發(fā)布時(shí)間：2020-05-26 17:08

【摘要】：隨著抗生素的不當(dāng)使用,病原菌耐藥現(xiàn)象日益嚴(yán)重,多重耐藥在常見(jiàn)病原體中已頻繁出現(xiàn),因此,臨床需要不斷發(fā)現(xiàn)新的抗生素。昆蟲(chóng)共生微生物常位于昆蟲(chóng)腸道、外皮或者貯菌器中,并與宿主建立特殊的生存依賴(lài)關(guān)系,特殊的微小生境常導(dǎo)致共生微生物產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎的次級(jí)代謝產(chǎn)物。膜翅目昆蟲(chóng)共生放線菌常常產(chǎn)生抗真菌、抗細(xì)菌活性化合物,協(xié)助宿主或其幼蟲(chóng)抵御病原菌侵染,并為其食物提供保護(hù)作用。因此,膜翅目昆蟲(chóng)共生放線菌是新抗真菌、抗細(xì)菌活性天然產(chǎn)物的重要來(lái)源。角額壁蜂(Osmia cornifrons)為膜翅目切葉蜂科壁蜂屬營(yíng)獨(dú)居傳粉昆蟲(chóng),人工馴化的角額壁蜂常以蘆葦管為巢室,在巢穴中分小室產(chǎn)卵繁殖后代。本論文分別從煙臺(tái)和威海采集的角額壁蜂及其巢室分離放線菌,共計(jì)得到38株,采用16S rDNA基因序列分析及構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù),所得菌株分別屬于6個(gè)屬的放線菌:鏈霉菌屬(Streptomyces)26株,小單孢菌屬(Micromonospora)4株,諾卡氏菌屬(Nocardia)3株,珊瑚狀放線菌屬(Actinocorallia)1株,馬杜拉放線菌屬(Actinomadura)3 株和假諾卡氏菌屬(Pseudonocardia)1 株。分別采用菌塊對(duì)峙法和紙片擴(kuò)散法對(duì)38株放線菌及其發(fā)酵培養(yǎng)液進(jìn)行抗真菌、抗細(xì)菌活性篩選。其中Streptomyces sp.OC1403-4和Streptomyces sp.OC1403-6對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌均有較好的抗菌活性,抑菌圈達(dá)到了 14-18 mm,Streptomycessp.OC1401-2三種指示菌株的抑菌圈達(dá)到了 11-14 mm;Streptomyces sp.OC1611-8A和Streptomyces sp.R1706-8 對(duì)所有指示菌株均有活性,抑制直徑達(dá)10-25 mm。通過(guò)柱層析等方法對(duì)Streptomyces sp.OC1401-2、OC1611-8A和R1706-8代謝產(chǎn)物分別進(jìn)行分離,綜合利用波譜解析技術(shù)共鑒定了 9個(gè)化合物,包括手性霉素類(lèi)衍生物,倍半萜,酯類(lèi)和其他小分子。其中2個(gè)手性霉素類(lèi)衍生物,1個(gè)倍半萜和2個(gè)長(zhǎng)鏈酯類(lèi)化合物為新化合物,2個(gè)手性霉素類(lèi)衍生物命名為cornifronin A和B。鑒定出的化合物分別為3個(gè)手性霉素類(lèi)衍生物cornifronin A、cornifronin B、Antibiotic SW-B,1 個(gè)倍半萜 OC1611-ST03,2 個(gè)酯類(lèi)化合物 R1706-SH01、R1706-SH02和其他3個(gè)化合物tyrosol、thymine、uracil。對(duì)手性霉素類(lèi)衍生物,倍半萜和酯類(lèi)化合物進(jìn)行抗菌活性檢測(cè),通過(guò)紙片擴(kuò)散法、最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度(MBC)來(lái)判斷化合物的抗菌活性,抗菌實(shí)驗(yàn)表明3個(gè)手性霉素類(lèi)衍生物和2個(gè)酯類(lèi)化合物對(duì)受試菌株有活性;對(duì)OC1611-ST03進(jìn)行NO抑制活性和細(xì)胞毒性檢測(cè),未發(fā)現(xiàn)有活性;進(jìn)行己糖激酶Ⅱ活性測(cè)試,IC50為124.3 μM。
【圖文】：

一批２０１５年煙臺(tái)樣品分離獲得１３株放線菌；第二批２０１６年威海樣品分離獲得逡逑１１株放線菌；第三批菌２０１７年威海樣品分離獲得１４株放線菌，，三批共計(jì)獲得逡逑３８株放線菌。部分菌落圖片見(jiàn)圖１．１，三批菌株具體部位分布見(jiàn)表１．１。逡逑ＯＣ１４０１－２邐ＯＣ１４０２－２邐ＯＣ１４０３逡逑圖１．１部分放線菌的菌落形態(tài)逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ｓｏｍｅ邋ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ逡逑ｉｉ逡逑

一批２０１５年煙臺(tái)樣品分離獲得１３株放線菌；第二批２０１６年威海樣品分離獲得逡逑１１株放線菌；第三批菌２０１７年威海樣品分離獲得１４株放線菌，三批共計(jì)獲得逡逑３８株放線菌。部分菌落圖片見(jiàn)圖１．１，三批菌株具體部位分布見(jiàn)表１．１。逡逑ＯＣ１４０１－２邐ＯＣ１４０２－２邐ＯＣ１４０３逡逑圖１．１部分放線菌的菌落形態(tài)逡逑Ｆｉｇ．邋１．１邋Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ邋ｏｆ邋ｓｏｍｅ邋ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ逡逑ｉｉ逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R915

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐紅星;鄭許松;劉淑平;葉恭銀;呂仲賢;;昆蟲(chóng)內(nèi)共生菌在昆蟲(chóng)防御中的作用[J];昆蟲(chóng)知識(shí);2009年03期

本文編號(hào)：2682155