【摘要】：抗生素一直是治療細菌感染的關鍵藥物,然而病原體(特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌,MRSA)表現出對許多抗生素類藥物有耐藥性,本課題組分離鑒定出的多粘類芽孢桿菌J株對病原性細菌和植物病原性真菌有強烈的抑制作用,尤其是對多重耐藥性的金黃色葡萄球菌有很明顯的殺菌作用。本研究主要分離追蹤對MRSA有強烈殺菌作用的抗菌物質。為了獲得大量的抗菌物質,通過菌株的選育及單因素試驗和正交試驗對J株的發(fā)酵條件進行優(yōu)化,篩選出了最優(yōu)組:種齡18h、接種量6%、溫度32℃、初始pH為8、裝液量75mL、搖床轉速200r/min,培養(yǎng)24h后,獲得發(fā)酵粗提物是原始發(fā)酵產量的2倍,經過分離純化得到抗菌物質P1�？咕镔|P1的理化性質研究結果表明:該物質性質不穩(wěn)定極易分解而失去抗菌活性,受溫度影響最大、呈酸堿兩性,不同的溶劑對其活性有一定的影響,且制備固體時活性損失很大。抗菌物質P1抑菌作用研究結果表明:該物質對葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬和血鏈球菌有抑菌作用,并測定了最小抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC),最小殺菌濃度(Minimum bactericidal concentration,MBC)和殺菌曲線。抗菌物質P1對金黃色葡萄球菌、甲氧西林敏感性金黃色葡萄球菌(MSSA)、MRSA的MIC值都是64μg/mL和MBC值都是125μg/mL,其4×MIC將10~5~10~6CFU/mL濃度的菌體分別為8h、6h、8h全部殺死;對枯草芽孢桿菌的MIC和MBC分別是32μg/mL、64μg/mL,對蠟樣芽孢桿菌的MIC和MBC分別為125μg/mL、250μg/mL,對解淀粉芽孢桿菌的MIC和MBC分別為250μg/mL、500μg/mL,其4倍的MIC對三種芽孢桿菌10~5~10~6CFU/mL濃度的菌體分別為4h、12h、12h全部殺死;對血鏈球菌有抑菌作用其MIC500μg/mL,而對白喉桿菌沒有抑菌效果�？咕镔|P1抗菌效果測定的結果表明:抗菌物質P1對細菌的抗菌效果為殺菌作用�？咕镔|P1對細菌生物被膜形成的研究結果表明:抗菌物質P1對葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬和血鏈球菌的生物被膜形成有抑制作用,并且抗菌物質P1對葡萄球菌屬已形成的生物被膜具有溶解作用,使測試菌株MRSA、MSSA、金黃色葡萄球菌已形成的生物被膜減少35%以上。但是,10×MIC的抗菌物質P1對金黃色葡萄球菌兩個主要毒性因子α-溶血素(Hla)和殺白細胞素(PVL)生成沒有抑制作用。細胞毒性的研究結果表明:不同濃度的抗菌物質P1的細胞毒性與最大LDH釋放量有極顯著性差異,16μg/mL的抗菌物質P1的細胞毒性為1.2%;當抗菌物質P1濃度增大時,細胞毒性也隨之增大,250μg/mL的抗菌物質P1細胞毒性為6.5%。為了篩選J株中與抗菌物質P1相關的基因,以pRN5101和pIC333質粒等嘗試在J株中建立分子操作體系。但是,試驗沒有獲得陽性結果,通過J株生物信息學分析及文獻報道:J株有很完善的限制性修飾系統(tǒng),可以對甲基化和去甲基化的外源DNA都能進行酶切,這就使得在J株建立分子操作體系比較困難。綜上所述,通過對發(fā)酵技術的優(yōu)化提高了抗菌物質P1的產量,經過分離純化進一步研究抗菌物質P1的活性,并從分子水平初步探究了多粘類芽孢桿菌J株的分子操作工具,這為抗菌物質P1作為一種新型抗生素及結構解析奠定基礎,也為今后建立J株分子操作工具奠定基礎。
【學位授予單位】：西北大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R978
【圖文】：

第一章 緒論2 細菌耐藥性.1 細菌對抗生素的耐藥性細菌產生耐藥性是普遍的現象，在某些細菌中耐藥性的傳播主要是某種遺傳特征的播，細菌對某些特定抗生素具有先天固有耐藥性，或者是由于抗生素自身產生變異失活性和細菌為御防抗生素的作用，細菌通常從附近其他細菌通過基因的水平轉移而獲耐藥性基因（圖 1）[8]。此外，獲得耐藥性基因也可通過轉化和轉導等方式獲得遺傳。

圖 2 抗生素的失活和靶點的改變[12, 13]1.2.2 新型抗生素的開發(fā)病原菌對抗生素的耐藥性是 21 世紀人類面臨的最重要的健康挑戰(zhàn)之一，抗生素的過度使用和濫用，加上細菌的自然進化過程，導致了這場危機。在過去的 30 年里，抗生素的發(fā)展只有漸進式的進步[14-16]。但隨著抗菌藥物的廣泛使用和濫用，青霉素從最初的對金黃色葡萄球菌有效到目前出現多種抗生素耐藥性的金黃色葡萄球菌，臨床根據金

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 林茂茲;金美芳;鄒虹;;多粘類芽孢桿菌S960菌株發(fā)酵條件優(yōu)化[J];福建師大福清分校學報;2015年05期

2 閆冬;別小妹;陸兆新;呂鳳霞;趙海珍;張充;;多粘類芽孢桿菌JSa-9高產LI-F類抗菌脂肽突變株的選育[J];核農學報;2014年10期

3 李秀銀;王月兵;李明川;;抗生素的分類及治療原則[J];臨床合理用藥雜志;2012年28期

4 陳林;董兆麟;段康民;;一株具有抗菌作用的P. polymyxa sp.菌株的分離鑒定[J];西北大學學報(自然科學版);2011年06期

5 文鳳云;廖富

本文編號：2723163