【摘要】：Jaspine B是從海洋生物海綿中分離出來的天然化合物,并且對多種癌細胞具有良好的抗腫瘤活性。由于Jaspine B結(jié)構(gòu)的特殊性,許多Jaspine B衍生物被合成進行研究,并且發(fā)現(xiàn)針對部分癌細胞具有明顯的活性,能夠限制癌細胞的增殖生長,但是其抗癌機制探索不夠深入,而且針對胃癌細胞內(nèi)部信號通路研究比較少見。在本課題中,Jaspine B衍生物ZE-2化合物對胃癌細胞表現(xiàn)出明顯的生長抑制作用,主要探究本化合物怎樣抑制胃癌細胞增殖和其誘導胃癌細胞死亡的信號傳導過程。其結(jié)果如下:1.MTT實驗檢測到ZE-2抑制了胃癌細胞(MGC803、HGC27和SGC7901)的生長,其中抑制MGC803增殖現(xiàn)象最明顯,并且對正常的人胃上皮細胞GES-1沒有明顯的毒性。Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞術結(jié)果顯示,ZE-2誘導胃癌細胞發(fā)生細胞凋亡,并且蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測到促進凋亡執(zhí)行的蛋白表達被上調(diào)。2.用JC-1熒光探針檢測到ZE-2導致胃癌細胞(MGC803和HGC27)線粒體膜電位降低,蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測到促凋亡蛋白Bax的表達增加,抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL的表達降低,表明ZE-2通過線粒體內(nèi)部途徑誘導細胞凋亡。3.用倒置顯微鏡觀察ZE-2(2μM)處理MGC803 24 h細胞形態(tài)變化,發(fā)現(xiàn)細胞表面出現(xiàn)空泡化,具有豐富的小囊泡結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測到自噬相關蛋白LC3-II、Beclin-1、Atg3與Atg12的表達增加,表明ZE-2誘導了自噬。蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測到MAPK途徑中的JNK和ERK蛋白被磷酸化,以及JNK抑制劑SP600125和ERK抑制劑SCH772984可以逆轉(zhuǎn)ZE-2誘導的LC3-II蛋白質(zhì)表達。蛋白質(zhì)免疫共沉淀實驗結(jié)果顯示ZE-2可以使Beclin-1-Bcl-2/Bcl-xL蛋白復合物發(fā)生解離以及SP600125和SCH772984可抑制Beclin-1-Bcl-2/Bcl-xL復合體解離,以上結(jié)果表明ZE-2是通過JNK/ERK-Bcl-2/Beclin-1/Bcl-xL級聯(lián)反應誘導自噬。4.蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測到P62隨著ZE-2作用時間的延長不斷增加,由于P62結(jié)構(gòu)的特殊性,P62可與各種結(jié)合配體相互作用,并作為各種細胞信號轉(zhuǎn)導級聯(lián)的信號傳導中樞。蛋白質(zhì)免疫共沉淀檢測到當ZE-2(4μM)與MGC803共同孵育6 h時,P62與Keap1蛋白結(jié)合,Nrf2信號下游蛋白HO-1和NQO1都明顯增加,核質(zhì)分離實驗顯示隨著時間的增加Nrf2在細胞核中的表達量逐漸增加,并且在6 h達到最高值,然而其在細胞質(zhì)中的表達量逐漸降低,Nrf2染色免疫熒光實驗顯示了Nrf2集中分布在細胞核中,以上結(jié)果表明ZE-2在誘導胃癌細胞死亡過程中激活了Nrf2保護機制。5.探索P62-Nrf2途徑與凋亡之間的關系。蛋白質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果顯示JNK抑制劑SP600125和ERK抑制劑SCH772984可以降低由ZE-2誘導的P62與Keap1蛋白的結(jié)合,并且可以下調(diào)P62以及Nrf2下游蛋白HO-1和NQO1的表達,Annexin V-FITC/PI染色流式細胞術顯示SP600125和SCH772984增加了ZE-2誘導的細胞凋亡;蛋白質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果顯示自噬早期抑制劑LY294002降低了P62和HO-1的表達,MTT顯示LY294002降低了ZE-2誘導的細胞存活率,Beclin-1~(-/-)細胞株更加敏感,以及P62 siRNA可以進一步增強ZE-2所誘導的細胞死亡;蛋白質(zhì)免疫共沉淀結(jié)果顯示自噬晚期抑制劑BafA1使P62與Keap1蛋白結(jié)合程度增加,MTT實驗結(jié)果顯示BafA1可以限制ZE-2所誘導的細胞死亡。以上數(shù)據(jù)表明JNK/ERK誘導自噬的產(chǎn)生,可以使P62表達量增加后激活Nrf2信號通路,在一定程度上抑制細胞凋亡的發(fā)生。綜上所述,ZE-2通過線粒體內(nèi)部途徑誘導了胃癌細胞凋亡性死亡,同時通過JNK/ERK途徑誘導了胃癌細胞產(chǎn)生自噬現(xiàn)象,使P62蛋白表達量增加,進一步激活Nrf2信號通路抵御ZE-2所誘導的凋亡,但隨著時間的延長或者ZE-2濃度的增加,細胞凋亡程度不斷增強,胃癌細胞發(fā)生凋亡性死亡從而限制細胞的生存。
【圖文】：

用現(xiàn)在已被人們探索，并且發(fā)現(xiàn)作用，，但是其抗癌機制研究不夠較少見。本課題以胃癌細胞系為合成了目標化合物 ZE-2（圖 1.2）染法、免疫熒光法、流式細胞術及從細胞及分子方面，探索 ZE-2 對闡明其抗胃癌細胞作用機理，期的潛在藥物。圖 1.1 Jaspine B 的結(jié)構(gòu)

JaspineB的結(jié)構(gòu)
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R96

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 施莉;胡麗瑜;鐘定福;郭存果;施小英;;聯(lián)合靶向阻斷miR-29b/92b/106b抑制胃癌細胞生長及遷移[J];中國病理生理雜志;2018年11期

2 吳濤;段曉劍;田宇;陳海旭;徐志宏;劉靜;王衛(wèi)華;朱玲玲;王剛石;;低氘環(huán)境對胃癌細胞生長影響的體外實驗[J];中國應用生理學雜志;2017年01期

3 查郎;彭旭東;王子衛(wèi);;紡錘菌素抑制胃癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[J];基礎醫(yī)學與臨床;2017年05期

4 ;喝米酒能防胃癌[J];益壽寶典;2017年13期

5 ;常吃西紅柿能防治胃癌[J];家庭醫(yī)藥.快樂養(yǎng)生;2017年07期

6 ;養(yǎng)生月報[J];科學養(yǎng)生;2017年09期

7 劉菊香;成祥林;陳銘;;細胞因子誘導的殺傷細胞對胃癌細胞的殺傷作用的實驗研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年11期

8 張慧;劉理禮;王亞芳;張宏博;聶勇戰(zhàn);吳開春;樊代明;;缺氧在誘導胃癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲中的作用[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2013年04期

9 徐玲;張曄;曲秀娟;劉云鵬;李馨;李賀明;侯科佐;;�？颂婺崽岣呶赴┘毎麑δ[瘤壞死因子相關凋亡誘導配體的敏感性[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學;2013年06期

10 那迪;郭澎濤;徐巖;劉福囝;王振寧;邢承忠;徐惠綿;;胃癌細胞與腹膜間皮相互作進用促腹膜纖維化致腹膜轉(zhuǎn)移的研究[J];中國腫瘤臨床;2012年22期

相關會議論文 前10條

1 楊小強;季英蘭;周明;史有U

本文編號：2690044