發(fā)布時(shí)間：2020-07-16 20:54

【摘要】：目的:隨著免疫缺陷綜合征(例如AIDS),器官移植患者和癌癥化療患者數(shù)量的增加,侵入性念珠菌感染的發(fā)病率顯著增加。深部真菌感染嚴(yán)重危害人類健康,特別是念珠菌屬感染,是導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)真菌血性感染的最主要病原體之一。目前,臨床有效抗真菌劑主要有多烯類、棘白菌素類和三唑類。然而,隨著抗真菌劑的廣泛使用,各種不良反應(yīng)和真菌耐藥性不斷出現(xiàn)。因此,新型抗真菌藥物的研發(fā)變得越來越緊迫。本研究設(shè)計(jì)合成新型多金屬氧酸鹽化合物,對(duì)其結(jié)構(gòu),組成和形貌進(jìn)行表征;選用常見病原真菌白色念珠菌、光滑白色念珠菌、克柔念珠菌和近平滑白色念珠菌等臨床分離菌作為受試菌株,以ATCC22019作為質(zhì)控菌株,以ATCC90028和ATCC750作為參考菌株,研究受試化合物的體外抑菌活性及其可能的機(jī)制。方法:利用掃描電鏡、透射電鏡、粉末X射線衍射、紅外光譜、元素分析和單晶X-ray衍射等研究受試化合物的結(jié)構(gòu)、組成和形貌;采用微量稀釋法、生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn),細(xì)胞增殖比色法和活死細(xì)胞染色法等研究其體外抗真菌作用;采用高效液相色譜法分析受試化合物對(duì)真菌細(xì)胞膜中麥角固醇含量的影響;采用實(shí)時(shí)定量PCR法檢測(cè)麥角固醇合成通路相關(guān)基因的表達(dá)。結(jié)果:1.成功合成了銀鎢磷酸納米粒子Ag_3PW_(12)O_(40),該納米粒子的結(jié)構(gòu)組成明確,十二面體形貌,平均粒徑為800 nm。2.成功合成了鋅氟康唑十釩酸鹽,分子式為Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)(FLC代表氟康唑,分子式為C_(13)H_(12)F_2N_(60))。X射線單晶衍射分析結(jié)果表明該化合物屬于單斜晶系,空間群為P2_(1/c),晶胞參數(shù)為a=16.983(2)?,b=17.773(2)?,c=20.033(3)?,α=90~o,β=110.3(4)~o,γ=90~o。3.Ag_3PW_(12)O_(40)和Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)·10H_2O對(duì)15株白色念珠菌、1株光滑念珠菌、1株克柔念珠菌、1株近平滑念珠菌、1株熱帶念珠菌的最小抑菌濃度MIC_(50)值范圍分別是2-32μg/m L和0.5-32μg/mL,MIC_(80)值分別是4-128μg/m L和1-128μg/mL。4.Ag_3PW_(12)O_(40)和Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)·10H_2O對(duì)臨床分離株的作用呈現(xiàn)明顯的劑效和時(shí)效關(guān)系。隨Ag_3PW_(12)O_(40)藥物濃度的增加,其體外抑菌活性逐漸增強(qiáng),在Ag_3PW_(12)O_(40)0 16μg/mL、32μg/m L和64μg/mL作用48 h后,抑制率分別是88.53%±0.05%、90.27%±0.12%和90.40%±0.25%。隨Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)·10H_2O藥物濃度的增加,其體外抑菌活性逐漸增強(qiáng),在Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)·10H_2O 8μg/m L、16μg/m L和32μg/m L作用48 h后,抑制率分別是94.81%±2.49%、97.27%±0.99%和98.17%±0.38%。隨著這兩種藥物的作用時(shí)間的延長(zhǎng),菌株的生長(zhǎng)增殖速度明顯下降。與氟康唑組相比,兩種受試化合物對(duì)菌株的抑制作用更強(qiáng)。5.Ag_3PW_(12)O_(40)納米粒子作用后的白色念珠菌臨床分離株HL963細(xì)胞膜中的麥角固醇含量是0.79±0.118 mg/m L,溶劑對(duì)照組中麥角固醇的含量是2.20±0.153 mg/m L,氟康唑組麥角固醇的含量是0.10±0.003 mg/mL,Ag_3PW_(12)O_(40)麥角固醇的抑制率是59.08%±7.23%,抑制了細(xì)胞生物膜上麥角固醇的生物合成。Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)·10H_2O作用后的白色念珠菌臨床分離株HL973細(xì)胞膜中的麥角固醇含量是0.60±0.028 mg/m L,溶劑對(duì)照組中麥角固醇的含量是7.46±0.01 mg/mL,氟康唑組麥角固醇的含量是4.30±0.01 mg/m L,Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)·10H_2O麥角固醇的抑制率是92.02%±0.22%,顯著抑制了細(xì)胞生物膜上麥角固醇的生物合成。6.Ag_3PW_(12)O_(40)納米粒子作用后,麥角固醇合成通路上的ERG27和ERG28基因表達(dá)水平與溶劑對(duì)照組相比無顯著差異(P0.05),ERG1、ERG7和ERG11的基因表達(dá)水平均顯著上調(diào)(P0.05),與對(duì)照組相比分別上調(diào)了1.91±0.19、2.08±0.29和1.45±0.17倍。Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)·10H_2O作用后,麥角固醇合成通路ERG1、ERG7、ERG11、ERG27和ERG28的基因表達(dá)水平均與溶劑對(duì)照組相比均顯著上調(diào)(P0.01),分別上調(diào)了18.11±0.96、11.19±0.47、14.39±3.06、8.07±1.19和9.19±0.28倍。結(jié)論:1.多金屬氧酸鹽Ag_3PW_(12)O_(40)和Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)的結(jié)構(gòu)明確,化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定,在體外具有抗念珠菌的作用。2.Ag_3PW_(12)O_(40)和Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)使念珠菌臨床分離株細(xì)胞膜上麥角固醇的含量顯著降低。3.Ag_3PW_(12)O_(40)和Zn_3(FLC)_6V_(10)O_(28)使麥角固醇合成通路上的基因的表達(dá)水平顯著上調(diào),表明兩種多金屬氧酸鹽可能通過對(duì)轉(zhuǎn)錄后水平的抑制或與固醇成分結(jié)合而抑制麥角固醇的合成。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R91

【參考文獻(xiàn)】

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