【摘要】：生物毒素是一類由生物自身分泌代謝、半生物合成的有毒物質(zhì)~([1])。生物毒素的毒性較高,且容易出現(xiàn)在日常食用的食品內(nèi),能夠引起動(dòng)物和人類的慢性或急性中毒。因此,控制食品中生物毒素類有害物質(zhì)對人類的健康是至關(guān)重要的。本文建立并優(yōu)化了不同食品基質(zhì)的樣品前處理方法以及檢測真菌毒素的液質(zhì)聯(lián)用方法(LC-MS/MS)。使用氣質(zhì)聯(lián)用方法(GC-MS)對不同血清型肉毒桿菌進(jìn)行了初步代謝組學(xué)分析,旨在尋找新的鑒別肉毒桿菌不同分型的檢測手段。分別使用花生和植物油作為固體/半固體食品基質(zhì)和含油脂成分高的液體食品基質(zhì)的代表建立了食品的真菌毒素前處理方法。在建立固體/半固體食品基質(zhì)的樣品前處理方法時(shí),要求能夠從復(fù)雜的食品基質(zhì)中提取多種真菌毒素,分別使用了加速溶劑提取法(ASE)和固相萃取法(SPE)對其進(jìn)行提取和凈化。在建立含油脂成分高的液體食品基質(zhì)的樣品前處理方法時(shí),主要雜質(zhì)為脂肪等大分子,因此使用了凝膠滲透色譜法(GPC)對液體食品基質(zhì)進(jìn)行提取和凈化。此外,建立了正負(fù)離子模式同時(shí)定量檢測十種真菌毒素的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(HPLC-MS/MS)多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)分析方法。使用GC-MS代謝組學(xué)技術(shù)對兩種肉毒桿菌的代謝物進(jìn)行了分析,尋找代謝差異物。1)加速溶劑提取法結(jié)果:在樣品填充過程中,需將樣品與硅藻土混合均勻能夠提高提取效率。使用四因素三水平實(shí)驗(yàn)得到提取十種真菌毒素的最優(yōu)因素為,乙腈-水(80:20,V:V)為提取試劑,萃取時(shí)間5min,提取溫度100℃,循環(huán)次數(shù)為1次。2)固相萃取法結(jié)果:C18固相萃取小柱在進(jìn)行條件優(yōu)化后,能夠凈化大部分目標(biāo)物,然而黃曲霉毒素G2受基質(zhì)影響較大。比較了幾種固相萃取柱后,選擇了VRA-1型小柱,能夠降低基質(zhì)效應(yīng)的同時(shí)滿足了回收率的要求。3)凝膠滲透色譜法結(jié)果:乙酸乙酯-環(huán)己烷(50:50,V:V)為流動(dòng)相,5m L/min的流速,收集15 min至40min洗脫液。4)液質(zhì)聯(lián)用方法結(jié)果:流動(dòng)相為0.1%氨水-水-乙腈,進(jìn)行梯度洗脫,質(zhì)譜檢測模式為多反應(yīng)檢測(MRM),正負(fù)離子模式同時(shí)對十種真菌毒素進(jìn)行檢測。5)GC-MS結(jié)果:對得到的譜峰圖進(jìn)行主成分分析(PCA)、最小二乘法判別分析(PLS-DA)以及方差分析(ANOVA),找到肉毒桿菌A與肉毒桿菌B有顯著差異的代謝物共十一種,大腸桿菌感受態(tài)與載入肉毒毒素A基因的大腸桿菌有顯著差異的代謝物共兩種。本文建立了檢測不同食品基質(zhì)中的十種真菌毒素的樣品前處理方法以及正負(fù)離子模式同時(shí)檢測十種真菌毒素的HPLC-MS/MS方法。目前歐盟、日本等國家食品標(biāo)準(zhǔn)中對各類黃曲霉毒素的總量有明確要求,而我國國家標(biāo)準(zhǔn)對油類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)中,僅對黃曲霉毒素B1規(guī)定了限量。本文中建立的樣品前處理方法能夠?qū)Ω鞣N食品基質(zhì)的樣品前處理方法提供依據(jù),尤其適用于油類食品中真菌毒素的提取與凈化。本文使用了GC-MS對能夠分泌肉毒毒素的兩種肉毒桿菌以及未載入與載入肉毒毒素A的大腸桿菌進(jìn)行了代謝組學(xué)分析結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析以及方差分析,得到具有顯著差異的代謝產(chǎn)物,可能成為判斷受污染食品的具體細(xì)菌毒素的細(xì)菌分型的新的檢測手段。
【圖文】：

軍事科學(xué)院碩士學(xué)位論文 HPLC-MS/MS 檢測食品中的毒素污染的食品品種眾多，由于各種食盡可能多的將目標(biāo)真菌毒素從基質(zhì)中提最低。要求檢測方法具有高靈敏度、高性及定量分析。處理方法包括加速溶劑提取法（ASE）、法（GPC）。其中，加速溶劑提取法的原合適的溶劑，在高溫、高壓的情況下對

圖 2.2 SPE 原理示意圖含油脂成分較高的液體食品基質(zhì)，本章中使用了 GPC 作為其前提取與凈化一體，，很好地去除了樣品中的油脂、蛋白等大分子根據(jù)不同分子量的物質(zhì)在凝膠柱內(nèi)保留時(shí)間不同，對目標(biāo)物進(jìn) GPC 收集時(shí)間進(jìn)行優(yōu)化從而建立了一種適用于油脂成分高的液、花生油等的樣品前處理方法。多種真菌毒素的檢測方法，本章中選擇了集高效分離與高靈敏C-MS/MS 法。該方法的原理如圖 2.3 所示，樣品經(jīng)液相色譜梯后，進(jìn)入質(zhì)譜離子源內(nèi)，根據(jù)結(jié)構(gòu)性質(zhì)的不同被電離成不同質(zhì)荷子以及碎片離子，碎片進(jìn)入質(zhì)量分析器內(nèi)后，根據(jù) m/z 的大小本章中分別建立并優(yōu)化了液相條件以及質(zhì)譜條件，從而得到能同時(shí)檢測的方法。
【學(xué)位授予單位】：軍事科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R99

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2689063