【摘要】：生物毒素是一類由生物自身分泌代謝、半生物合成的有毒物質(zhì)~([1])。生物毒素的毒性較高,且容易出現(xiàn)在日常食用的食品內(nèi),能夠引起動物和人類的慢性或急性中毒。因此,控制食品中生物毒素類有害物質(zhì)對人類的健康是至關(guān)重要的。本文建立并優(yōu)化了不同食品基質(zhì)的樣品前處理方法以及檢測真菌毒素的液質(zhì)聯(lián)用方法(LC-MS/MS)。使用氣質(zhì)聯(lián)用方法(GC-MS)對不同血清型肉毒桿菌進行了初步代謝組學分析,旨在尋找新的鑒別肉毒桿菌不同分型的檢測手段。分別使用花生和植物油作為固體/半固體食品基質(zhì)和含油脂成分高的液體食品基質(zhì)的代表建立了食品的真菌毒素前處理方法。在建立固體/半固體食品基質(zhì)的樣品前處理方法時,要求能夠從復雜的食品基質(zhì)中提取多種真菌毒素,分別使用了加速溶劑提取法(ASE)和固相萃取法(SPE)對其進行提取和凈化。在建立含油脂成分高的液體食品基質(zhì)的樣品前處理方法時,主要雜質(zhì)為脂肪等大分子,因此使用了凝膠滲透色譜法(GPC)對液體食品基質(zhì)進行提取和凈化。此外,建立了正負離子模式同時定量檢測十種真菌毒素的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)分析方法。使用GC-MS代謝組學技術(shù)對兩種肉毒桿菌的代謝物進行了分析,尋找代謝差異物。1)加速溶劑提取法結(jié)果:在樣品填充過程中,需將樣品與硅藻土混合均勻能夠提高提取效率。使用四因素三水平實驗得到提取十種真菌毒素的最優(yōu)因素為,乙腈-水(80:20,V:V)為提取試劑,萃取時間5min,提取溫度100℃,循環(huán)次數(shù)為1次。2)固相萃取法結(jié)果:C18固相萃取小柱在進行條件優(yōu)化后,能夠凈化大部分目標物,然而黃曲霉毒素G2受基質(zhì)影響較大。比較了幾種固相萃取柱后,選擇了VRA-1型小柱,能夠降低基質(zhì)效應(yīng)的同時滿足了回收率的要求。3)凝膠滲透色譜法結(jié)果:乙酸乙酯-環(huán)己烷(50:50,V:V)為流動相,5m L/min的流速,收集15 min至40min洗脫液。4)液質(zhì)聯(lián)用方法結(jié)果:流動相為0.1%氨水-水-乙腈,進行梯度洗脫,質(zhì)譜檢測模式為多反應(yīng)檢測(MRM),正負離子模式同時對十種真菌毒素進行檢測。5)GC-MS結(jié)果:對得到的譜峰圖進行主成分分析(PCA)、最小二乘法判別分析(PLS-DA)以及方差分析(ANOVA),找到肉毒桿菌A與肉毒桿菌B有顯著差異的代謝物共十一種,大腸桿菌感受態(tài)與載入肉毒毒素A基因的大腸桿菌有顯著差異的代謝物共兩種。本文建立了檢測不同食品基質(zhì)中的十種真菌毒素的樣品前處理方法以及正負離子模式同時檢測十種真菌毒素的HPLC-MS/MS方法。目前歐盟、日本等國家食品標準中對各類黃曲霉毒素的總量有明確要求,而我國國家標準對油類物質(zhì)的標準中,僅對黃曲霉毒素B1規(guī)定了限量。本文中建立的樣品前處理方法能夠?qū)Ω鞣N食品基質(zhì)的樣品前處理方法提供依據(jù),尤其適用于油類食品中真菌毒素的提取與凈化。本文使用了GC-MS對能夠分泌肉毒毒素的兩種肉毒桿菌以及未載入與載入肉毒毒素A的大腸桿菌進行了代謝組學分析結(jié)合多元統(tǒng)計分析以及方差分析,得到具有顯著差異的代謝產(chǎn)物,可能成為判斷受污染食品的具體細菌毒素的細菌分型的新的檢測手段。
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軍事科學院碩士學位論文 HPLC-MS/MS 檢測食品中的毒素污染的食品品種眾多，由于各種食盡可能多的將目標真菌毒素從基質(zhì)中提最低。要求檢測方法具有高靈敏度、高性及定量分析。處理方法包括加速溶劑提取法（ASE）、法（GPC）。其中，加速溶劑提取法的原合適的溶劑，在高溫、高壓的情況下對

圖 2.2 SPE 原理示意圖含油脂成分較高的液體食品基質(zhì)，本章中使用了 GPC 作為其前提取與凈化一體，，很好地去除了樣品中的油脂、蛋白等大分子根據(jù)不同分子量的物質(zhì)在凝膠柱內(nèi)保留時間不同，對目標物進 GPC 收集時間進行優(yōu)化從而建立了一種適用于油脂成分高的液、花生油等的樣品前處理方法。多種真菌毒素的檢測方法，本章中選擇了集高效分離與高靈敏C-MS/MS 法。該方法的原理如圖 2.3 所示，樣品經(jīng)液相色譜梯后，進入質(zhì)譜離子源內(nèi)，根據(jù)結(jié)構(gòu)性質(zhì)的不同被電離成不同質(zhì)荷子以及碎片離子，碎片進入質(zhì)量分析器內(nèi)后，根據(jù) m/z 的大小本章中分別建立并優(yōu)化了液相條件以及質(zhì)譜條件，從而得到能同時檢測的方法。
【學位授予單位】：軍事科學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R99

【參考文獻】

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本文編號：2689063