目的:近年來,基因治療的發(fā)展非常迅速。RNA干擾(RNA interference,RNAi)是基因治療中最重要的發(fā)現(xiàn)之一,在治療腫瘤和病毒感染方面具有很大的使用潛力,得到了人們的廣泛關(guān)注。但是RNAi本身的一些理化性質(zhì)限制了小干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)的應(yīng)用,穩(wěn)定性較差,易被生物體內(nèi)的核酸酶降解,降低了siRNA的應(yīng)用效率;并且siRNA分子量較大,具有親水性和負電性,這些都影響了siRNA的跨膜轉(zhuǎn)運效果。因此,如何能夠?qū)iRNA成功地轉(zhuǎn)運至細胞質(zhì)中并發(fā)揮治療效果成為人們研究的熱點。在siRNA的應(yīng)用研究中,一個重要的目的就是能夠使siRNA成功穿透細胞膜,進入到細胞質(zhì)中發(fā)揮療效。因此,細胞穿膜肽(cell-penetrating peptides,CPPs)引起了人們的關(guān)注。細胞穿膜肽是由5-30個氨基酸按照一定的順序組成的兩性或陽性的短肽鏈。它能夠高效地穿過細胞膜,且能夠介導(dǎo)其它生物大分子(比如siRNA)進入細胞質(zhì)中,是目前研究較熱的藥物載體。本研究選用了具有類似穿膜肽性質(zhì)的八聚組氨酸(H8),它是由8個組氨酸分子反應(yīng)生成的一種陽性短肽,為了提高H8的穿膜效率,將H8與疏水基團(硬脂酸,SA)反應(yīng),合成SA-H8和SA-H8-PEG2000兩種陽性載體,將合成的載體通過靜電作用與siRNA結(jié)合,組成SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA納米復(fù)合物。通過測定納米復(fù)合物的電位、粒徑、凝膠阻滯能力考察SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA的理化性質(zhì),篩選出了SA-H8-PEG2000/siRNA和SA-H8-PEG2000n/siRNA的最佳處方配比。以MCF-7細胞和A549細胞為模型,考察載體與細胞之間的相互作用,評價細胞對載體藥物的攝取效率。方法:通過查閱文獻和試驗探索,確定了SA-H8和SA-H8-PEG2000兩種陽性載體材料的合成和純化方法。將sa和h8在室溫條件下攪拌反應(yīng)1h,用純凈水進行透析純化,直接凍干備用,即得目的產(chǎn)物sa-h8。將sa-h8與mpeg2000-mal溶液混合,避光反應(yīng)48h,用純凈水透析純化,即得產(chǎn)物sa-h8-peg2000。以制劑的粒徑、電位和瓊脂糖凝膠電泳行為為指標,考察制劑的理化性質(zhì),篩選出最佳處方配比。選擇mcf-7細胞和a549細胞為細胞模型,以流式細胞分析的方法測定細胞的熒光強度,通過熒光強度的強弱來判定細胞的攝取效率,以評價載體對sirna的轉(zhuǎn)染效率的貢獻。結(jié)果:將合成的產(chǎn)物進行質(zhì)譜分析,結(jié)果顯示合成得到sa-h8和sa-h8-peg2000兩種共軛物。以sirna作為模型效應(yīng)分子,通過室溫渦旋孵育的方法得到sa-h8-peg200020%/sirna、sa-h8-peg200050%/sirna和sa-h8-peg2000/sirna納米復(fù)合物。通過測定電位、粒徑以及凝膠阻滯試驗得到了納米復(fù)合物的理化性質(zhì)。sa-h8-peg200020%/sirna處方粒徑在200nm-700nm之間,且隨著n/p比的增加而變大。從瓊脂糖凝膠電泳的結(jié)果可以分析得到,當n/p比為80時,仍然能夠看到清晰的條帶,說明sirna未被完全包載,sa-h8-peg200020%對sirna的包載能力較差。sa-h8-peg2000的比例提高至50%之后,sa-h8-peg200050%/sirna處方粒徑在350nm-450nm之間。n/p比為80時,sirna被完全包載。sa-h8-peg2000/sirna處方粒徑在300nm-400nm之間,且粒度分布相對均勻,當n/p比大于或等于40時,實現(xiàn)sirna的完全包載。綜上所述,選擇sa-h8-peg200050%/sirna80:1和sa-h8-peg2000/sirna80:1作為最終處方。由流式細胞分析的結(jié)果可知:在a549與mcf-7細胞中,sa-h8-peg200050%/sirna和sa-h8-peg2000/sirna的細胞攝取率都隨著時間的推移而增大,呈現(xiàn)明顯的時間依賴性。sa-h8-peg200050%/sirna和sa-h8-peg2000/sirna兩種載體形式的細胞攝取率明顯高于游離sirna,但與市售制劑仍存在一定差距。結(jié)論:本研究所構(gòu)建的載體可以有效包載siRNA并顯著提高其細胞攝取水平。然而,為達到市售制劑的轉(zhuǎn)染能力,仍有必要對載體的處方、制備工藝進一步優(yōu)化和篩選。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R943
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
英文縮寫
引言
第一部分 八聚組氨酸載體材料的合成
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    討論
    小結(jié)
    參考文獻
第二部分 載核酸藥物納米復(fù)合物的制備以及表征
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    附表
    討論
    小結(jié)
    參考文獻
第三部分 納米復(fù)合物與細胞間的相互作用
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    附表
    討論
    小結(jié)
    參考文獻
結(jié)論
綜述 脂質(zhì)多聚復(fù)合物作為非病毒性基因載體的研究進展
    參考文獻
致謝
個人簡歷

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;既剛又韌的納米復(fù)合物[J];國外塑料;2004年08期

2 徐磊;謝書勝;鄒佩良;史謹燕;姜磊;;用于基因轉(zhuǎn)運和治療的多功能納米復(fù)合物的制備及應(yīng)用[J];遼寧化工;2010年06期

3 李偉;朱紅;;有機硅-無機硅納米復(fù)合物的制備及結(jié)構(gòu)表征[J];西安石油大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2008年03期

4 王偉;王玉;鄭楓;徐蘇穎;丁楊;周建平;;尿刊酸修飾殼聚糖載基因納米復(fù)合物的制備及體外性質(zhì)[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報;2011年06期

5 李小芳;馮小強;楊聲;;殼聚糖/銀納米復(fù)合物的制備及表征(英文)[J];材料科學(xué)與工程學(xué)報;2013年05期

6 陳義旺,聶華榮,諶烈,康燕鏜;接枝聚合制備具有超低介電常數(shù)聚酰亞胺納米復(fù)合物材料[J];高分子學(xué)報;2005年06期

7 趙金良;王振洋;張立德;;納米微粒母料—有機硅/無機硅納米復(fù)合物[J];化工新型材料;2006年01期

8 蔡積慶;;高性能嵌入電容元件用的最佳環(huán)氧-鈦酸鋇納米復(fù)合物[J];印制電路信息;2008年06期

9 周學(xué)懋;陳曉萌;吳學(xué)邦;水嘉鵬;朱震剛;;聚甲基丙烯酸甲酯/鎵納米復(fù)合物的動力學(xué)弛豫行為[J];物理學(xué)報;2011年03期

10 武志富;沈玉華;謝安建;黃方志;;Bi_2O_3/Al_2O_3納米復(fù)合物的聲化學(xué)合成及其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用[J];無機化學(xué)學(xué)報;2011年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 陳真真;智能響應(yīng)性納米載體的基因輸送與腫瘤治療的研究[D];蘭州大學(xué);2015年

2 劉莉;含c(RGDfk)環(huán)肽的自組裝納米復(fù)合物RPM/siRNA在腫瘤靶向治療中的應(yīng)用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

3 羅慶平;Al/Fe_2O_3-RDX納米復(fù)合物的反應(yīng)特性研究[D];北京理工大學(xué);2015年

4 陳美玲;石墨烯納米復(fù)合物的制備及其在生物成像中的應(yīng)用研究[D];東北大學(xué);2013年

5 劉媛媛;基于普魯蘭多糖的納米藥物遞送系統(tǒng)靶向抗肝癌作用研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

6 楊欣;石墨烯基納米復(fù)合物制備、表征及其電化學(xué)傳感性能研究[D];湖南大學(xué);2016年

7 王鑫巖;貴金屬/二氧化鈦納米復(fù)合物的光電性質(zhì)及光催化性能研究[D];吉林大學(xué);2017年

8 尚婷婷;載普魯士藍靶向納米復(fù)合物多模態(tài)顯像及綜合治療裸鼠乳腺癌的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2017年

9 李雪;含咪唑陽離子功能化聚合物及其納米復(fù)合物的制備與性能研究[D];浙江大學(xué);2012年

10 劉偉祿;新型納米復(fù)合物的制備及在電化學(xué)分析中的應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 李嘉琳;功能化石墨烯納米復(fù)合物及其生物小分子電化學(xué)實時傳感研究[D];西南大學(xué);2015年

2 黎青勇;纖維素基納米稀土發(fā)光復(fù)合材料的制備及發(fā)光性能研究[D];華南理工大學(xué);2015年

3 余波杰;可共載化療藥物和基因以協(xié)同增強其抗腫瘤功效的葉酸修飾兩親性殼聚糖納米載體[D];復(fù)旦大學(xué);2014年

4 季衛(wèi)東;近紅外光響應(yīng)的納米復(fù)合物的制備及其藥物控釋性能研究[D];蘇州大學(xué);2015年

5 盛仲夷;有機化改性蒙脫土的制備及其在聚合物中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2013年

6 柳素青;合成MTX/LDHs納米復(fù)合物的研究及其抗腫瘤效應(yīng)的探索[D];南京師范大學(xué);2015年

7 霍曉磊;MTX納米復(fù)合物的可控合成、組裝及其對腫瘤細胞的抑制作用研究[D];南京師范大學(xué);2015年

8 葉亞;碳載錫及其合金納米復(fù)合物的制備及儲鋰性能研究[D];南京師范大學(xué);2015年

9 王日明;鐵基氧化物降解DDT性能的研究[D];山東大學(xué);2015年

10 黃磊;氧化石墨烯基磁性熒光多功能復(fù)合納米材料的研究[D];重慶理工大學(xué);2015年

本文編號：2877213