靶向藥物遞送系統(tǒng)可將有效劑量的藥物分子運(yùn)輸至靶組織和靶細(xì)胞,但是在到達(dá)靶部位之前,藥物的“零釋放”是降低其毒副作用的關(guān)鍵。門控型智能藥物遞送系統(tǒng),旨在通過門控基團(tuán)使藥物在正常生理?xiàng)l件下處于穩(wěn)定包載狀態(tài)。而在腫瘤微環(huán)境(如低pH、高濃度谷胱甘肽、活性氧及酶等)或外源性因素(如磁場(chǎng)、超聲波和光等)刺激下,門控基團(tuán)脫落或改變實(shí)現(xiàn)藥物響應(yīng)性釋放。門控基團(tuán)包括聚乙二醇(Polyethylene glycols,PEG)~([1])、金納米粒~([2])、量子點(diǎn)~([3])、β-環(huán)糊精~([4])、ε-聚賴氨酸~([5])等。PEG作為門控基團(tuán)時(shí)具有以下兩個(gè)特點(diǎn):1.空間排斥效應(yīng):可堵塞致孔肽孔口。2.空間排斥效應(yīng)結(jié)合親水性能:可避免載藥系統(tǒng)被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(Reticuloendothelial system,RES)清除,增加載體在體內(nèi)的血液循環(huán)時(shí)間,利于載體富集至腫瘤部位。致孔肽是一種由多個(gè)氨基酸組成的線性肽,具有疏水性側(cè)鏈,可通過疏水性相互作用插入脂質(zhì)雙分子層中,形成促使藥物釋放的通路。改造后的致孔肽具有基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)特異性水解序列,因此具有酶敏感性。鑒于PEG和致孔肽的特點(diǎn),本文通過加成反應(yīng)將PEG連接至致孔肽,并將其修飾至脂質(zhì)體,以阿霉素(Doxorubincin,DOX)為模型藥物,構(gòu)建一種門控型納米藥物脂質(zhì)載體。通過薄膜水化法制備致孔肽-PEG共修飾的載DOX脂質(zhì)體。并對(duì)其粒徑、多分散系數(shù)和包封率進(jìn)行表征。使用Ⅳ型膠原酶進(jìn)行酶敏感性能評(píng)價(jià),利用人源乳腺癌細(xì)胞模型(MCF-7)進(jìn)行體外活性評(píng)價(jià)。試驗(yàn)表明,本文構(gòu)建的門控型載阿霉素脂質(zhì)體(D-PEG-1-LP-DOX)具有良好的酶敏感釋藥性能,對(duì)MCF-7細(xì)胞有較高體外活性,為后續(xù)細(xì)胞和體內(nèi)水平試驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。第一部分脂質(zhì)載體制備和表征目的:合成系列功能性聚合物,通過薄層色譜法(Thin layer chromatography,TLC)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程。制備致孔肽和PEG共修飾的載DOX脂質(zhì)體(D-PEG-LP-DOX),并對(duì)脂質(zhì)載體進(jìn)行表征。方法:將致孔肽與五種PEG衍生物合成系列功能性聚合物,反應(yīng)過程中定時(shí)點(diǎn)樣定量反應(yīng)液至同一GF 254硅膠板以監(jiān)測(cè)進(jìn)程。利用薄膜水化法制備D-PEG-LP-DOX,并進(jìn)行粒徑、PDI及包封率等方面的表征。結(jié)果:TLC監(jiān)測(cè)反應(yīng)結(jié)果為致孔肽與PEG完全反應(yīng),合成了目標(biāo)功能性聚合物。制備的脂質(zhì)載體外觀色澤均一,粒徑介于80~135 nm,PDI介于0.23~0.37,大部分制劑組包封率處于75~90%。結(jié)論:本試驗(yàn)成功制備了致孔肽和PEG共修飾的載阿霉素脂質(zhì)載體,制備方法簡單,重現(xiàn)性好。制備的脂質(zhì)體粒徑適宜,分布均勻,包封率較高,可用于后續(xù)試驗(yàn)。第二部分脂質(zhì)載體酶敏感性能評(píng)價(jià)目的:建立載體酶敏感釋藥的評(píng)價(jià)方法,篩選出具有明顯膠原酶敏感釋藥特性的載體類型。方法:采用透析法考察D-PEG-LP-DOX在膠原酶作用下的釋藥性能。利用酶標(biāo)儀測(cè)定DOX的熒光強(qiáng)度,應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算DOX濃度,并計(jì)算DOX累積釋放率,考察載體中DOX的釋藥情況。結(jié)果:構(gòu)建的系列脂質(zhì)載體均體現(xiàn)一定的膠原酶敏感釋藥性能,其中以D-PEG-1-LP-DOX的酶敏感性能最為顯著。D-PEG-1-LP-DOX在未加膠原酶前,6 h時(shí)累積釋放率僅為15.3%。加入膠原酶后,DOX釋放程度顯著提高,24 h時(shí)累積釋放率96%。結(jié)論:本部分建立了評(píng)價(jià)門控型載阿霉素脂質(zhì)載體的酶敏感性能方法,篩選出D-PEG-1-LP-DOX具有良好的酶敏感釋藥性能。第三部分脂質(zhì)載體體外活性初步評(píng)價(jià)目的:對(duì)構(gòu)建的脂質(zhì)載體進(jìn)行體外活性初步評(píng)價(jià)。方法:以MCF-7細(xì)胞評(píng)價(jià)構(gòu)建的D-PEG-LP-DOX。試驗(yàn)設(shè)置不同載藥脂質(zhì)體類型及膠原酶濃度,利用MTT法測(cè)定給藥后MCF-7細(xì)胞的存活率,初步評(píng)價(jià)載體的體外活性。結(jié)果:構(gòu)建的系列載體D-PEG-1~5-LP-DOX在膠原酶作用下可不同程度降低細(xì)胞存活率。其中D-PEG-1-LP-DOX組呈現(xiàn)出最高的體外活性。結(jié)論:本部分采用MTT法初步評(píng)價(jià)脂質(zhì)載體體外活性,篩選出D-PEG-1-LP-DOX組的酶敏感性能最高。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R943;R96
【部分圖文】：

門控型載阿霉素脂質(zhì)體原理示意圖

D-PEG-1~5薄層色譜圖

鹽酸阿霉素溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 李翔;張婧;王東凱;潘衛(wèi)三;;葉酸受體靶向多烯紫杉醇膜修飾脂質(zhì)體的抗腫瘤活性[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2013年07期

本文編號(hào)：2825265