【摘要】：作為抗精神病藥物,匹莫齊特已被證實(shí)可抑制多種癌癥。以往的研究表明,匹莫齊特可以抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖。然而,尚未有研究表明匹莫齊特可能通過RAF/ERK信號(hào)通路抑制乳腺癌細(xì)胞增殖及其對(duì)乳腺癌細(xì)胞自噬的影響。目的:確定匹莫齊特是否通過RAF/ERK途徑發(fā)揮抗癌活性,并研究其是否通過誘導(dǎo)自噬進(jìn)而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡。方法:通過UALCAN和Kaplan-Meier數(shù)據(jù)庫篩選與乳腺癌預(yù)后相關(guān)的基因,并且利用Schrodinger軟件對(duì)接匹莫齊特與選定基因。通過4,5-二甲基噻唑-2-基-3,5-二苯基甲嗪(MTT)活力測(cè)定、克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、劃痕實(shí)驗(yàn)和transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了匹莫齊特對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響。使用JC-1分析檢測(cè)匹莫齊特對(duì)細(xì)胞線粒體膜電位的調(diào)節(jié)。基于吖啶橙/溴化乙錠(Acridine Orange and Ethidium Bromide,AO-EB)染色鑒定匹莫齊特誘導(dǎo)的凋亡期乳腺癌細(xì)胞。透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)和單丹磺酰尸胺(Monodansylcadaverine,MDC)染色用于觀察自噬體。FRET系統(tǒng)檢測(cè)到匹莫齊特對(duì)乳腺癌細(xì)胞中環(huán)磷酸腺苷(Cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的影響。使用蛋白質(zhì)印跡法以研究匹莫齊特對(duì)乳腺癌細(xì)胞凋亡和自噬相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果:匹莫齊特可抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞線粒體膜電位下降和凋亡。匹莫齊特通過下調(diào)RAF1和ERK 1/2的磷酸化抑制細(xì)胞增殖,同時(shí)誘導(dǎo)抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xl的表達(dá)降低,并促進(jìn)促凋亡蛋白Bax的上調(diào)和凋亡啟動(dòng)信號(hào)蛋白caspase-9的活化。然而Hippo通路的關(guān)鍵蛋白YAP/TAZ、MST1和MST2不受匹莫齊特的調(diào)節(jié)。匹莫齊特還通過上調(diào)cAMP促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的自噬水平,導(dǎo)致LC3-I向LC3-II的轉(zhuǎn)化增加和P62表達(dá)的下調(diào),但mTOR信號(hào)傳導(dǎo)不參與該過程。氯喹(CQ)阻斷乳腺癌細(xì)胞中的自噬后,匹莫齊特誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的活性降低。結(jié)論:這些數(shù)據(jù)表明匹莫齊特通過調(diào)節(jié)RAF/ERK信號(hào)通路抑制乳腺癌,并依賴于cAMP誘導(dǎo)的自噬促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的凋亡。這些結(jié)果表明匹莫齊特可能是治療乳腺癌的潛在藥物。
【學(xué)位授予單位】：大連大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R96

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3 范鳴;抗精神病藥匹莫齊特聯(lián)用發(fā)生藥物交互作用[J];藥學(xué)進(jìn)展;2000年02期

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本文編號(hào)：2682350