發(fā)布時間：2020-10-31 18:38

　　 研究背景光動力療法(Photodynamictherapy,PDT)是一種聯(lián)合光、光敏劑和組織中氧分子,使用特定波長的激發(fā)光照射聚集在人體組織的光敏劑,在組織氧參與下發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)并產(chǎn)生大量單態(tài)氧和自由基,進(jìn)而對組織或其間的病原微生物選擇性殺傷以達(dá)到治療目的的技術(shù)。PDT因具有微創(chuàng)、療效確切和避免口服給藥的系統(tǒng)副作用等眾多優(yōu)點(diǎn)而在臨床上日益受到重視和廣泛應(yīng)用。PDT除了常用于尖銳濕疣的治療外,目前在其它疾病的治療應(yīng)用上也取得了確切療效,如:痤瘡[1]、銀屑病[2]、皮膚腫瘤[3]、甚至是皮膚美容[4]。5-氨基酮戊酸(Aminolevulinic acid hydrochloride,ALA)是第二代卟啉類光動力藥物,臨床應(yīng)用中具有療效好、選擇性高的等優(yōu)點(diǎn),相對于其他光動力藥物,皮膚刺激小、耐受性好,不易形成瘢痕,不影響重要組織器官的功能易愈合和無耐藥性,因此它已成為一些皮膚病藥物治療的重要手段[5,6]。5-氨基酮戊酸作用機(jī)制為藥物經(jīng)皮滲透后,經(jīng)一系列酶促作用產(chǎn)生強(qiáng)光敏作用的原卟啉Ⅸ(PpⅨ)而發(fā)揮藥效,但實際應(yīng)用中,5-氨基酮戊酸存在以下問題:ALA由于穩(wěn)定性不佳而需現(xiàn)用現(xiàn)配;目前在臨床上所用凝膠等劑型和ALA本身親水性的性質(zhì),易導(dǎo)致其經(jīng)皮滲透性不夠理想而需要長時間的封包;藥物由于無法有效進(jìn)入皮膚而嚴(yán)重影響臨床治療效果并造成大部分藥物的浪費(fèi),這些問題已經(jīng)嚴(yán)重影響ALA在皮膚光動力治療上的臨床應(yīng)用。經(jīng)皮藥物傳遞系統(tǒng),因為能避免肝臟首過效應(yīng)、肝腎毒性、胃腸道反應(yīng)等問題,從而有效提高生物利用度,但經(jīng)皮藥物傳遞系統(tǒng)在實際應(yīng)用中經(jīng)常遇到藥物難以吸收或吸收緩慢的問題,尤其是對于大分子藥物的經(jīng)皮吸收就更為困難,近年來新型速釋型經(jīng)皮給藥載體成為解決以上問題的希望,包括:納米乳、聚乳酸(PLA)等多聚物納米粒和脂質(zhì)固體納米粒等。但是,在促進(jìn)藥物經(jīng)皮滲透的同時,它們均因為自身缺陷得不到有效解決而無法真正應(yīng)用到臨床,如:納米乳制備無法避免添加高達(dá)≥30%濃度的表面活性劑,這存在潛在皮膚刺激性;某些多聚物成分應(yīng)用于不同的皮膚會出現(xiàn)不同反應(yīng),也就是說在安全性方面無法得到充分保證;固體脂質(zhì)納米粒穩(wěn)定性不夠理性等[7]。醇質(zhì)體是具有脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)的囊泡,由Touitou于2000年首次提出[8],醇質(zhì)體可包裹藥物經(jīng)皮滲透,是一種穩(wěn)定性好、包封率高的新型經(jīng)皮載體,并具有較好的皮膚屏障穿透性、無毒和無刺激等優(yōu)點(diǎn),因此,醇質(zhì)體具備成為經(jīng)皮光動力藥物載體的條件。ALA極性和不穩(wěn)定性是造成其經(jīng)皮滲透和臨床應(yīng)用不佳的重要原因,近些年,ALA衍生物的研發(fā)成為一個重要突破方向,目前,已經(jīng)成功研發(fā)出一些新的衍生物,如5-氨基酮戊酸己酯(HLA)和5-氨基酮戊酸甲酯(MLA)等。相關(guān)研究顯示ALA酯類衍生物較ALA更為穩(wěn)定,酯溶性也顯著優(yōu)于ALA,尤其是在皮膚中它較ALA可以產(chǎn)生更多的PpⅨ,這意味著更低的藥量就能在組織中產(chǎn)生相等治療量的PpⅨ,從而大大減少藥物使用量、降低PDT治療成本和減少治療副作用的產(chǎn)生[9]。本研究將較ALA親酯性更高的HLA和醇質(zhì)體相結(jié)合構(gòu)建HLA醇質(zhì)體,它有望為臨床提供一種起效更快、副作用更少的新型光動力藥物。研究目的研發(fā)新型的經(jīng)皮光動力藥物HLA醇質(zhì)體,并對其藥效學(xué)進(jìn)行實驗研究和評價。研究方法通過 CLSM 法分析 5-氨基酮戊酸己酯(Hexylaminolevulinate hydrochloride,HLA)、5-氨基酮戊酸(Aminolevulinicacidhydrochloride,ALA)和 5-氨基酮戊酸甲酯(Methylaminolevulinate hydrochloride,ML A)在皮膚中產(chǎn)生 PpⅨ的效能;采用Box-Behnken效應(yīng)面法篩選出制備HLA醇質(zhì)體最優(yōu)配方;通過外觀、粒徑、包封率和載藥率等對HLA醇質(zhì)體的理化性質(zhì)和質(zhì)量控制方法進(jìn)行研究;通過在體分析以及活體動物藥效學(xué)實驗對所制備的HLA醇質(zhì)體藥效學(xué)進(jìn)行研究。研究結(jié)果1.光動力藥物一HLA產(chǎn)生PpⅨ的效能研究CLSM觀察的平均熒光強(qiáng)度可視為不同時間三種藥物透皮后產(chǎn)生PpⅨ的量,三種藥物給藥2h和4h時,HLA均顯著優(yōu)于MLA和ALA(P0.01),MLA和ALA則無明顯差異(P0.05)。三種藥物對銀屑病小鼠進(jìn)行兩次光動力治療后,HE組織學(xué)染色可以發(fā)現(xiàn)HLA組的棘層細(xì)胞較MLA和ALA組薄,而免疫組化顯示HLA組中IL-6的表達(dá)較MLA和ALA組少。這表明HLA光動力治療銀屑病小鼠的效果顯著于MLA和ALA。2.HLA醇質(zhì)體制備及其質(zhì)量控制研究以最小粒徑為指標(biāo)進(jìn)行篩選,采用DesignExpert 8.0軟件,得出HLA醇質(zhì)體的最優(yōu)處方:無水乙醇體積分?jǐn)?shù)比31.31%,大豆磷脂質(zhì)量體積比為3%,超聲時間為3min(97.5W)。篩選最優(yōu)工藝方案中的歸一值取值為0.994,即預(yù)測值接近目標(biāo)值。HLA醇質(zhì)體外觀呈透明淡藍(lán)色液體,透射電鏡下觀察呈形態(tài)較均一的圓形或橢圓形結(jié)構(gòu)。平均粒徑為80.87±1.82nm,分散系數(shù)為0.31±0.032。包封率為 38.63±0.003%,載藥率為 82.85±0.004%。3.HLA醇質(zhì)體的在體實驗給藥1、2、3和4h時,0.5%HLA醇質(zhì)體組的平均熒光強(qiáng)度與0.5%ALA和5%ALA水溶液組相比均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。4.HLA醇質(zhì)體的藥效評價研究HE染色組織學(xué)結(jié)果顯示0.5%HLA醇質(zhì)體組的棘層細(xì)胞較0.5%ALA和5%ALA組薄;免疫組化組織學(xué)結(jié)果顯示0.5%HLA醇質(zhì)體組中IL-6的表達(dá)較0.5%ALA 組和 5%ALA 組少(P0.05)。研究結(jié)論1.光動力藥物效能研究表明:HLA較MLA和ALA在組織中能產(chǎn)生更多的PpⅨ;在銀屑病小鼠治療實驗中,HLA的治療效果較MLA和ALA顯著;2.HLA醇質(zhì)體的制備工藝顯示,Box-Behnken效應(yīng)面法篩選出來的最優(yōu)處方與預(yù)設(shè)目標(biāo)處方結(jié)果相符,證實該方法的可靠性和有效性;3.HLA醇質(zhì)體的理化性質(zhì)和質(zhì)量控制研究表明,HLA醇質(zhì)體為粒徑小、均一,淡藍(lán)色透明液體,包封率高,穩(wěn)定性好;4.HLA醇質(zhì)體的在體實驗表明:0.5%HLA醇質(zhì)體的經(jīng)皮滲透能力較0.5%ALA和5%ALA強(qiáng);5.HLA醇質(zhì)體經(jīng)銀屑病動物模型的藥效研究結(jié)果表明:0.5%的HLA醇質(zhì)體的治療效應(yīng)較0.5%ALA和5%ALA組更為顯著。
【學(xué)位單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R943;R96
【部分圖文】：

無明顯的鱗屑和增厚，第３天開始出現(xiàn)鱗屑，輕度增厚，紅斑繼續(xù)加重，第??４天至第６天紅斑加重、鱗屑增多和皮膚增厚，第７天紅斑加重、皮膚增厚，但??是鱗肩較第６天減少，見圖５－１?（Ｆｉｇｕｒｅ?５－１）。??，ｊ?｜Ｊｌ?ｊ??Ｉ．?Ｉｌｌ??圖５－１銀屑病建模圖片??標(biāo)注：圖片中Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ分別表示空白組、外涂咪喹莫特后第１、２、３、４、??５、?６、?７天??Ｆｉｇｕｒｅ?５－１?ｐｓｏｒｉａｓｉｓ?ｍｏｄｅｌｉｎｇ?ｐｉｃｔｕｒｅ??Ｎｏｔｅｓ：?Ａ，?Ｂ，?Ｃ，?Ｄ，?Ｅ，?Ｆ，?Ｇ?ａｎｄ?Ｈ?ｉｎ?ｔｈｅ?ｐｉｃｔｕｒｅ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?ｔｈｅ?ｂｌａｎｋ?ｇｒｏｕｐ?ａｎｄ?ｔｈｅ?ｆｉｒｓｔ，??ｓｅｃｏｎｄ，ｔｈｉｒｄ，?ｆｏｕｒｔｈ，?ｆｉｆｔｈ，?ｓｉｘｔｈ?ａｎｄ?ｓｅｖｅｎｔｈ?ｄａｙｓ?ａｆｔｅｒ?ａｐｐｌｙｉｎｇ?ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ．??５．２評估銀屑病模型模型??正常小鼠表皮和真皮的交界規(guī)則、無炎性細(xì)胞浸潤，銀屑病模型小鼠表皮??增厚和角化過度伴角化不全、棘層細(xì)胞肥厚向下突出和炎性浸潤，可見Ｍｕｎｒｏ??微膿腫，顯示建模成功結(jié)果見圖５－２?（Ｆｉｇｕｒｅ?５－２），免疫組化可看出銀屑病小鼠??模型的棕黃色染色區(qū)域較正常小鼠皮膚大，見圖５－３?（Ｆｉｇｕｒｅ５－３），銀屑病小鼠??１０??

（ＦｉｇＵｒｅ５－４），統(tǒng)計學(xué)有顯著差異性，這表明ＩＬ６與銀肩病有明顯相關(guān)性。??遍夢省、：．．．．，??圖５－２ＨＥ染色（２００Ｘ）??標(biāo)注：圖中Ａ：正常小鼠皮膚Ｂ：銀屑病模型小鼠皮膚??Ｆｉｇｕｒｅ?５－２?ＨＥ?ｓｔａｉｎｉｎｇ（２００Ｘ）??Ｎｏｔｅｓ：Ａ：?Ｎｏｒｍａｌ?ｍｏｕｓｅ?ｓｋｉｎ?Ｂ：?Ｐｓｏｒｉａｓｉｓ?ｍｏｄｅｌ?ｍｏｕｓｅ?ｓｋｉｎ??－－ｖ?；??…ｉ?．ｖ?．．?？??圖５－３免疫組化（２００?Ｘ）??１１??

圖５－２ＨＥ染色（２００Ｘ）??標(biāo)注：圖中Ａ：正常小鼠皮膚Ｂ：銀屑病模型小鼠皮膚??
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2864343