【摘要】：本文建立銥(Ⅲ)配合物[Ir(ppy)_2(BTCP)]PF_6(Ir)的反相離子對高效液相色譜(HPLC)分析方法;采用低速-超速離心法分離脂質(zhì)體與未包封的藥物,建立脂質(zhì)體包封率和載藥量測定方法。測定Ir在pH 7.4的PBS緩沖溶液和不同濃度Tween-80溶液中的平衡溶解度,為設(shè)計脂質(zhì)體處方、確定工藝條件和體外釋放試驗提供參考依據(jù)。采用薄膜分散-超聲法制備銥(Ⅲ)配合物長循環(huán)脂質(zhì)體(Lipo-Ir),分別對磷脂的種類、磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、磷脂與Ir的質(zhì)量比、磷脂濃度以及其他工藝參數(shù)等影響因素進行考察。以包封率、載藥量和平均粒徑為指標,以磷脂與藥物質(zhì)量比(X_1)、磷脂與膽固醇質(zhì)量比(X_2)和磷脂濃度(X_3)為考察對象,采用3因素3水平的Box-Behnken設(shè)計優(yōu)化Lipo-Ir處方。所得最佳處方為:X_1=12.39:1,X_2=10.03:1,X_3=9.48mg/mL。最佳處方制備的脂質(zhì)體包封率為92.66±1.79%,載藥量為5.50±0.85%,粒徑為116.57±1.15nm,PDI值為0.19±0.02,Zeta電位為-10.66±0.61 mV。采用冷凍干燥技術(shù)制備銥(Ⅲ)配合物長循環(huán)凍干脂質(zhì)體(FD-Lipo-Ir),重點考察不同凍干保護劑對脂質(zhì)體的保護作用,確定最佳凍干保護劑處方為蛋黃磷脂:海藻糖:甘露醇=1:1:1(w/w)。凍干脂質(zhì)體水化后粒徑為154.20±2.57nm,PDI值為0.193±0.08,Zeta電位為-7.03±0.11mV,凍干前后脂質(zhì)體包封率無明顯變化,體外釋放行為與凍干前脂質(zhì)體相似,符合一級動力學方程,具有緩釋性。4℃儲存下FD-Lipo-Ir在3個月內(nèi)穩(wěn)定性良好。采用MTT比色法檢測Lipo-Ir對A549細胞的體外細胞毒性,結(jié)果顯示Lipo-Ir具有良好的抗腫瘤活性。利用AO/EB、Hoechst 33342染色觀察A549細胞凋亡形態(tài)的變化�；钚匝跛�(ROS)、線粒體膜電位和細胞內(nèi)鈣離子濃度檢測試驗表明,Lipo-Ir能升高細胞內(nèi)ROS水平,使線粒體膜電位去極化,并增大細胞內(nèi)鈣離子濃度。此外,Lipo-Ir可以使A549細胞周期阻滯在G0/G1期。綜合實驗結(jié)果推測Lipo-Ir通過ROS介導的線粒體凋亡途徑誘導A549細胞發(fā)生凋亡。本研究構(gòu)建的PEG修飾銥(Ⅲ)配合物脂質(zhì)體能夠在一定程度上豐富抗腫瘤金屬配合物新劑型制備的基礎(chǔ)理論,具有良好的研究和應(yīng)用前景,并為新型高效抗腫瘤藥物制劑的開發(fā)研制提供新思路。
【圖文】：

質(zhì)體(Lipo-Ir)至容量瓶中，用無水乙醇稀釋到適當濃度，以無水乙醇為空白溶液調(diào)零，在 200 ~ 400 nm 范圍內(nèi)掃描，確定 Ir 最大吸收波長，同時確認脂質(zhì)體中脂質(zhì)膜材料是否干擾紫外-可見分光光度法測定Lipo-Ir中Ir含量。結(jié)果見圖2-1。圖 2-1 紫外掃描圖譜（A：Lipo-Ir；B：Ir；C：Blank-Lipo）Fig. 2-1 The ultraviolet scanning spectrum (A: Lipo-Ir; B: Ir; C: Blank-Lipo)由圖 2-1 可知，Ir 和 Lipo-Ir 在 260 nm 波長處有最大吸收峰，在 385 nm 波長處有一弱吸收峰。在 Ir 最大吸收波長處脂質(zhì)體膜材料也有較大的吸收，干擾主藥的含量測定。而在主藥的第二吸收波長處，脂質(zhì)體膜材料雖無吸收，，但 Ir在此波長下吸光值也很小，需要較大濃度才可用紫外分光光度法測定，意義不大。因此，本文選用高效液相色譜法于 260 nm 波長處測定脂質(zhì)體中 Ir 含量。2.2.1.2 溶液的配制Ir 對照品溶液的配制 稱取 Ir 25 mg 置于 50 mL 容量瓶中，精密稱定，用無水乙醇溶解并定容至刻度

2-2 高效液相色譜圖（A:空白脂質(zhì)體溶液；B: Ir 對照品溶液；C: Lipo-Ir 供試品ig. 2-2 HPLC chromatogram (A: Blank liposomes solution; B: Ir reference solution; Ctest solution)2.1.5 線性范圍
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R943;R96

【參考文獻】

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本文編號：2688139