【摘要】：阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病,大量研究表明,β-淀粉樣蛋白(Amyloid β-protein,Aβ)在AD的發(fā)病過(guò)程中扮演著重要角色。米糠是稻米加工的主要副產(chǎn)物,含有蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素和礦物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分,并含有生育酚、生育三烯酚、Y-谷維素等多種活性成分,具有重要營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。目前研究認(rèn)為,米糠提取物(rice bran extracts,RBE)神經(jīng)保護(hù)作用主要?dú)w因于米糠中生育酚、生育三烯酚和γ-谷維素等活性成分的抗氧化特性;但富含γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)的米糠提取物是否具有神經(jīng)保護(hù)作用卻鮮有報(bào)道。本課題首先以富含GABA的米糠與普通米糠為原料制備提取物;其次,利用Aβ25-35損傷的PC12細(xì)胞及原代培養(yǎng)乳鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞,建立了 AD體外細(xì)胞模型;最后,選取普通米糠提取物為對(duì)照,觀察了富含GABA的米糠提取物的神經(jīng)保護(hù)效果,并初步探究了其神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。本研究主要包括兩個(gè)部分內(nèi)容:第一部分是富含GABA的米糠提取物對(duì)PC12細(xì)胞保護(hù)作用研究。利用Aββ25-35處理PC12細(xì)胞建立AD體外模型,并以RBE預(yù)孵育、共孵育或Aβ25-35損傷處理后孵育作為干預(yù)條件,觀察RBE對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)損傷的PC12細(xì)胞是否具有保護(hù)效果。結(jié)果表明,三種不同孵育方式均對(duì)PC12細(xì)胞具有保護(hù)作用,預(yù)孵育方式的干預(yù)濃度要低于共孵育及Aβ25-35損傷處理后再孵育的方式。第二部分是富含GABA的米糠提取物對(duì)原代培養(yǎng)乳鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用研究。利用Aβ25-35處理原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)細(xì)胞建立AD體外模型,探究RBE預(yù)孵育的保護(hù)作用及可能機(jī)制。結(jié)果表明,富含GABA的米糠提取物神經(jīng)保護(hù)效用優(yōu)于普通米糠,其機(jī)制與減輕細(xì)胞損傷、抑制凋亡、降低氧化應(yīng)激水平及改善線粒體功能有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96
【圖文】：

集成小團(tuán)簇狀生長(zhǎng)。以終濃度為５０ｎｇ／ｍＬ的ＮＧＦ誘導(dǎo)后，細(xì)胞停止分裂，并長(zhǎng)出類逡逑似交感神經(jīng)元樣的突起。隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞體積增大，突起增多并增長(zhǎng)，可逡逑形成網(wǎng)絡(luò)（圖３－２）。逡逑，’魏逡逑（ａ）邋ＰＣ邋１２邋ｃｅｌｌｓ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｉｎ邋ｎｏｍｉａｌ邋ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ；邋（ｂ）邋ＰＣ邋１２邋ｃｅｌｌｓ邋ｃｕｌｔｕｒｅｄ邋ｉｎ邋５０邋ｎｇ／ｍＬ邋ＮＧＦ邋ｆｏｒ邋４Ｘｈ逡逑圖３－２？（：１２細(xì)胞形態(tài)（１０（）＞＜）逡逑Ｆｉｇ．３－２邋Ｔｈｅ邋ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｓｈａｐｅｓ邋ｏｆ邋ＰＣ邋１２邋ｃｅｌｌｓ邋（１邋（）0ｘ邋）逡逑３．１．３不同濃度ＲＢＥ處理對(duì)ＰＣ邋１２細(xì)胞活性的影響逡逑以終濃度分R%為邋５０、１００、２００、４００、８００、１６００邋（ｐｇ／ｍＬ）的邋ＲＢＥ邋處理邋ＰＣ１２邋細(xì)逡逑１９逡逑

３．１．５邋ＲＢＥ共孵育對(duì)Ａｐ２５－３５致ＰＣ１２細(xì)胞損傷的影響逡逑采用不同濃度的ＲＢＥ與２０＾ｍｏｌ／ＬＡｐ２５－３５共孵育的方式處理細(xì)胞２４ｈ，觀察ＲＢＥ逡逑對(duì)受損ＰＣ邋１２細(xì)胞的保護(hù)作用。從圖３－５可以看出，與對(duì)照組比較，經(jīng)２０ｊｉｎｉｏｌ／ＬＡｐ邋２５－３５逡逑處理２４ｈ的ＰＣ１２細(xì)胞存活率顯著降低（Ｐ＜０．０５），提示ＡＤ模型建立成功；與Ａｐ２５－３５逡逑組比較，當(dāng)ＲＢＥ濃度為４００｜ａｇ／ｍＬ時(shí)，細(xì)胞存活率顯著提高，提高了邋１６．２５％（Ｐ＜０．０１）；逡逑隨著ＲＢＥ濃度的增加，細(xì)胞存活率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，ｌＯＯＯｐｇ／ｍＬ組細(xì)胞存逡逑活率最高，與Ａｐ邋２５－３５組比較，細(xì)胞存活率提高了邋２３．８３％邋（Ｐ＜０．０１）。因此，可選取逡逑１００（Ｈｉｇ／ｍＬ作為ＲＢＥ共孵育的適宜干預(yù)濃度。逡逑0邋１５０－逡逑Ｉ邐＊＊邋－邋＊＊邐？逡逑＾邐ｔ邋ｒ＾ｉ邋ｒ＾ｌ逡逑0邋１００－ｎ邐ｒ＾＼邐－ｒ逡逑■邐ｉ邋媝：：：：逡逑Ｉ邋５0－邐１逡逑｜邋ｉ逡逑ｃ；邋0ｉｉｉ，ｍ，ｎ，１１，１１，１逡逑ｄ、邐逡逑ＲＢＥ（Ｍｇ／ｍＬ）＋Ａｐ２５．Ｊ５逡逑圖３－５邋ＲＢＥ共孵育對(duì)Ａｐ２５．３；致ＰＣＩ邋２細(xì)胞損傷的影響逡逑Ｆｉｇ．３－５邋Ｅｆｆｅｃｔｓ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ邋ｏｆ邋ＲＢＥ邋ａｇａｉｎｓｔ邋ＡＰ２５－３５－ｉｎｄ

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本文編號(hào)：2716779