【摘要】：目的BBI是大豆等豆類作物含有的成分,已知有良好的耐酸耐分解性質(zhì),具有抗炎抗HIV功能。慢性系統(tǒng)性炎癥是HIV感染進展的主要因素之一。盡管抗逆轉(zhuǎn)錄治療(ART)能有效地抑制HIV復(fù)制,但患者體內(nèi)系統(tǒng)性炎癥仍然存在。由于黏膜內(nèi)有大量免疫激活的CD4+T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,腸道是HIV進入體內(nèi)后首先攻擊的主要部位之一。HIV感染造成CD4+T細(xì)胞死亡,使腸道免疫功能下降,細(xì)菌得以大量繁殖,產(chǎn)生細(xì)菌內(nèi)毒素如LPS,后者進入體液循環(huán)(LPS易位),造成系統(tǒng)性炎癥和免疫激活,因此腸道微生物及其產(chǎn)物L(fēng)PS易位是HIV慢性進展的重要標(biāo)志。本研究的主要目的如下:,1、BBI能否抑制細(xì)菌內(nèi)毒素(LPS)誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞炎癥因子表達;2、BBI能否阻斷LPS對腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的下調(diào)作用;3、BBI能否抑制LPS誘導(dǎo)的腸上皮細(xì)胞內(nèi)ROS的表產(chǎn)生;4、BBI抑制LPS作用的機制。方法用腸上皮細(xì)胞(HT-29細(xì)胞)作為研究的模式細(xì)胞,研究以下內(nèi)容:1、檢測BBI和/或LPS對HT-29細(xì)胞的毒性作用;2、用實時熒光定量PCR及Western Blot檢測LPS對腸上皮細(xì)胞炎癥因子(TNF-α,IL-1β,IL-8 和 MCP-1)、TLR-4、MyDD8、細(xì)胞間緊密連接蛋白(ZO-1 和 Occludin)的表達影響;3、用實時熒光定量PCR及Western Blot檢測BBI拮抗LPS誘導(dǎo)炎癥因子的作用及機制;4、Western Blot和NF-κB-luci系統(tǒng)檢測BBI和/或LPS對HT-29細(xì)胞內(nèi)NF-κB活化的影響;5、用DCFH-DA探針檢測BBI和/或LPS對HT-29細(xì)胞內(nèi)ROS的影響。結(jié)果1、實驗所用BBI濃度(最高1000μg/ml)和LPS濃度(最高1000ng/ml)對HT-29細(xì)胞無毒性;2、LPS誘導(dǎo)HT-29細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子(TNF-α,IL-1β,IL-8,MCP-1)和表達TLR4,而BBI能抑制LPS對炎癥因子及TLR4的上調(diào)作用;3、LPS抑制HT-29細(xì)胞表達緊密連接蛋白;BBI能阻斷LPS對HT-29細(xì)胞緊密連接蛋白的下調(diào)作用;4、BBI能拮抗LPS對HT-29細(xì)胞內(nèi)ROS的誘導(dǎo)作用;5、LPS能促進HT-29細(xì)胞內(nèi)NF-κB的磷酸化,而BBI能阻斷LPS對NF-κB的磷酸化作用。結(jié)論通過拮抗LPS對腸上皮細(xì)胞內(nèi)NF-κB的活化及TLR4表達的促進作用,BBI能抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥因子和ROS的表達,此外,BBI能阻斷LPS對腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白的下調(diào)作用。這些結(jié)果表明,BBI具有拮抗細(xì)菌內(nèi)毒素LPS的功效,有必要進行進一步體內(nèi)實驗,研究BBI是否可用于治療HIV感染造成的慢性系統(tǒng)性炎癥和免疫激活。
【圖文】：

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邐Ｓｉｔｅ邐Ｓｉｔｅ逡逑圖１．１邋ＢＢ丨結(jié)構(gòu)圖。（參考Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司丫ｆ邋７／Ｎ站ＢＢＩ說明｜５）逡逑１．１．２邋ＢＢ直抗ＨＩＶ感染研宄逡逑天然產(chǎn)物抗ＨＩＶ作用方式有：直接針對ＨＩＶ，抑制ＨＩＶ逆轉(zhuǎn)錄酶活性；直接阻逡逑斷ＨＩＶ接觸靶細(xì)胞；對包括ＨＩＶ靶細(xì)胞在內(nèi)的機體免疫細(xì)胞及非免疫細(xì)胞的天然免逡逑疫進行調(diào)節(jié)。目前有關(guān)ＢＢＩ抑制ＨＩＶ的研究有兩種：一是非細(xì)胞體系中研究ＢＢＩ對逡逑ＨＩＶ逆轉(zhuǎn)錄酶活性的影響；二是ＢＢＩ能激活ＨＩＶ靶細(xì)胞一巨噬細(xì)胞天然免疫并抑制逡逑ＨＩＶ復(fù)制。非細(xì)胞體系中抑制ＨＩＶ逆轉(zhuǎn)錄酶活性研究顯示，濃度較高時ＢＢＩ才能有逡逑１逡逑
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R96

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本文編號：2671719