登革病毒(Dengue virus,DENV)引起的登革熱是一種急性傳染病。近年來,由于流動人口的增加以及全球變暖,登革熱的流行趨勢日益嚴(yán)重。登革熱被世界衛(wèi)生組織列入被忽視的熱帶病之一,至今無特異性抗登革病毒藥物上市。本研究首先選用利巴韋林作為陽性藥物,通過DENV-Ⅱluc~+病毒復(fù)制子檢測熒光素酶活性進(jìn)行化合物初步篩選,篩選到的有效化合物通過噬斑實(shí)驗(yàn)進(jìn)行復(fù)篩;再通過蛋白印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證化合物的有效性,最后采用MTT法檢測該化合物的細(xì)胞毒性,從而建立抗登革病毒體外藥物篩選模型。研究結(jié)果顯示利巴韋林抑制DENV-Ⅱ的EC_(50)為40.78±1.02μM,結(jié)果與其他報(bào)道接近,成功建立穩(wěn)定可靠的抗登革病毒體外藥物篩選模型。利用該模型篩選了807個化合物,發(fā)現(xiàn)阿茲夫定(Azvudine,FNC)具有良好的抗DENV-Ⅱ活性。其次對FNC、鹽酸阿茲夫定(Hydrochloride salt of azvudine,FNC-HCL)和三磷酸酯阿茲夫定(Triphosphate azvudine,FNC-TP)作用于DENV的體外抑制活性進(jìn)行研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn)FNC、FNC-HCL和FNC-TP抑制DENV復(fù)制的EC_(50)在25.42±6.70-0.54±0.29μM之間,同時測得陽性藥物利巴韋林抑制DENV-Ⅱ的EC_(50)為40.78±1.02μM。蛋白印跡實(shí)驗(yàn)及定量結(jié)果顯示FNC、FNC-HCL和FNC-TP均能抑制DENV E蛋白的表達(dá),并且顯著地抑制DENV病毒RNA的復(fù)制。說明F NC、FNC-HCL和FNC-TP在細(xì)胞水平和蛋白水平均能抑制DENV的復(fù)制,且抑制作用優(yōu)于利巴韋林,通過對FNC進(jìn)行分時給藥及分時撤藥實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)其作用于登革病毒RNA的合成階段。FNC有望成為抗登革病毒的候選藥物。最后對FNC的體內(nèi)抗登革病毒活性進(jìn)行研究。首先選用4-6周齡的BaBb/c小鼠腦內(nèi)注射接種DENV-Ⅱ_(D1090)病毒株,小鼠出現(xiàn)體重減輕、弓背、后肢癱瘓等癥狀,成功建立小鼠感染模型。BaBb/c小鼠感染DENV后,以每天2mg/kg的劑量灌胃給藥,發(fā)現(xiàn)FNC在感染DENV后的BaBb/c小鼠體內(nèi)治療效果欠佳。
【學(xué)位單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R965
【部分圖文】：

第 1 章 緒論1 登革病毒與登革熱1.1 登革病毒基因與結(jié)構(gòu)DENV 為黃病毒科黃病毒屬(Flavivirus)的重要成員，根據(jù)抗原性不同分為 4個血清型(DENVⅠ-Ⅳ)。黃病毒屬也包括西部尼羅河病毒、蜱傳腦炎病毒、基孔肯尼亞熱病毒、黃熱病病毒和日本腦炎病毒等[1]。DENV 基因全長約 10.7kb，是單股正鏈 RNA 病毒，含單一的開放閱讀框，依次編碼三種結(jié)構(gòu)蛋白和七種非結(jié)構(gòu)蛋白（Non-structural protein，NS）。其結(jié)構(gòu)蛋白包括衣殼蛋白（Capsid protein，C）、膜蛋白（Membrane Protein and its Precursorspr，M/PrM）和包膜蛋白（Envelopeprotein，E），非結(jié)構(gòu)蛋白包括 NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b 和 NS5蛋白[2](圖 1)。

大、白細(xì)胞數(shù)量減少等。登革出血熱（dengue hemorrhagic fever，DHF）是 DF的一種嚴(yán)重類型，臨床表現(xiàn)為高熱、嚴(yán)重出血、休克、血小板計(jì)數(shù)減少、血液濃縮，病死率高。同時伴有休克表現(xiàn)的登革出血熱稱為登革休克綜合征(dengueshock syndrome，DSS)[15]。1.2.2 登革熱流行情況DF 主要通過埃及伊蚊（Aedes aegypti）和白紋伊蚊（Aedes albopictus）傳播。DF 全球分布較廣，大致以 10℃等溫線為界，分布于熱帶及亞熱帶地區(qū)；多發(fā)于中南美洲、中部非洲、南亞及東南亞（圖 2）[16]。據(jù)估計(jì)，全球有 128 個國家，大約 39.7 億人有感染 DENV 的風(fēng)險(xiǎn)，約占世界人口的一半[17]。最近幾十年，全球登革熱的發(fā)病率急劇上升，估計(jì)每年有 3.9 億人口感染，其中有 9600 萬人被確診為不同嚴(yán)重程度的登革熱，超過 12 萬死亡[18]。

碩士學(xué)位論文 抗登革病毒藥物體外篩選模型的建立及 FNC 抗登革病毒的體內(nèi)外8 年，中國大陸共報(bào)告登革熱 655324 例，造成 610 人死亡[19]。據(jù)監(jiān)測系統(tǒng)統(tǒng)計(jì)中國從 2009 年到 2014 年，發(fā)病率范圍為每 10 萬人-3.4581，通報(bào) 52749 例登革熱病例和 6 例死亡病例（圖 3）[20]。近建、浙江、云南、臺灣等地區(qū)也分別發(fā)生暴發(fā)流行，并且有輸入性呈逐年増多的趨勢。這些暴發(fā)造成了巨大的社會經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 Jingjing Fan;Yi Liu;Zhiming Yuan;;Critical role of Dengue Virus NS1 protein in viral replication[J];Virologica Sinica;2014年03期

2 蔡俊榮;王裴;周旋;趙衛(wèi);;登革病毒感染動物模型研究進(jìn)展[J];中國人獸共患病學(xué)報(bào);2013年11期

3 劉媛媛,楊占秋,何靜,石麗橋,肖紅;MTT分析法、空斑減數(shù)法及CPE觀察法評估藥物體外抗病毒效果的比較與分析[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年02期

本文編號：2861052