食管癌是全球常見的腫瘤之一,五年生存率低,預(yù)后較差,缺乏有效的治療手段,且化療后易產(chǎn)生耐藥。因此,尋找針對(duì)食管癌有效的小分子藥物或篩選有效的分子標(biāo)志物迫在眉睫。胰腺導(dǎo)管癌是惡性程度最高的惡性腫瘤,由于缺乏明顯的早期癥狀,多數(shù)病人在初次診斷時(shí)已為中晚期或發(fā)生轉(zhuǎn)移,因此迫切需要篩選胰腺癌早期診斷的分子標(biāo)志物,以達(dá)到早診早治的目的。本論文第一部分揭示了新型微管去穩(wěn)定藥物對(duì)食管鱗狀細(xì)胞癌的抗腫瘤活性及作用機(jī)理。用三種新藥SL-3-19、SL-1-73和IG-105在5種食管癌細(xì)胞上的增殖抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,SL-3-19、SL-1-73和IG-105均能顯著抑制食管癌細(xì)胞增殖。通過免疫熒光和免疫印跡分析發(fā)現(xiàn),SL-3-19、SL-1-73和IG-105均可破壞食管癌細(xì)胞的成熟微管網(wǎng)絡(luò),抑制成熟微管的標(biāo)志分子AC-α-Tubulin表達(dá)。進(jìn)一步,選擇SL-3-19進(jìn)行深入機(jī)制探索。流式細(xì)胞分析發(fā)現(xiàn),SL-3-19可誘導(dǎo)細(xì)胞周期G2/M期阻滯,增加凋亡細(xì)胞比例。免疫印跡顯示SL-3-19可誘導(dǎo)Caspases家族分子的活化;而抑制抗凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2和ERK信號(hào)通路的p-ERK等分子的表達(dá),結(jié)果提示SL-3-19可通過誘導(dǎo)G2/M周期阻滯,下調(diào)抗凋亡蛋白表達(dá),促進(jìn)食管癌細(xì)胞凋亡,阻遏MEK/ERK增殖通路的活化。體內(nèi)外血管生成實(shí)驗(yàn)顯示3種藥物均能破壞腫瘤微血管,SL-3-19效果尤為突出。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)顯示SL-3-19和SL-1-73均可抑制移植瘤生長(zhǎng),SL-3-19作用較強(qiáng),且不造成裸鼠體重的顯著變化和臟器損傷。總體而言,SL-3-19具有較低的IC50值、顯著的體內(nèi)外抗增殖活性及抗血管生成作用,提示SL-3-19可能成為未來(lái)食管癌治療的候選藥物。論文第二部分證明了 GPC1是胰腺導(dǎo)管腺癌的重要標(biāo)志物。分析了來(lái)自癌癥基因組圖譜的178名胰腺導(dǎo)管腺癌患者的RNA測(cè)序數(shù)據(jù),發(fā)現(xiàn)GPC1 mRNA在正常胰腺組織中不表達(dá),而腫瘤組織中顯著高表達(dá)。啟動(dòng)子甲基化分析提示GPC1啟動(dòng)子區(qū)低甲基化造成其在胰腺癌組織中的重新表達(dá)。186例胰腺導(dǎo)管腺癌的免疫組化分析顯示,正常胰腺組織及癌旁組織中幾乎不表達(dá)GPC1,而59.7%(111/186)腫瘤組織中GPC1陽(yáng)性表達(dá),在早期腫瘤組織中GPC1的陽(yáng)性表達(dá)率為63.6%(34/55)。GPC1高表達(dá)與腫瘤低分化、較大的腫瘤直徑正相關(guān)。Kaplan-Meier分析顯示高表達(dá)GPC1與患者較短的總體生存時(shí)間顯著相關(guān)(P = 0.0028)。多因素分析顯示,GPC1是胰腺導(dǎo)管腺癌患者總生存時(shí)間的獨(dú)立危險(xiǎn)因素,風(fēng)險(xiǎn)比為1.82倍(= 0.0022)。結(jié)果提示,在胰腺癌腫瘤發(fā)生進(jìn)程中,異位表達(dá)的GPC1可作為胰腺癌早期診斷和不良預(yù)后的標(biāo)志,GPC1是一種非常有臨床應(yīng)用前景的標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。
【學(xué)位單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

為了進(jìn)一步分析３種藥物對(duì)食管癌細(xì)胞增殖能力的影響，我們選擇ＫＹＳＥ邋５１０逡逑與ＫＹＳＥ邋３０細(xì)胞觀察，采用０．０１、０．１、１、１０和２０邐的藥物梯度處理４８邋ｈ后，逡逑ＣＣＫ－８法檢狽Ｕ細(xì)胞活力。如圖１－２和圖１－３所示，三種ＭＴＡｓ藥物處理ＫＹＳＥ邋５１０逡逑與ＫＹＳ邋Ｅ邋３０細(xì)胞４８邋ｈ后，細(xì)胞增殖均被顯著抑制，且抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴效應(yīng)。逡逑ＳＬ－３－１９、ＳＬ－ｌ－７３邋與邋ＩＧ－１０５邋對(duì)邋ＫＹＳＥ邋５１０邋的邋ＩＣ５Ｑ邋分別為邋０．０４邋＿、２．０５邋＿邋和邋０．３２邋｜ｉＭ，逡逑對(duì)ＫＹＳＥ邋３０的ＩＣ５0值分別為０．０２邋＿１、５．３０邋和４．４６邐結(jié)果進(jìn)一步提示食管逡逑癌細(xì)胞對(duì)ＳＬ－３－１９較ＳＬ－１－７３和ＩＧ－１０５更為敏感。逡逑ＫＹＳＥ邋５１０（４８ｈ）逡逑ｎｓ邐＊＊＊逡逑２邐＇＊＊邐□邋ＳＬ－３－１９逡逑２１００１邋．邐３邐□邋ＳＬ－１－７３逡逑Ｉ邋８０－邋ｉ邋Ｉ邋＊邋ＩＧ＇１０５逡逑Ｉ邋６０－邋１邋Ｉ邋Ｉ邋＾逡逑°邐０．０１邐０．１邐１邋ｉ0邋２0逡逑Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ邋（ｐＭ）逡逑圖１－２邋ＫＹＳＥ邋５１０細(xì)胞對(duì)三種新型ＭＴＡｓ藥物的劑量依賴曲線逡逑采用不同濃度的ＳＬ－３－１９、ＳＬ－１－７３和ＩＧ－１０５處理ＫＹＳＥ邋５１０細(xì)胞４８ｈ后

為了研究３種藥物對(duì)食管增殖是否具有時(shí)間依賴性，選擇ＫＹＳＥ５１０細(xì)胞，采逡逑用０．５邋ｎＭ的３種藥物分別處理１２、２４、３６、４８和６０邋ｈ，ＣＣＫ－８法檢測(cè)３種藥物對(duì)逡逑ＫＹＳＥ邋５１０的時(shí)間依賴效應(yīng)。如圖１－４顯示，隨著３種藥物作用時(shí)間延長(zhǎng)，ＫＹＳＥ邋５１０逡逑細(xì)胞增殖能力越差，其中ＫＹＳＥ邋５１０細(xì)胞對(duì)ＳＬ－３－１９更敏感，處理４８邋ｈ時(shí)細(xì)胞存活逡逑率僅為２０％。與之前劑量依賴曲線聯(lián)合分析，可知３種藥物均可抑制食管癌增殖并逡逑對(duì)食管癌細(xì)胞呈現(xiàn)時(shí)間及劑量依賴效應(yīng)。結(jié)合上述圖表結(jié)果，后續(xù)主要選擇對(duì)抗增逡逑殖活性較高的ＳＬ－３－１９做研究，將ＳＬ－１－７３或ＩＧ－１０５作為陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)選擇食管逡逑癌細(xì)胞ＫＹＳＥ邋５１０或ＫＹＳＥ邋３０進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。逡逑３２逡逑

微管去穩(wěn)定藥物（ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅ－ｄｅｓｔａｂｉｌｉｚｉｎｇ邋ａｇｅｎｔｓ，邋ＭＤＡｓ）邋ＩＧ－１０５邋是邋ＳＬ－３－１９邋和逡逑ＳＬ－１－７３是的母體化合物［２］。ＫＹＳＥ邋５１０細(xì)胞經(jīng)免疫熒光染色后，在激光共聚焦顯微逡逑鏡下觀察藥物對(duì)食管癌細(xì)胞微管的影響。如圖１－５所示，未加藥對(duì)照組中ＫＹＳＥ邋５１０逡逑細(xì)胞微管以一種有序的方式排列，包繞在細(xì)胞核四周。當(dāng)使用三種藥物中的任何一逡逑種處理食管癌細(xì)胞６ｈ后，隨著藥物濃度增加，完整的微管網(wǎng)逐步消失了。尤其是逡逑ＳＬ－３－１９組在２０邋ｎＭ時(shí)破壞效果十分顯著，而ＩＧ－１０５或ＳＬ－１－７３邋（１００邋ｎＭ）的活性逡逑較弱，這與之前二者具有較高ＩＣ５。值的結(jié)果一致。此外，圖１－６所示，采用１００ｎＭ逡逑ＳＬ－３－１９與ＩＧ－１０５處理ＫＹＳＥ邋３０細(xì)胞，微管破壞也非常明顯。逡逑３３逡逑

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本文編號(hào)：2821896