發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 03:24

【摘要】：在食品加工過程中美拉德反應(yīng)容易產(chǎn)生以糖基化(Advanced glycation end products,AGEs)終產(chǎn)物為代表的多種潛在危害物。羧甲基賴氨酸(Carboxymethyl lysine,CML)是目前結(jié)構(gòu)研究較為清楚的一種AGEs標(biāo)志物,廣泛存在于食品中,因此人類有面臨暴露高濃度食源性CML的風(fēng)險(xiǎn)。目前,CML對(duì)身體健康的危害研究仍處于原始數(shù)據(jù)積累階段,且食源性CML的體內(nèi)毒性作用機(jī)制數(shù)據(jù)匱乏。借助二維細(xì)胞(Two-dimensional,2D)培養(yǎng)和動(dòng)物模型進(jìn)行人體組織結(jié)構(gòu)及功能與病理研究是目前科學(xué)工作者常用的手段之一。2D細(xì)胞模型與人體組織三維(Three-dimensional,3D)結(jié)構(gòu)的差異,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)研究的體系環(huán)境與生物體內(nèi)的實(shí)際環(huán)境存在較大差異,如細(xì)胞與細(xì)胞間交流、細(xì)胞與基質(zhì)間的相互作用、細(xì)胞分化等。由于種屬差異,動(dòng)物模型亦不能很好的重現(xiàn)人體特征,例如人類腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移、藥物治療反應(yīng)、免疫反應(yīng)等。因此,本研究擬采用人腦血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human brain vascular endothelial cells,HBVEC)構(gòu)建體外3D微血管網(wǎng)絡(luò)模型,研究CML對(duì)人腦血管的損傷作用及機(jī)制。方法將HBVEC細(xì)胞與水凝膠共培養(yǎng),將其灌注于微流控芯片中構(gòu)建3D微血管網(wǎng)絡(luò)模型,用激光共聚焦顯微鏡拍攝微血管網(wǎng)絡(luò)的形成過程。驗(yàn)證3D細(xì)胞模型的流動(dòng)性。將HBVEC細(xì)胞分為五組,分別加入CML終濃度為0.00 mg/mL,0.05 mg/mL,0.1 mg/mL,0.2 mg/mL,0.5 mg/mL的細(xì)胞培養(yǎng)液染毒。24 h染毒結(jié)束后,采用CCK-8法測(cè)定CML對(duì)HBVEC細(xì)胞存活率的影響;利用GSH-Px和ROS試劑盒測(cè)定CML對(duì)HBVEC細(xì)胞氧化損傷狀況;通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定IL-6,TNF-α、VCAM、MCP-1、RAGE、AP-1、NF-κβ與p38mRNA表達(dá)上下調(diào)情況。結(jié)果1.與2D細(xì)胞模型相比,3D細(xì)胞模型更能真實(shí)模擬體內(nèi)細(xì)胞間的微環(huán)境,3D細(xì)胞模型在評(píng)價(jià)CML對(duì)HBVEC細(xì)胞毒性作用時(shí)具有良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。2.CML對(duì)HBVEC細(xì)胞有著一定的毒性作用,同時(shí)會(huì)造成細(xì)胞的氧化損傷。細(xì)胞活性隨著CML濃度增大而降低,最終活力降低了14%。ROS隨著CML濃度增大而增大,最大增長(zhǎng)了71%。CML對(duì)GSH-Px活力也有所影響。3.CML可能對(duì)腦血管造成氧化損傷,從而破壞血腦屏障進(jìn)入大腦。通過熒光定量檢測(cè)相關(guān)基因的表達(dá)結(jié)果顯示P38基因上調(diào)等異常,說(shuō)明CML可以促進(jìn)P38等炎癥因子的mRNA表達(dá)。結(jié)論利用HBVEC成功構(gòu)建了3D微血管網(wǎng)絡(luò)模型,并利用該模型成功模擬了CML在人組織中的遷移和轉(zhuǎn)運(yùn)。研究發(fā)現(xiàn),CML能夠通過誘導(dǎo)機(jī)體氧化應(yīng)激和免疫應(yīng)答反應(yīng)致人腦血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷造成炎癥效應(yīng),同時(shí)對(duì)細(xì)胞有著明顯的毒性作用。
【圖文】：

第 1 章 緒論結(jié)構(gòu)及性質(zhì) Nε-(1-羧甲基)-L-賴氨酸（Nε-Carbox 1.1 所示），相對(duì)分子量為 204.22，熔水，溶液 pH 呈弱堿性。與蛋白結(jié)合吸收或者熒光特性等官能基團(tuán)。而另殘基發(fā)生糖基化反應(yīng)產(chǎn)生，該類物質(zhì)其在食品中的含量也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于游離型結(jié)合型 CML 和晶體蛋白結(jié)合型 CM

席夫堿因?yàn)榱呀猱a(chǎn)生乙二醛，從而與賴氨酸反應(yīng)生成 CML[6]；（4）席夫堿的阿瑪多利產(chǎn)物（Amadori Product）由于氧化裂解生成 CML[7]；（5）席夫堿的阿瑪多利重排產(chǎn)物進(jìn)一步反應(yīng)形成的 2，4-二氧化合物可經(jīng)脫水反應(yīng)直接生成 CML，此路徑是唯一一條無(wú)需生成乙二醛，，也無(wú)需在氧化物存在的條件下即可生成 CML。路徑如圖 1.2：
【學(xué)位授予單位】：武漢輕工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R994

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 楊德慶;王艷萍;李霞;馮建勛;;食物中的晚期糖基化終產(chǎn)物對(duì)5/6腎切除大鼠腎臟損害的作用的研究[J];新疆醫(yī)學(xué);2008年08期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 喻佩;美拉德反應(yīng)中羧甲基賴氨酸和羧乙基賴氨酸的形成及調(diào)控機(jī)理的研究[D];華南理工大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 鄭良清;羧甲基賴氨酸對(duì)小鼠腦組織的損傷作用及機(jī)制[D];武漢輕工大學(xué);2016年

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本文編號(hào)：2671960