發(fā)布時(shí)間：2020-06-20 13:16

【摘要】：肝細(xì)胞癌(HCC)是世界范圍內(nèi)非常常見的惡性腫瘤,死亡率高。栓塞治療對于人體的創(chuàng)傷較小,且操作簡單易行,安全可靠,目前已經(jīng)在臨床上廣泛應(yīng)用。大量乳酸表達(dá)引起的腫瘤微酸環(huán)境是影響肝癌栓塞治療療效、腫瘤轉(zhuǎn)移與再生的主要原因之一。有研究表明,在栓塞治療過程中,同步給予碳酸氫鈉注射液,可有效提高腫瘤的抑制率。本論文以常用藥用輔料乙基纖維素作為微球材料,采用油包油包固體(S/O/O)乳化-溶劑揮發(fā)法制備抗腫瘤藥物阿霉素和碳酸氫鈉共載乙基纖維素微球;以期在栓塞治療中,以腫瘤動(dòng)脈栓塞、化學(xué)藥物治療和腫瘤微環(huán)境改善三者產(chǎn)生的協(xié)同作用,顯著提高腫瘤栓塞治療療效,有效抑制腫瘤的生長,轉(zhuǎn)移和再生。以乙基纖維素為微球材料,采用油包油包固體(S/O/O)乳化-溶劑揮發(fā)法制備碳酸氫鈉微球。首先,采用溶劑擴(kuò)散法將碳酸氫鈉水溶液注射到乙基纖維素的乙腈溶液中,制備得到碳酸氫鈉納米混懸液。以碳酸氫鈉納米混懸液和大豆油為內(nèi)油相和外油相,采用S/O/O乳化-溶劑揮發(fā)法制備碳酸氫鈉微球;研究內(nèi)油相表面活性劑的種類、內(nèi)外油相體積比和乳化溫度對碳酸氫鈉微球的形態(tài)、平均粒徑與分布、載藥量和碳酸氫鈉體外釋放行為的影響,并優(yōu)化碳酸氫鈉微球的制備工藝。研究結(jié)果表明:采用吐溫80作為內(nèi)油相表面活性劑、內(nèi)外油相體積比為1/9、乳化溫度為25℃的制備工藝,所制備得到的碳酸氫鈉微球具有較高的載藥量,平均粒徑約為340μm,碳酸氫鈉能持續(xù)釋放48小時(shí)以上。在此制備工藝的基礎(chǔ)上,制備阿霉素碳酸氫鈉共載微球,所得微球的數(shù)均粒徑為252μm,碳酸氫鈉負(fù)載量為4.3%,阿霉素負(fù)載量為0.6%,碳酸氫鈉可持續(xù)釋放72小時(shí)以上,阿霉素能持續(xù)釋放28天以上。采用同樣的方法制備阿霉素微球,平均粒徑為230μm,阿霉素負(fù)載量為0.6%,阿霉素能持續(xù)釋放28天以上。采用兔肝癌細(xì)胞系VX2和人肝癌細(xì)胞系Bel-7402為模型細(xì)胞,四唑藍(lán)比色法考察微球材料的細(xì)胞毒性;以碳酸氫鈉微球(NaHC03-MS)和阿霉素微球(DOX-MS)為對照,四唑藍(lán)比色法和活細(xì)胞染色法考察阿霉素碳酸氫鈉共載微球(DOX/NaHC03-MS)的細(xì)胞毒性,同時(shí)考察阿霉素碳酸氫鈉共載微球與細(xì)胞共孵育之后對于細(xì)胞培養(yǎng)液pH的影響。研究結(jié)果表明:空白微球與細(xì)胞共孵育的濃度達(dá)到50 mg/mL時(shí),細(xì)胞的存活率仍然大于90%,表明空白微球?qū)τ赩X2細(xì)胞及Bel-7402細(xì)胞幾乎沒有毒性。碳酸氫鈉微球和阿霉素碳酸氫鈉共載微球與腫瘤細(xì)胞共孵育之后,對于培養(yǎng)液pH有顯著的影響,能使培養(yǎng)液pH提升至8.3左右,而阿霉素微球?qū)?xì)胞培養(yǎng)液pH無顯著影響。此外,碳酸氫鈉微球、阿霉素微球和阿霉素碳酸氫鈉共載微球?qū)δ[瘤細(xì)胞的增殖均有一定的抑制作用,其中阿霉素碳酸氫鈉共載微球表現(xiàn)出了最強(qiáng)的抑制效果。以兔肝癌細(xì)胞系VX2為模型細(xì)胞,采用四唑藍(lán)比色法考察乳酸在低糖環(huán)境中對于細(xì)胞存活率的影響,Annexin V-PI雙染法考察乳酸在低糖環(huán)境中對腫瘤細(xì)胞凋亡的影響。研究結(jié)果表明:當(dāng)培養(yǎng)液中葡萄糖的濃度為3mM時(shí),腫瘤細(xì)胞48小時(shí)的存活率為55%,當(dāng)加入20mM的乳酸之后,腫瘤細(xì)胞存活率提升至80%;此外,乳酸還能抑制腫瘤細(xì)胞在低糖環(huán)境中的凋亡,表明乳酸能使腫瘤細(xì)胞抵抗葡萄糖缺乏引起的死亡。采用兔肝癌細(xì)胞系VX2為模型細(xì)胞,在含有3mM葡萄糖和20mM乳酸的培養(yǎng)環(huán)境中,以碳酸氫鈉微球和阿霉素微球?yàn)閷φ?考察阿霉素碳酸氫鈉共載微球?qū)δ[瘤細(xì)胞的存活率、凋亡及培養(yǎng)液pH的影響。研究結(jié)果表明:阿霉素碳酸氫鈉共載微球能釋放碳酸氫鈉中和乳酸,使培養(yǎng)液pH上升至7.5左右,并對腫瘤細(xì)胞的增殖表現(xiàn)出最強(qiáng)的抑制效果。此外,AnnexinV-PI雙染法和JC-1檢測的結(jié)果都表明,相比于碳酸氫鈉微球和阿霉素微球,阿霉素碳酸氫鈉共載微球與腫瘤細(xì)胞共孵育之后,腫瘤細(xì)胞的凋亡與壞死最為顯著。綜上所述,采用油包油包固體(S/O/O)乳化-溶劑揮發(fā)法制備的阿霉素碳酸氫鈉共載微球,粒徑在250μm左右,能有效包載阿霉素和碳酸氫鈉,實(shí)現(xiàn)阿霉素和碳酸氫鈉的緩釋;并可有效改善腫瘤微環(huán)境中乳酸高表達(dá)所造成的微酸環(huán)境,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,有望應(yīng)用于肝癌的安全高效栓塞治療。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R943
【圖文】：

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碳酸氫鈉微球的處力＿N藝研究逡逑ｍｍｍ逡逑ｍｍｍ逡逑圖１．２碳酸氫鈉納米顆粒的掃描電鏡照片。逡逑Ｆｉｇ．邋１．２邋Ｓｃａｎｎｉｎｇ邋ｅｌｅｃｔｒｏｎ邋ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ邋ｉｍａｇｅｓ邋ｏｆ邋ｓｏｄｉｕｍ邋ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ邋ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ．逡逑Ｂｌａｎｋ邐４０１邋Ｔｗｅｅｎ邋２０逡逑５．邋３0邋５７９±１１２ｎｍ邐ｍ邐？邋３0邋３９５±１９２ｎｎｉ逡逑＾ｉ邋邐邋ｍＡ．逡逑１邐１０邐１００邐１０００邐１邐１０邐１００邐１０００逡逑Ｓｉｚｅ邋（ｄ邋ｒａｎ）邐Ｓ？？邋（ｄ邋ｎｍ）逡逑３０邋Ｔｗｅｅｎ邋６０邐３０邋Ｔｗｅｅｎ邋８０邐Ｊ逡逑５１０±１７２ｎｍ邐？邋２０邋４２０土邋Ｈ７ｎｍ逡逑Ｉ，。：邐ｉ｜ｌ邋！，邐ｌｒ逡逑ｉ｜｜｜ｉ邐｜ｊ｜逡逑Ｑ邋邋邋？邋＊？■？．？？？？？？？邋？邐＾邋Ｑ邋邋邋邋－？邋？—？—？？邋—邋＊－邐邐？—？—＊—？逡逑１邐１０邐１００邐１000邐１邐１０邐１００邐１０００逡逑Ｓｉ？邋（ｄ邋ｎｍ）邐Ｓｕｂ邋（ｄ邋ｎｍ）逡逑３0［邋ＰＥＧ邋４００邐ｔｔ｜邐＜0｜邋Ｆ－６８逡逑？２０ｆ邐３６０±１２７ｎｍ邐Ｔｒ邐ｇ邋３０邐３９４±７８ｎｍ邐｜－逡逑５：邐Ｉ逡逑邐0［邐邐晨…Ｉ邋—逡逑１邐ｉ0邐ｉ00邐ｉ000邐１邐１０邐１００邐１０００逡逑Ｓｉａ邋（ｄ邋ｎｍ）邐Ｓ？邋（ｄ邋ｎｍ）逡逑圖１．３碳酸氫鈉納米顆粒的數(shù)均粒徑與分布。逡逑Ｆｉｇ．邋１．３邋Ｓｉｚｅ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｓｏｄｉｕｍ邋

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