【摘要】：抗生素一直是治療細(xì)菌感染的關(guān)鍵藥物,然而病原體(特別是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌,MRSA)表現(xiàn)出對(duì)許多抗生素類藥物有耐藥性,本課題組分離鑒定出的多粘類芽孢桿菌J株對(duì)病原性細(xì)菌和植物病原性真菌有強(qiáng)烈的抑制作用,尤其是對(duì)多重耐藥性的金黃色葡萄球菌有很明顯的殺菌作用。本研究主要分離追蹤對(duì)MRSA有強(qiáng)烈殺菌作用的抗菌物質(zhì)。為了獲得大量的抗菌物質(zhì),通過菌株的選育及單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)對(duì)J株的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化,篩選出了最優(yōu)組:種齡18h、接種量6%、溫度32℃、初始pH為8、裝液量75mL、搖床轉(zhuǎn)速200r/min,培養(yǎng)24h后,獲得發(fā)酵粗提物是原始發(fā)酵產(chǎn)量的2倍,經(jīng)過分離純化得到抗菌物質(zhì)P1�？咕镔|(zhì)P1的理化性質(zhì)研究結(jié)果表明:該物質(zhì)性質(zhì)不穩(wěn)定極易分解而失去抗菌活性,受溫度影響最大、呈酸堿兩性,不同的溶劑對(duì)其活性有一定的影響,且制備固體時(shí)活性損失很大�？咕镔|(zhì)P1抑菌作用研究結(jié)果表明:該物質(zhì)對(duì)葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬和血鏈球菌有抑菌作用,并測(cè)定了最小抑菌濃度(Minimum inhibitory concentration,MIC),最小殺菌濃度(Minimum bactericidal concentration,MBC)和殺菌曲線。抗菌物質(zhì)P1對(duì)金黃色葡萄球菌、甲氧西林敏感性金黃色葡萄球菌(MSSA)、MRSA的MIC值都是64μg/mL和MBC值都是125μg/mL,其4×MIC將10~5~10~6CFU/mL濃度的菌體分別為8h、6h、8h全部殺死;對(duì)枯草芽孢桿菌的MIC和MBC分別是32μg/mL、64μg/mL,對(duì)蠟樣芽孢桿菌的MIC和MBC分別為125μg/mL、250μg/mL,對(duì)解淀粉芽孢桿菌的MIC和MBC分別為250μg/mL、500μg/mL,其4倍的MIC對(duì)三種芽孢桿菌10~5~10~6CFU/mL濃度的菌體分別為4h、12h、12h全部殺死;對(duì)血鏈球菌有抑菌作用其MIC500μg/mL,而對(duì)白喉?xiàng)U菌沒有抑菌效果�？咕镔|(zhì)P1抗菌效果測(cè)定的結(jié)果表明:抗菌物質(zhì)P1對(duì)細(xì)菌的抗菌效果為殺菌作用。抗菌物質(zhì)P1對(duì)細(xì)菌生物被膜形成的研究結(jié)果表明:抗菌物質(zhì)P1對(duì)葡萄球菌屬、芽孢桿菌屬和血鏈球菌的生物被膜形成有抑制作用,并且抗菌物質(zhì)P1對(duì)葡萄球菌屬已形成的生物被膜具有溶解作用,使測(cè)試菌株MRSA、MSSA、金黃色葡萄球菌已形成的生物被膜減少35%以上。但是,10×MIC的抗菌物質(zhì)P1對(duì)金黃色葡萄球菌兩個(gè)主要毒性因子α-溶血素(Hla)和殺白細(xì)胞素(PVL)生成沒有抑制作用。細(xì)胞毒性的研究結(jié)果表明:不同濃度的抗菌物質(zhì)P1的細(xì)胞毒性與最大LDH釋放量有極顯著性差異,16μg/mL的抗菌物質(zhì)P1的細(xì)胞毒性為1.2%;當(dāng)抗菌物質(zhì)P1濃度增大時(shí),細(xì)胞毒性也隨之增大,250μg/mL的抗菌物質(zhì)P1細(xì)胞毒性為6.5%。為了篩選J株中與抗菌物質(zhì)P1相關(guān)的基因,以pRN5101和pIC333質(zhì)粒等嘗試在J株中建立分子操作體系。但是,試驗(yàn)沒有獲得陽性結(jié)果,通過J株生物信息學(xué)分析及文獻(xiàn)報(bào)道:J株有很完善的限制性修飾系統(tǒng),可以對(duì)甲基化和去甲基化的外源DNA都能進(jìn)行酶切,這就使得在J株建立分子操作體系比較困難。綜上所述,通過對(duì)發(fā)酵技術(shù)的優(yōu)化提高了抗菌物質(zhì)P1的產(chǎn)量,經(jīng)過分離純化進(jìn)一步研究抗菌物質(zhì)P1的活性,并從分子水平初步探究了多粘類芽孢桿菌J株的分子操作工具,這為抗菌物質(zhì)P1作為一種新型抗生素及結(jié)構(gòu)解析奠定基礎(chǔ),也為今后建立J株分子操作工具奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：西北大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R978
【圖文】：

第一章 緒論2 細(xì)菌耐藥性.1 細(xì)菌對(duì)抗生素的耐藥性細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性是普遍的現(xiàn)象，在某些細(xì)菌中耐藥性的傳播主要是某種遺傳特征的播，細(xì)菌對(duì)某些特定抗生素具有先天固有耐藥性，或者是由于抗生素自身產(chǎn)生變異失活性和細(xì)菌為御防抗生素的作用，細(xì)菌通常從附近其他細(xì)菌通過基因的水平轉(zhuǎn)移而獲耐藥性基因（圖 1）[8]。此外，獲得耐藥性基因也可通過轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)等方式獲得遺傳。

圖 2 抗生素的失活和靶點(diǎn)的改變[12, 13]1.2.2 新型抗生素的開發(fā)病原菌對(duì)抗生素的耐藥性是 21 世紀(jì)人類面臨的最重要的健康挑戰(zhàn)之一，抗生素的過度使用和濫用，加上細(xì)菌的自然進(jìn)化過程，導(dǎo)致了這場(chǎng)危機(jī)。在過去的 30 年里，抗生素的發(fā)展只有漸進(jìn)式的進(jìn)步[14-16]。但隨著抗菌藥物的廣泛使用和濫用，青霉素從最初的對(duì)金黃色葡萄球菌有效到目前出現(xiàn)多種抗生素耐藥性的金黃色葡萄球菌，臨床根據(jù)金

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 林茂茲;金美芳;鄒虹;;多粘類芽孢桿菌S960菌株發(fā)酵條件優(yōu)化[J];福建師大福清分校學(xué)報(bào);2015年05期

2 閆冬;別小妹;陸兆新;呂鳳霞;趙海珍;張充;;多粘類芽孢桿菌JSa-9高產(chǎn)LI-F類抗菌脂肽突變株的選育[J];核農(nóng)學(xué)報(bào);2014年10期

3 李秀銀;王月兵;李明川;;抗生素的分類及治療原則[J];臨床合理用藥雜志;2012年28期

4 陳林;董兆麟;段康民;;一株具有抗菌作用的P. polymyxa sp.菌株的分離鑒定[J];西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年06期

5 文鳳云;廖富

本文編號(hào)：2723163