酶(LDH)含量檢測23-24
• 2.2.6 Caspase-3和Caspase-7蛋白活性檢測24
• 2.2.7 細胞磷脂質(zhì)化檢測24-25
• 2.2.8 統(tǒng)計方法25-26
• 2.3 結(jié)果與討論26-48
• 2.3.1 陽性對照物阿霉素對HK-2細胞的毒性實驗26-30
• 2.3.2 阿霉素誘導HK-2細胞毒性機制的探討30-32
• 2.3.3 腎素抑制劑類化合物體外藥效的實驗32-33
• 2.3.4 阿利吉侖對HK-2細胞的毒性實驗33-35
• 2.3.5 腎素抑制劑類化合物對HK-2細胞的毒性實驗35-48
• 2.4 結(jié)論48-50
• 參考文獻50-56
• 致謝56

【參考文獻】

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本文編號：289010