本文關(guān)鍵詞：腎素抑制劑類化合物對(duì)人腎近端小管上皮細(xì)胞HK-2的毒性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：腎素抑制劑是治療高血壓病的一種有效手段,對(duì)該類藥物/化合物進(jìn)行腎細(xì)胞毒性研究,可以為研制該類藥物的安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。本課題以人腎近端小管上皮細(xì)胞(HK-2)作為體外細(xì)胞模型,采用多種方法評(píng)價(jià)陽(yáng)性對(duì)照物阿霉素和包括阿利吉侖在內(nèi)的24個(gè)腎素抑制劑類化合物對(duì)該細(xì)胞的毒性效應(yīng)。采用刃天青試驗(yàn)檢測(cè)化合物對(duì)細(xì)胞存活率/線粒體代謝活性的影響,測(cè)定細(xì)胞外乳酸脫氫酶(LDH)含量檢測(cè)化合物致細(xì)胞膜損傷,測(cè)定細(xì)胞內(nèi)Caspase-3和Caspase-7蛋白活性檢測(cè)化合物致細(xì)胞凋亡,使用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞內(nèi)磷脂質(zhì)化。陽(yáng)性對(duì)照物阿霉素作用HK-2細(xì)胞的結(jié)果表明,阿霉素對(duì)HK-2細(xì)胞有明顯的毒性作用,細(xì)胞外LDH活性、細(xì)胞內(nèi)Caspase蛋白活性與細(xì)胞的存活率/代謝活性負(fù)相關(guān)(R2=0.9854和R2=0.9904),胞內(nèi)Caspase蛋白活性和胞外LDH活性正相關(guān)(R2=0.9988),表明阿霉素可以誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)磷脂質(zhì)蓄積,引起線粒體功能障礙,進(jìn)而激活細(xì)胞凋亡程序,引起細(xì)胞壞死,從而表現(xiàn)出對(duì)HK-2細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。研究表明,阿利吉侖對(duì)HK-2細(xì)胞的存活率/線粒體的代謝功能沒有抑制作用,也不引起細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞膜損傷,但可以誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞發(fā)生輕微的磷脂質(zhì)化；23個(gè)腎素抑制劑類化合物中,化合物R397在高劑量下可以致HK-2細(xì)胞形態(tài)改變,發(fā)生嚴(yán)重磷脂質(zhì)化,對(duì)HK-2細(xì)胞的存活率/代謝活性有顯著抑制作用,但不引起細(xì)胞凋亡或細(xì)胞膜損傷。高劑量的R407可以抑制HK-2細(xì)胞的存活,引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)損傷,致細(xì)胞死亡；R404和R438可以抑制細(xì)胞線粒體代謝活性；R421、R581和R585可以誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞發(fā)生凋亡并引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)損傷；R423、R425、R484和R522能引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)損傷,但不影響細(xì)胞線粒體功能。高劑量的R423、R425和R522能誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重磷脂質(zhì)化。其余化合物12個(gè)腎素抑制劑類化合物在HK-2細(xì)胞上,未顯示出對(duì)細(xì)胞存活和對(duì)細(xì)胞線粒體代謝功能的抑制,也不引起細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞,但在高劑量下都可以誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞發(fā)生和同劑量阿利吉侖相近或稍強(qiáng)于阿利吉侖的磷脂質(zhì)化。
【關(guān)鍵詞】：腎素抑制劑 HK-2細(xì)胞 細(xì)胞毒性 磷脂質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：華東理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 第1章 前言8-21
• 1.1 本課題的研究背景8-9
• 1.2 RAAS的主要機(jī)制和相關(guān)抗高血壓藥物9-16
• 1.2.1 RAAS的主要機(jī)制9-10
• 1.2.2 作用于RAAS的抗高血壓藥物10-16
• 1.3 體外模型在新藥安全性評(píng)價(jià)中的重要性16-18
• 1.4 體外腎毒性評(píng)價(jià)方法18-20
• 1.5 本課題研究的目的和意義20-21
• 第2章 腎素抑制劑類化合物對(duì)人腎HK-2細(xì)胞的毒性研究21-50
• 2.1 引言21-22
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法22-26
• 2.2.1 細(xì)胞、試劑及儀器22
• 2.2.2 腎素抑制劑類化合物藥效檢測(cè)22-23
• 2.2.3 藥物處理細(xì)胞23
• 2.2.4 細(xì)胞活力檢測(cè)23
• 2.2.5 乳酸脫氫酶(LDH)含量檢測(cè)23-24
• 2.2.6 Caspase-3和Caspase-7蛋白活性檢測(cè)24
• 2.2.7 細(xì)胞磷脂質(zhì)化檢測(cè)24-25
• 2.2.8 統(tǒng)計(jì)方法25-26
• 2.3 結(jié)果與討論26-48
• 2.3.1 陽(yáng)性對(duì)照物阿霉素對(duì)HK-2細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)26-30
• 2.3.2 阿霉素誘導(dǎo)HK-2細(xì)胞毒性機(jī)制的探討30-32
• 2.3.3 腎素抑制劑類化合物體外藥效的實(shí)驗(yàn)32-33
• 2.3.4 阿利吉侖對(duì)HK-2細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)33-35
• 2.3.5 腎素抑制劑類化合物對(duì)HK-2細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)35-48
• 2.4 結(jié)論48-50
• 參考文獻(xiàn)50-56
• 致謝56

【參考文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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本文編號(hào)：289010