發(fā)布時(shí)間：2020-05-30 22:50

【摘要】：目的:癌癥是現(xiàn)階段在全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率都處于較高水平的一類疾病,它的發(fā)生和發(fā)展嚴(yán)重危害著人類的生命健康。據(jù)報(bào)道,在全球范圍內(nèi)每年至少有一千萬(wàn)以上的人身患癌癥,其發(fā)病率和死亡率也在呈逐年上升的趨勢(shì)。目前臨床上治療癌癥的主要方法還是通過化療、放療等,鉑類、烷化劑和抗代謝類化學(xué)藥物在治療癌癥的同時(shí),也會(huì)給機(jī)體的正常細(xì)胞帶來(lái)嚴(yán)重且不可逆的傷害,嚴(yán)重影響了癌癥的治療效果,也給患者帶來(lái)很大的痛苦。因此,研發(fā)新型的、有效的且選擇性良好的抗腫瘤藥物,降低藥物的毒副作用,對(duì)于臨床癌癥患者的治療是刻不容緩的。白樺脂酸是一種存在于自然界多種植物中的五環(huán)三萜酸,具有十分廣泛的生物學(xué)活性,如抗炎、抗瘧疾、抗HIV等,近年來(lái),大量的實(shí)驗(yàn)研究表明白樺脂酸在抗腫瘤方面也具有良好的藥理活性。但是由于其水溶性較差,生物利用度不高,且在治療癌癥時(shí)對(duì)機(jī)體的正常細(xì)胞也有所傷害,選擇性較差,治療效果不是特別理想,因此,我們嘗試在白樺脂酸的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上進(jìn)行改造得到新的白樺脂酸衍生物,有望提高其水溶性和生物利用度,降低毒副作用,為臨床開發(fā)新的抗腫瘤藥物提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本研究設(shè)計(jì)并合成白樺脂酸衍生物zx-1和zx-2,體外檢測(cè)兩個(gè)化合物的抗腫瘤活性,對(duì)其抗腫瘤作用機(jī)制做初步探討。方法:1.白樺脂酸衍生物zx-1和zx-2的設(shè)計(jì)與合成2.采用MTT法檢測(cè)化合物zx-1和zx-2對(duì)多種癌細(xì)胞的抑制作用,設(shè)置對(duì)照組和空白組。3.在倒置顯微鏡下觀察經(jīng)化合物zx-1和zx-2作用后,非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和形態(tài)發(fā)生的變化,并拍照。4.通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)化合物zx-1和zx-2對(duì)A549細(xì)胞遷移的影響,在顯微鏡下觀察,取樣并拍照。5.運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)(Annexin V-FITC/PI雙染法)檢測(cè)經(jīng)化合物zx-1和zx-2作用后,A549細(xì)胞凋亡率的變化,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。6.運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)(PI單染法)檢測(cè)經(jīng)化合物zx-1和zx-2作用后,A549細(xì)胞周期分布的發(fā)生的改變,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的周期分布。7.Western blot方法檢測(cè)化合物zx-2作用后的A549細(xì)胞中的P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3幾種蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:1.合成并得到編號(hào)為zx-1和zx-2的白樺脂酸核苷衍生物。2.MTT法檢測(cè)結(jié)果表明,不同濃度的化合物zx-1和zx-2分別作用于非小細(xì)胞肺癌(A549)細(xì)胞、胃腺癌(SGC-7901)細(xì)胞、肝癌(LUC-7721)細(xì)胞、乳腺癌(MCF-7)細(xì)胞48 h后,對(duì)細(xì)胞均產(chǎn)生不同程度的抑制作用,其抑制作用具有明顯的劑量依賴性。3.通過顯微鏡下的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察可發(fā)現(xiàn),化合物zx-1和zx-2作用于A549細(xì)胞24 h后,細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,主要表現(xiàn)為細(xì)胞體積變小變圓,邊緣模糊化,細(xì)胞質(zhì)發(fā)生皺縮,呈現(xiàn)明顯的凋亡趨勢(shì)。4.通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),在顯微鏡下觀察可發(fā)現(xiàn),化合物zx-1和zx-2作用后的A549細(xì)胞與對(duì)照組相比,劃痕面積明顯增大,細(xì)胞向劃痕區(qū)域遷移的能力顯著降低,與對(duì)照組相比具有顯著性差異(P0.05)說明兩化合物均可抑制A549細(xì)胞的遷移。5.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,在化合物zx-1和zx-2作用于48 h后,A549細(xì)胞的凋亡率均出現(xiàn)明顯的提高,且隨著濃度提高,細(xì)胞的凋亡率也隨之增加,呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。由檢測(cè)結(jié)果也可知道,同等濃度條件下,化合物zx-2誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡的作用比zx-1顯著。6.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,在化合物zx-1和zx-2作用于48h后,A549細(xì)胞的細(xì)胞周期分布發(fā)生了明顯的變化,化合物zx-1作用于A549細(xì)胞后,可將細(xì)胞分裂阻滯于G0/G1期;經(jīng)化合物zx-2處理后,A549細(xì)胞的細(xì)胞分裂被阻滯于將S期,且其作用均呈現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。7.Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,化合物zx-2作用于A549細(xì)胞48 h后,細(xì)胞內(nèi)P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3幾種蛋白的表達(dá)均發(fā)生了變化。與對(duì)照組相比較,zx-2可以促進(jìn)Bax和Caspase-3蛋白的表達(dá),同時(shí)下調(diào)Bcl-2和P53蛋白的表達(dá),并且均呈現(xiàn)劑量依賴性。結(jié)論:白樺脂酸衍生物zx-1和zx-2能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖,能夠誘導(dǎo)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞凋亡壞死,調(diào)節(jié)細(xì)胞周期,抑制細(xì)胞的遷移,化合物zx-2能夠促進(jìn)Bax和Caspase-3蛋白的表達(dá),下調(diào)Bcl-2和P53蛋白的表達(dá),這些可能與化合物zx-1和zx-2發(fā)揮抗腫瘤作用的機(jī)制有關(guān)。
【圖文】：

`A：control group；B：20 mol/L group；C：40 mol/L group；D：60 group；E：80 mol/L group；F：100 mol/L group圖 1.2 不同濃度的化合物 zx-1 作用于 A549 細(xì)胞 48h 后細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)

A：control group；B：20 mol/L group；C：40 mol/L group；D：60 mogroup；E：80 mol/L group；F：100 mol/L group圖 1.3 不同濃度的化合物 zx-2 作用于 A549 細(xì)胞 48h 后細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R914;R96

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