【摘要】：燒傷是最常見的創(chuàng)傷類型之一,主要治療手段包括傷口清創(chuàng)、外用藥物、敷料保護創(chuàng)面等,但深度燒傷治療過程繁瑣痛苦,且給患者帶來了較大的經(jīng)濟負擔。因此,開發(fā)新型局部外用制劑對治療深度燒傷仍有重要意義。表皮生長因子(EGF)是臨床上廣泛應(yīng)用的燒傷治療藥物,但其穩(wěn)定性差,對于深度燒傷和大面積潰瘍效果不佳。維甲酸是一種多功能外用藥,能促進結(jié)締組織新生,也用于治療難愈性傷口。研究表明,維甲酸能提高表皮生長因子受體(EGFR)和肝素結(jié)合性表皮生長因子(HB-EGF)的表達水平,與EGF聯(lián)用時能協(xié)同促進傷口愈合。因此,本論文分別制備了維甲酸柔性脂質(zhì)體與EGF陽離子柔性脂質(zhì)體,并進一步制備包含兩種柔性脂質(zhì)體的復(fù)方軟膏,以期在燒傷治療中發(fā)揮藥物的協(xié)同作用,顯著提高局部用藥療效,降低藥物毒副作用,加快傷口愈合,提高傷口愈合質(zhì)量。以卵磷脂為脂質(zhì)體膜材,吐溫80為膜軟化劑,采用薄膜分散法制備不同膜軟化劑含量的維甲酸柔性脂質(zhì)體。研究結(jié)果表明:不同處方的維甲酸柔性脂質(zhì)體粒徑均在100 nm以下,包封率大于99%,載藥量3%左右,藥物可持續(xù)釋放48小時以上;離體透皮與滯留的研究結(jié)果表明,與藥物溶液相比,維甲酸柔性脂質(zhì)體能顯著提高藥物的穩(wěn)態(tài)透皮速率和皮膚內(nèi)滯留量,具備良好的經(jīng)皮滲透能力。其中,采用含20%吐溫80處方制備的柔性脂質(zhì)體粒徑為48.10 nm,包封率99.84%,藥物可持續(xù)釋放48小時以上,與藥物溶液相比,皮膚內(nèi)藥物滯留量提高了 2.92倍,將其制成軟膏后仍具備良好透皮性能。以(2,3-二油酰基-丙基)-三甲胺(DOTAP)作為脂質(zhì)體膜材,吐溫80為膜軟化劑,采用薄膜分散法制備空白陽離子柔性脂質(zhì)體,再通過靜電共孵育制備EGF陽離子柔性脂質(zhì)體。研究結(jié)果表明:制得的EGF陽離子脂質(zhì)體粒徑僅16.00nm,包封率63.73%,藥物可持續(xù)釋放48小時以上;離體透皮與滯留的研究結(jié)果表明,與藥物溶液相比,EGF陽離子柔性脂質(zhì)體的皮膚內(nèi)藥物滯留量提高了 18.82倍,具備良好的經(jīng)皮滲透能力,將其制成軟膏后仍具備良好透皮性能。以人永生化表皮細胞系HaCaT為模型細胞,考察兩種柔性脂質(zhì)體的細胞毒性和促細胞增殖、遷移效果。細胞毒性結(jié)果表明:兩種空白柔性脂質(zhì)體的毒性較低,具有良好的生物相容性。細胞增殖研究結(jié)果表明:單用維甲酸柔性脂質(zhì)體在低濃度下有一定促細胞增殖效果,單用EGF陽離子柔性脂質(zhì)體有顯著促增殖效果,且兩種柔性脂質(zhì)體聯(lián)用顯示出良好的協(xié)同作用。細胞遷移研究結(jié)果表明:單用維甲酸柔性脂質(zhì)體對細胞遷移未有明顯促進作用,單用EGF陽離子柔性脂質(zhì)體有顯著促細胞遷移作用,且兩種脂質(zhì)體聯(lián)用時對細胞遷移有協(xié)同促進作用。制備包含兩種柔性脂質(zhì)體的復(fù)方軟膏,體外釋放的研究結(jié)果表明:藥物可持續(xù)釋放72小時以上,緩釋效果良好。離體透皮與滯留的研究結(jié)果表明,復(fù)方脂質(zhì)體軟膏仍表現(xiàn)出較高的穩(wěn)態(tài)透皮速率和皮膚內(nèi)滯留量,具備良好的透皮性能。建立大鼠深二度燒傷模型,考察復(fù)方柔性脂質(zhì)體軟膏對深二度燒傷創(chuàng)面的治療效果,并研究EGF與維甲酸聯(lián)用產(chǎn)生協(xié)同作用的機制。結(jié)果表明:復(fù)方柔性脂質(zhì)體軟膏能顯著加快深二度燒傷傷口表觀愈合;HE和Masson染色組織切片顯示復(fù)方柔性脂質(zhì)體軟膏促進了傷處皮膚附屬器的生成,使皮膚恢復(fù)了一定功能;免疫組化染色表明復(fù)方柔性脂質(zhì)體軟膏提高了傷處增殖細胞核抗原(PCNA)、角蛋白6(Keratin6)的表達水平,從而促進傷口處的細胞增殖、遷移;復(fù)方柔性脂質(zhì)體軟膏還提高了傷處羥脯氨酸的合成,從而促進膠原的合成。此外,酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)結(jié)果表明維甲酸顯著提高了傷處EGFR及HB-EGF等細胞因子的表達水平,以進一步增強EGF的促增殖作用,促進傷口快速愈合。綜上所述,制備得到的兩種柔性脂質(zhì)體及復(fù)方柔性脂質(zhì)體軟膏能有效包載維甲酸和EGF并實現(xiàn)藥物的緩釋。復(fù)方柔性脂質(zhì)體軟膏能有效發(fā)揮EGF和維甲酸的協(xié)同作用,促進細胞的增殖、遷移,從而加快燒傷傷口的愈合,提高傷口愈合質(zhì)量,有望成為一種治療燒傷等創(chuàng)傷的高效安全新手段。
【圖文】：

１．３．２維甲酸柔性脂質(zhì)體的包封率、載藥量逡逑采用超濾離心法分離脂質(zhì)體與游離藥物，ＨＰＬＣ測定柔性脂質(zhì)體的包封率和逡逑載藥量。維甲酸的ＨＰＬＣ標準曲線見圖１．２，維甲酸對超濾膜通透率見表１．３，各逡逑處方脂質(zhì)體的包封率、載藥量見表１．４。逡逑圖１．２的結(jié)果表明，維甲酸在０．１０ｐｇ／ｍＬ－１０．４0ｎｇ／ｍＬ的濃度范圍內(nèi)濃度與峰逡逑面積的線性關(guān)系良好，，滿足方法學(xué)要求。表１．３的結(jié)果表明，維甲酸對超濾膜的逡逑通透率高，各濃度回收率均在９０％以上，說明超濾膜對維甲酸的吸附較少。逡逑表１．４的結(jié)果表明，各處方維甲酸柔性脂質(zhì)體和傳統(tǒng)脂質(zhì)體的包封率均在９９％逡逑以上，載藥量為３％左右。由于維甲酸是難溶于水的藥物，親脂性較強，采用薄逡逑膜分散法制備時絕大部分藥物能夠插入鑲嵌在脂質(zhì)體的磷脂雙分子層中，故能得逡逑到較高包封率的脂質(zhì)體。但增大投藥量后，但制備得到的脂質(zhì)體極不穩(wěn)定，很快逡逑有藥物沉淀析出

Ｓｉｚｅ邋（ｄ邋ｎｍ）邐Ｓｔｚｅ（ｄｎｍ）逡逑圖１．１各處方維甲酸脂質(zhì)體的形態(tài)與粒徑分布逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｓｉｚｅ邋ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ＴＲＡ邋ｌｉｐｏｓｏｍｅ邋ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ．逡逑１．３．２維甲酸柔性脂質(zhì)體的包封率、載藥量逡逑采用超濾離心法分離脂質(zhì)體與游離藥物，ＨＰＬＣ測定柔性脂質(zhì)體的包封率和逡逑載藥量。維甲酸的ＨＰＬＣ標準曲線見圖１．２，維甲酸對超濾膜通透率見表１．３，各逡逑處方脂質(zhì)體的包封率、載藥量見表１．４。逡逑圖１．２的結(jié)果表明，維甲酸在０．１０ｐｇ／ｍＬ－１０．４0ｎｇ／ｍＬ的濃度范圍內(nèi)濃度與峰逡逑面積的線性關(guān)系良好，滿足方法學(xué)要求。表１．３的結(jié)果表明，維甲酸對超濾膜的逡逑通透率高，各濃度回收率均在９０％以上，說明超濾膜對維甲酸的吸附較少。逡逑表１．４的結(jié)果表明，各處方維甲酸柔性脂質(zhì)體和傳統(tǒng)脂質(zhì)體的包封率均在９９％逡逑以上，載藥量為３％左右。由于維甲酸是難溶于水的藥物，親脂性較強，采用薄逡逑膜分散法制備時絕大部分藥物能夠插入鑲嵌在脂質(zhì)體的磷脂雙分子層中
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R943

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 董曉東;鄧英杰;陳超;曹永倉;崔麗莉;王曉宇;;燈盞花素陽離子脂質(zhì)體的制備[J];中國新藥雜志;2010年12期

本文編號：2709597