發(fā)布時間：2020-07-05 17:10

【摘要】：目的:探究心臟保護(hù)劑左卡尼汀(L-carnitine,L-CNT)對化療藥物多西他賽(Docetaxel,DTX)抑制肺癌細(xì)胞NCI-H520增殖作用的影響,并初步探索L-CNT影響DTX抗腫瘤作用的機(jī)制。方法:1.實(shí)驗(yàn)藥物濃度的確定采用MTT法分別測定不同濃度的L-CNT和DTX在24小時對NCI-H520細(xì)胞增殖活性的影響,根據(jù)MTT的結(jié)果確定實(shí)驗(yàn)所采用的L-CNT和DTX的作用濃度。其中L-CNT的濃度范圍為2.5、10、40、80μg·mL~(-1),DTX的濃度范圍為0.25、2.5、5、10、25、50、100、200μg·mL~(-1)。2.L-CNT對DTX抑制NCI-H520細(xì)胞增殖的影響將NCI-H520細(xì)胞分為四組進(jìn)行實(shí)驗(yàn),分別為對照組(Control)、L-CNT組、DTX組以及聯(lián)合用藥組(L-CNT+DTX)。采用MTT法檢測NCI-H520細(xì)胞增殖情況,倒置顯微鏡觀察各組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。3.L-CNT對DTX誘導(dǎo)NCI-H520細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期變化的影響采用Annexin V-FITC/PI雙染法經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測NCI-H520細(xì)胞凋亡情況,PI單染檢測細(xì)胞周期。4.L-CNT影響DTX在NCI-H20細(xì)胞中抗腫瘤作用的機(jī)制研究。采用Western blot法檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白p21、p53以及細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果:1.確定L-CNT和DTX的實(shí)驗(yàn)濃度MTT的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,L-CNT在2.5-80μg·mL~(-1)濃度范圍內(nèi),對NCI-H520細(xì)胞的增殖無明顯影響,各組間的細(xì)胞增殖率沒有統(tǒng)計學(xué)差異。而DTX在0.25-200μg·mL~(-1)濃度范圍內(nèi),對NCI-H520細(xì)胞增殖的抑制表現(xiàn)出明顯的濃度依賴性,且隨濃度的增加,抑制作用增強(qiáng)。DTX在24h的IC_(50)值為40μg·mL~(-1)。結(jié)合臨床患者L-CNT用藥劑量,確定L-CNT和DTX的實(shí)驗(yàn)濃度分別為80μg·mL~(-1)和40μg·mL~(-1),實(shí)驗(yàn)時間為24h。2.L-CNT能夠增強(qiáng)DTX對NCI-H520細(xì)胞增殖的抑制作用倒置顯微鏡下觀察結(jié)果顯示,Control組和L-CNT(80μg·mL~(-1))組的細(xì)胞間連接緊密,細(xì)胞輪廓清晰飽滿,兩組無明顯差別,DTX(40μg·mL~(-1))組細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、胞質(zhì)空泡化,細(xì)胞間隙變大,L-CNT(80μg·mL~(-1))+DTX(40μg·mL~(-1))組細(xì)胞間隙進(jìn)一步增加,細(xì)胞數(shù)量減少。MTT結(jié)果顯示,Control組和L-CNT(80μg·mL~(-1))組的增殖率無明顯變化。與DTX(40μg·mL~(-1))組相比,L-CNT(80μg·mL~(-1))+DTX(40μg·mL~(-1))組的增殖率由65.73±2.22%下降到54.4±1.67%(P0.05)。3.L-CNT通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期增強(qiáng)DTX對NCI-H520細(xì)胞增殖的抑制作用細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在24h,與Control組相比,L-CNT(80μg·mL~(-1))組、DTX(40μg·mL~(-1))組和L-CNT(80μg·mL~(-1))+DTX(40μg·mL~(-1))組的凋亡率沒有發(fā)生明顯變化。細(xì)胞周期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與Control組相比,L-CNT(80μg·mL~(-1))組細(xì)胞周期沒有發(fā)生明顯變化。DTX(40μg·mL~(-1))組細(xì)胞發(fā)生明顯的G2/M期阻滯,G0/G1期細(xì)胞比例由70.23±4.5%降低至11.52±0.89%,G2/M期細(xì)胞由11.11±2.48%升高至54.91±2.38%,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.001)。與DTX(40μg·mL~(-1))組相比,L-CNT(80μg·mL~(-1))+DTX(40μg·mL~(-1))組G0/G1期細(xì)胞比例由11.52±0.89%降低至3.98±0.42%,G2/M期細(xì)胞比例由54.91±2.38%升高至64.56±0.9%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4.L-CNT能夠增高周期相關(guān)蛋白的表達(dá)與Control組相比,L-CNT(80μg·mL~(-1))組p21、p53、Bax和Bcl-2在蛋白水平的表達(dá)上均無明顯差異;DTX(40μg·mL-1)組細(xì)胞的周期相關(guān)蛋白p21和p53在蛋白的表達(dá)水平上有顯著升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2無明顯變化。與DTX(40μg·mL-1)組相比,L-CNT(80μg·mL~(-1))+DTX(40μg·mL~(-1))組在周期相關(guān)蛋白p21和p53的表達(dá)上進(jìn)一步升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),凋亡相關(guān)蛋白Bax和Bcl-2的表達(dá)并未表現(xiàn)出明顯變化。結(jié)論:1.L-CNT(80μg·mL~(-1))在24h對NCI-H520細(xì)胞的增殖無明顯抑制作用,也不會誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。2.DTX(40μg·mL~(-1))在24h能夠抑制NCI-H520細(xì)胞的增殖,主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯來發(fā)揮作用,DTX(40μg·mL~(-1))在24h不會誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。3.L-CNT(80μg·mL~(-1))在24h能夠增強(qiáng)DTX(40μg·mL~(-1))對NCI-H520細(xì)胞增殖的抑制作用,其機(jī)制可能是通過上調(diào)p21和p53在蛋白水平的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生G2/M期周期阻滯來發(fā)揮作用。4.DTX(40μg·mL~(-1))在24h對NCI-H520細(xì)胞只表現(xiàn)為增殖的抑制作用,而不誘導(dǎo)凋亡。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R96
【圖文】：

****** P<0.001 VS Control圖1.1 不同濃度的DTX作用24h對NCI-H5220細(xì)胞增殖的影響（。mean±SD,n=3）*** P<0.001 VS Control1.2.2 不同濃度的 L-CNT 對 NCI-H520 細(xì)胞增殖的影響

40 95.36±2.5980 98.75±2.15圖1.2 不同濃度的L-CNT作用24h對NCI-H5220細(xì)胞增殖的影響（mean±SD,n=3）1.3 小結(jié)1. MTT 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在 0.25-200 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)，DTX 對 NCI-H520細(xì)胞的增殖均產(chǎn)生抑制作用，并且抑制作用隨濃度升高而增強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)選擇 DTX的濃度為 40 μg·mL-1（IC50）。2. 2.5-80 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)，L-CNT 對細(xì)胞增殖作用不明顯，且同對照組

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2742896