【摘要】：在臨床治療中,癌癥嚴重影響著人類的生命健康,臨床上的化療藥物對正常細胞具有毒副作用�？拱╇囊云鋸V譜性、速效性和不易產(chǎn)生耐藥性等特點而受到人們的廣泛重視。本課題以前期工作獲得的chensinin-1b為母肽,但其對MCF-7癌細胞的殺傷作用較低,因此利用不同碳鏈長度的脂肪酸對其序列中第17位賴氨酸殘基進行修飾,從而設(shè)計得到具有不同疏水性的類似物,并對其抗癌活性和機制進行研究。首先,通過CCK-8細胞活力實驗和LDH釋放實驗分析發(fā)現(xiàn)chensinin-1b脂肽的抗癌活性顯著增強,且相比于MCF-10A細胞,對MCF-7細胞有一定的選擇性,chensinin-1b、OA-C1b、LA-C1b和PA-C1b的IC_(50)分別為:115.8±3.1μM、59.09±10.11μM、46.09±3.82μM、30.95±1.84μM。通過RP-HPLC分析脂肪酸碳鏈長度的增加能夠增強chensinin-1b脂肽的疏水性,并且其抗癌活性也逐漸增強,這說明抗腫瘤活性與多肽的疏水性密切相關(guān)。通過Annexin V-FITC/PI實驗、臺盼藍染色實驗、MCF-7細胞對多肽的攝取實驗來探究chensini-1b脂肽對MCF-7細胞的抗癌機理。實驗結(jié)果表明,chensinin-1b脂肽無明顯誘導Annexin V-FITC單陽性。同時,chensinin-1b、OA-C1b、LA-C1b和PA-C1b均能夠被MCF-7細胞攝取并對細胞質(zhì)膜的完整性有影響,說明chensinin-1b系列脂肽殺死人乳腺癌MCF-7細胞的機理是與細胞質(zhì)膜的相互作用有關(guān)。為了研究chensini-1b脂肽抗癌的膜活性分子機制,使用流式細胞術(shù)檢測MCF-7細胞對PI的攝取情況,結(jié)果表明OA-C1b、LA-C1b和PA-C1b均能夠增強PI的攝取量,從而說明OA-C1b、LA-C1b和PA-C1b能夠增強細胞質(zhì)膜的通透性。通過掃描電子顯微鏡的方法對PA-C1b處理的MCF-7細胞質(zhì)膜表面形貌進行成像,結(jié)果表明PA-C1b使MCF-7細胞質(zhì)膜表面完整性被破壞、細胞質(zhì)膜表面出現(xiàn)孔洞、細胞質(zhì)膜崩解等特征。利用磷脂模擬腫瘤細胞質(zhì)膜、真核細胞質(zhì)膜的方法,通過色氨酸藍移實驗檢測chensinin-1b、OA-C1b、LA-C1b和PA-C1b與脂質(zhì)體的相互作用,結(jié)合CCK-8實驗說明chensinin-1b脂肽對癌細胞膜具有一定的選擇性。通過裸鼠荷瘤體內(nèi)實驗探究PA-C1b的體內(nèi)抗腫瘤活性,給荷瘤小鼠定期注射PA-C1b,觀察記錄PA-C1b對腫瘤生長的抑制情況。結(jié)果表明,PA-C1b對小鼠體內(nèi)腫瘤生長有抑制作用,PA-C1b具有體內(nèi)抗腫瘤活性。最后,通過構(gòu)建MSNs-NH_2@Cy7-PA-C1b@FA-GO納米靶向藥物遞送系統(tǒng)以提高chensinin-1b系列脂肽的穩(wěn)定性和靶向性。使用葉酸作為腫瘤靶向表分子,使用氧化石墨烯作為藥物遞送系統(tǒng)刺激-響應(yīng)控釋的“分子開關(guān)”。結(jié)果表明,MSNs-NH_2@Cy7-PA-C1b@FA-GO能夠被腫瘤細胞攝取,且在808 nm的近紅外照射下,Cy-7-PA-C1b能夠被控制釋放,在小鼠活體成像中具有一定的體內(nèi)靶向性。
【學位授予單位】：遼寧師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R943;R96
【圖文】：

chensinin-1b 脂肽對 MCF-7 細胞作用機理的研究及其腫瘤靶向刺激-響應(yīng)納米藥物遞送系統(tǒng)的構(gòu)建與應(yīng)用中，會激活共同誘導細胞死亡的受體�？拱╇目梢酝ㄟ^包括破壞線粒體膜的同時上調(diào)死亡受體途徑（death receptor pathway），速普肽（tachyplesin）共軛整合素 RGD 通過此途徑，包括凋亡基因配體（Fas ligand）、死亡域蛋白（floationg Point Addition，F(xiàn)ADD）和 caspase-8[34,35]。1.1.3.2 抗癌肽的非細胞膜破壞作用機理非細胞質(zhì)膜破壞機制也是抗癌肽抗腫瘤活性作用機制之一，包括靶向腫瘤細胞基因，與免疫調(diào)節(jié)相關(guān)等作用機制。在研究中，蜂毒肽（millitin），含有 26 個氨基酸多肽，能夠特異性導致細胞選擇性的破壞[36]，mellitin 能夠特異性的作用于 R 按時致癌基因過表達的腫瘤細胞上，使其磷脂酶 A2 被激活致使細胞選擇性死亡。在近期的研究中還發(fā)現(xiàn) alloferon 1 和 alloferon-2 具有免疫調(diào)節(jié)性質(zhì)[37]。通過對抗癌肽抗腫瘤細胞作用機理的研究，對抗癌肽的進一步研究和發(fā)展打下理論基礎(chǔ)。

圖 1.3 兩親性多肽的結(jié)構(gòu)模型[65]Figure 1.3 Stucture model of amphiphile peptides[65]2 通過構(gòu)建無機納米載體提高多肽藥物穩(wěn)定性通過使用生物相容性好和體內(nèi)穩(wěn)定的介孔二氧化硅等材料，裝載多肽藥物，可多肽藥物的保護。介孔二氧化硅藥物遞送系統(tǒng)在提高多肽穩(wěn)定性的同時可以被物大分子實現(xiàn)修飾。 腫瘤微環(huán)境與腫瘤靶向藥1 腫瘤微環(huán)境腫瘤微環(huán)境 (tumor microenvironment，TME) 即腫瘤所處的內(nèi)環(huán)境。腫瘤微環(huán)功能單元，其生物學功能貫穿腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。TME 的三大特征是缺氧，疫抑制[87]。缺氧信號出現(xiàn)在多種免疫抑制途徑中，腸道菌群 - 慢性炎癥免疫在信息交換�？梢钥闯觯琓ME 的三個特征彼此相關(guān)，形成復雜的機制網(wǎng)絡(luò)，腫瘤轉(zhuǎn)移。同時，TME 也阻礙了實體瘤免疫治療的發(fā)展和功效。 因此，探索境，開發(fā)腫瘤靶向藥物對腫瘤微環(huán)境的獨特性質(zhì)具有重要的臨床價值。

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本文編號：2725834