發(fā)布時(shí)間：2020-08-31 19:19

　　 化療作為晚期癌癥的主要治療手段,其有效性與安全性仍舊是廣大學(xué)者目前極為關(guān)心的科學(xué)問題。由于人體組織的復(fù)雜性,單一的智能遞藥系統(tǒng)很難突破多重生物屏障發(fā)揮藥效,而多功能仿病毒藥物遞送載體因其具有良好的靶向性和智能遞藥性而備受青睞。本課題基于結(jié)構(gòu)仿生及功能仿生的核心思想,充分利用腫瘤組織特殊的微環(huán)境,設(shè)計(jì)了一種多級響應(yīng)性仿病毒靶向藥物遞送系統(tǒng)---包含主動靶向、酶敏感、酸敏感及氧化還原敏感多級響應(yīng)逐步釋放的納米聚合物載體,靶向遞送抗腫瘤藥物多西他賽(Docetaxel,DTX),以期提高其靶向抗腫瘤效果。通過酰胺化反應(yīng)將MMP-2敏感的短肽修飾到帶負(fù)電的天然多糖透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)上作為親水外殼,然后利用化學(xué)反應(yīng)形成酸敏感性腙鍵,以氧化還原敏感的二硫鍵橋接DTX。采用透析法構(gòu)建具有核殼結(jié)構(gòu)的仿病毒智能納米藥物遞送系統(tǒng)聚合物前藥(HA-PLGLAG-Lys-DTX,HA-DTX),利用透析法制備該聚合物前藥膠束(HPLD)。一方面,以天然多糖HA作為仿病毒載體的親水衣殼,在延長體循環(huán)時(shí)間的同時(shí)HA亦可識別腫瘤組織表面高表達(dá)的CD44受體,主動靶向于腫瘤組織,然后在基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)的作用下脫去HA外殼,以二級納米粒子的形式胞吞進(jìn)入細(xì)胞。進(jìn)一步在溶酶體/內(nèi)涵體的酸性環(huán)境條件下通過質(zhì)子海綿效應(yīng)進(jìn)行溶酶體/內(nèi)涵體逃逸,隨后在細(xì)胞質(zhì)中高表達(dá)的谷胱甘肽酶還原酶條件的作用下二硫鍵斷裂,釋放DTX,從而提高其靶向抗腫瘤效果,以期可以特異性地殺死癌細(xì)胞,突破多種生理屏障,減少對正常組織的損傷。本課題通過核磁共振氫譜、時(shí)間飛行質(zhì)譜對兩親性聚合物前藥結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定;透射電鏡、激光粒度儀對膠束的形態(tài)及電位進(jìn)行表征,系統(tǒng)地研究了HPLD的體外釋藥行為、A549/DTX及A549細(xì)胞攝取、在腫瘤球的滲透和體內(nèi)外抗腫瘤活性。研究結(jié)果表明,HPLD為球形結(jié)構(gòu),粒徑253.2?8.1 nm,PDI=0.176。在腫瘤微環(huán)境的模擬條件下,其藥物釋放率顯著高于生理?xiàng)l件下的藥物釋放率。HPLD組的體外抗腫瘤活性IC_(50)為0.24μg/mL,較DTX降低45.3%,Annexin V-FITC/PI細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HPLD組具有較強(qiáng)的促凋亡能力,其在A549細(xì)胞中的細(xì)胞凋亡率為22%,而DTX組細(xì)胞凋亡率僅為9%。細(xì)胞攝取及腫瘤球滲透實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HPLD組較DTX組具有更好的入胞及滲透能力。A549異種移植腫瘤模型的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HPLD組腫瘤抑制率為80.1%高于DTX組的61.2%。同時(shí),組織學(xué)及免疫組化學(xué)分析結(jié)果顯示HPLD組較DTX組在小鼠的主要臟器心、肝、脾、肺、腎等組織中的炎癥反應(yīng)及出血現(xiàn)象輕微,且腫瘤組織部位出現(xiàn)大面積腫瘤細(xì)胞壞死。綜上,HPLD在A549荷瘤裸鼠體內(nèi)外抗腫瘤實(shí)驗(yàn)中均表現(xiàn)出良好的抗腫瘤效果,可有效降低DTX的全身性毒副作用,提高其靶向抗腫瘤效果。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R94
【部分圖文】：

圖 1.5 DTX-S-S-COOH 的1H NMR 圖譜，特征峰化學(xué)位移 δ：2.55 ppm (2H,-CH2-COO-)，2.95 ppm(-S-CH2-CH2-)Fig.1.51H NMR spectrum of DTX-S-S-COOH in CDCl3(400 MHz), δ：2.55 ppm (2H,-CH2-COO-)，2.95ppm (-S-CH2-CH2-)

1.6 DTX-S-S-COOH 的質(zhì)譜圖譜，分子離子峰（M/Z=1002.69[M+2H]+）與計(jì)算值一.1.6 MS spectrum of DTX-S-S-COOH, M/Z=1002.69 [M+2H]+was observed20180921-sun-4_180921091030 #73-74 RT: 0.61-0.62 AV: 2 NL: 6.81E6T: FTMS + p ESI Full ms [200.00-4000.00]90951001329.48

圖 1.8 pep-cbz 的質(zhì)譜圖譜，分子離子峰（M/Z=675.32[M+H]+）與計(jì)算值一致Fig.1.8 MS spectrum of pep-cbz, M/Z=675.32 [M+H]+was observeda

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本文編號：2809221