發(fā)布時(shí)間：2020-05-17 02:03

【摘要】：靶向制劑可以極大地提高藥物在腫瘤部位的分布,減輕藥物的毒副作用,但是在病灶部位存留時(shí)間短,以及潛在的從腫瘤組織的滲漏,導(dǎo)致其依舊需要頻繁給藥,且存在引發(fā)脈管炎等風(fēng)險(xiǎn),增加病人的痛苦。因此,如何提高靶向遞釋系統(tǒng)在腫瘤部位的駐留時(shí)間,減少給藥次數(shù)成為靶向制劑的一個(gè)挑戰(zhàn)。本課題依據(jù)前期研究基礎(chǔ),原創(chuàng)性設(shè)計(jì)阿霉素多肽結(jié)合物(Doxorubicin peptide conj ugates,DPCs),在對其自組裝機(jī)制研究基礎(chǔ)上,尋找定向調(diào)控策略,使其在體外中性環(huán)境中自組裝構(gòu)建形成50-100nm的納米粒,靜脈注射進(jìn)入體內(nèi)后,通過EPR效應(yīng)濃集于腫瘤部位,在腫瘤微環(huán)境下,該納米粒響應(yīng)性地聚集組裝,形成更大的微米級別的聚集體,避免滲漏,使藥物駐留于腫瘤部位,形成的聚集體在腫瘤部位緩慢解組裝釋放出抗腫瘤藥物阿霉素(doxorubicin,DOX),長久性地發(fā)揮殺傷腫瘤,減少給藥次數(shù)。在課題組前期研究基礎(chǔ)上,本研究首先設(shè)計(jì)具有逐級分步組裝的自組裝序列KIGLFRWR。并對其理化性質(zhì)、自組裝功能及安全性進(jìn)行評價(jià)。其電荷在pH值為10.5時(shí)由正電荷翻轉(zhuǎn)為負(fù)電荷,PI值約為10.5。利用芘熒光分光光度法測定其臨界聚集濃度,結(jié)果顯示,其臨界聚集濃度為43.2 μM。對其組裝形貌研究結(jié)果顯示:多肽首先聚集形成50 nm左右的納米粒,隨著組裝時(shí)間的延長,納米粒進(jìn)一步組裝聚集形成微米級交聯(lián)纖維狀聚集體。對自組裝多肽的體外溶血性研究結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)濃度下,多肽溶血率遠(yuǎn)低于5%,具有良好的安全性。接下來,本文以酸酐為連接鍵將模型藥物阿霉素與多肽偶聯(lián),制備多肽藥物結(jié)合物DPCs,系統(tǒng)表征其最佳吸收波長、臨界聚集濃度等理化性質(zhì)。對其隨時(shí)間變化,形貌變化的過程進(jìn)行系統(tǒng)研究,考察自組裝體系中的組裝作用力與組裝形貌的關(guān)系,并利用各種阻斷劑以及全波長掃描圖譜進(jìn)行研究,結(jié)果顯示氫鍵、π-π作用是組裝的主要驅(qū)動力,DPCs分子間的靜電斥力過強(qiáng)時(shí)能夠抑制DPCs分子的進(jìn)一步自組裝,因?yàn)槿芤旱膒H會影響DPCs分子的質(zhì)子化程度,從而影響分子間的靜電斥力大小,因此DPCs分子的組裝只能在適宜的pH體系下,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在pH 5-8范圍內(nèi),DPCs分子具有良好的組裝能力。本論文第四章,在對DPCs自組裝形貌和作用力的研究基礎(chǔ)上,成功設(shè)計(jì)了一種酸響應(yīng)性功能性材料(Functional polylysine grafts,FPG),FPG作為酸響應(yīng)性的殼分子,能夠通過靜電作用力阻斷阿霉素多肽結(jié)合物納米粒(Doxorubicin peptide conj ugate Nano particles,DPC-NPs)間的組裝作用力實(shí)現(xiàn)調(diào)控其自組裝形貌的目的。我們首先設(shè)計(jì)了FPG的合成路線,通過MALDI-TOF確證其分子量,并對其溶血安全性、酸響應(yīng)性等功能進(jìn)行初步評價(jià),接下來研究利用FPG調(diào)控DPC-NPs自組作用力與形貌的關(guān)系,成功構(gòu)建出能夠在體外自組裝形成穩(wěn)定膠束結(jié)構(gòu)的功能性阿霉素多肽結(jié)合物納米粒(Functional doxorubicin peptide conj ugate nano particles,FDPC-NPs),粒徑大小50-100 nm,在體外,FDPC-NPs具有良好的安全性、穩(wěn)定性,在模擬腫瘤弱酸性條件下FPG能夠響應(yīng)性地發(fā)生電荷翻轉(zhuǎn),在靜電力作用下構(gòu)成FDPC-NPs的FPG殼分子與DPC-NPs核結(jié)構(gòu)發(fā)生分離,分離后的DPC-NPs進(jìn)一步自組裝聚集形成更大的纖維狀聚集體DPC-NFs。通過體外釋放實(shí)驗(yàn)證明,所構(gòu)建的FDPC-NPs具有良好的酸響應(yīng)性緩釋功能。此外,體外細(xì)胞藥效實(shí)驗(yàn)表明,FDPC-NPs具有與原藥相當(dāng)?shù)目鼓[瘤活性,為體內(nèi)發(fā)揮抗腫瘤藥效提供研究基礎(chǔ)。最后,我們以DOX溶液為參比制劑,考察FDPC-NPs在腫瘤、肝臟、心臟、腎臟、脾臟、肺及腦中的分布情況,從而評價(jià)FDPC-NPs的腫瘤靶向性和長效駐留釋藥的功能。結(jié)果表明,尾靜脈注射FDPC-NPs后能夠顯著增強(qiáng)DOX在腫瘤組織中的富集,計(jì)算FDPC-NPs組的相對攝取率比DOX組增加30倍,顯著提高藥物對腫瘤組織的靶向性。此外,在心、腎中的分布也較DOX組有所降低,有利于降低DOX的心腎毒性。綜上,本課題原創(chuàng)性地設(shè)計(jì)自組裝多肽KIGLFRWR,通過化學(xué)載藥的方式構(gòu)建出具有組裝功能的DPCs分子,研究DPCs組裝作用力與形貌的關(guān)系,設(shè)計(jì)出具有腫瘤微環(huán)境酸響應(yīng)性的功能性材料FPG,通過分子間靜電力實(shí)現(xiàn)對DPC-NPs間π-π堆積作用的阻斷,構(gòu)建出能夠在體外穩(wěn)定的FDPC-NPs,在腫瘤弱酸性條件下能夠發(fā)揮長滯留和響應(yīng)性釋藥的作用。在H22-肝癌小鼠模型上不僅能夠提高藥物的腫瘤靶向性,還能夠延長DOX在腫瘤組織的持續(xù)時(shí)間。為通過設(shè)計(jì)自組裝多肽藥物結(jié)合物分子并調(diào)控其組裝形貌構(gòu)建長效抗腫瘤遞釋系統(tǒng)治療肝癌提供有益的借鑒。
【圖文】：

圖１－１不同種類氨基酸及其相互作用力類型用于設(shè)計(jì)多肽組裝構(gòu)建納米遞ｇ．邋１－１邋Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ邋ｃｌａｓｓｅｓ邋ｏｆ邋ａｍｉｎｏ邋ａｃｉｄｓ邋ａｎｄ邋ｔｈｅｉｒ邋ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ邋ｆｏｒ邋ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ邋ｓｅｌｆ－ｐｅｐｔｉｄｅｓ邋ｔｏ邋ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ邋ｄｍｇ邋ｄｅｌｉｖｅｒｙ邋ｓｙｓｔｅｍｓ．逡逑

邐ＣｏＵｔｇｅｏｓ邋。ＤＯＸ逡逑圖１－５邋ＦＤＰＣ－ＮＰｓ構(gòu)建的納米遞釋系統(tǒng)瘤內(nèi)自組裝長滯留釋藥過程逡逑Ｆｉｇ．邋１－５邋Ｌｏｎｇ－ｔｅｒｍ邋ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ邋ｏｆ邋ＦＤＰＣ－ＮＰｓ邋ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ邋ｉｎ邋ｖｉｖｏ邋ｉｎ邋ｔｕｍｏｒ邋ｓｉｔｅｓ逡逑１３逡逑
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R943

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 樓海霞;;大禮堂[J];文學(xué)港;2016年12期

2 李仁偉;任麗娥;黃光榮;;蝦副產(chǎn)物制備的鈣肽結(jié)合物理化性質(zhì)研究[J];食品工程;2013年02期

3 曹趙云;馬有寧;陳銘學(xué);牟仁祥;胡秀芳;;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定水稻中生長素及其氨基酸結(jié)合物[J];分析測試學(xué)報(bào);2011年12期

4 袁志翔;龔濤;張志榮;欒長濤;;水溶性殼聚糖-潑尼松龍結(jié)合物的合成與表征[J];中國藥學(xué)雜志;2007年19期

5 郭瑋,賀爭鳴;不同保護(hù)液對低濃度酶結(jié)合物穩(wěn)定性影響的研究[J];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)雜志;2000年03期

6 曾常茜,尹學(xué)念,王琰;ABEI-CEA McAb結(jié)合物的制備[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;1997年08期

7 李行利;;絲裂霉素C前體藥物帶負(fù)電荷的絲裂霉素C-葡聚糖結(jié)合物的理化性質(zhì)和體內(nèi)外抗癌活性[J];國外醫(yī)藥.合成藥.生化藥.制劑分冊;1987年06期

8 岐天茂;吳文琪;謝蔚玫;;應(yīng)用酶標(biāo)F(ab′)2結(jié)合物消除EHF-IgM-ELISA檢測中類風(fēng)濕因子的干擾(摘要)[J];西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);1987年03期

9 黎松,談立松,張學(xué)庸,陳希陶,樊代明,潘惠忠,胡繼旺;胃癌單克隆抗體-絲裂霉素C結(jié)合物的制備及其細(xì)胞毒特征[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1988年05期

10 褚嘉佑,楊愛德,王辨明,胡忠,張和君,史良如,曲京華,羅蘭英,郭仁;抗人T細(xì)胞單克隆抗體與商陸毒蛋白結(jié)合物的制備及其抗白血病細(xì)胞活性[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;1988年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 劉鳳喜;李敏;劉春喜;劉永軍;張娜;;靶向于腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的DTX-CMCS-PEG-NGR結(jié)合物的體外和體內(nèi)抗腫瘤效果評價(jià)(英文)[A];2012年中國藥學(xué)大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

2 Masahiro Iwaki;;布洛芬葡萄糖醛酸結(jié)合物的立體選擇性膽排泄及其機(jī)制研究(英文)[A];中國藥理學(xué)會臨床藥理學(xué)專業(yè)委員會會議暨第十次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 王升年;陳松華;徐惠鈞;車裕芳;張鴻良;張素胤;王玨;葛錫銳;;單抗-天花粉結(jié)合物在體內(nèi)外對靶細(xì)胞的作用[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

4 劉方蕾;吳兵;王晶;袁菲;趙志強(qiáng);楊明;謝貴林;;A群奈瑟氏腦膜炎球菌莢膜多糖-破傷風(fēng)類毒素結(jié)合物的制備及其工藝穩(wěn)定性研究[A];2011中國生物制品年會暨第十一次全國生物制品學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

5 馬燕;張雨青;沈衛(wèi)德;周文林;丁悅;夏運(yùn)岳;;絲膠-胰島素結(jié)合物的制備及其生物特性研究[A];中國蠶學(xué)會第七次全國代表大會論文集[C];2003年

6 宋強(qiáng);趙川莉;李麗珍;王玉珍;閆樹昕;王魯群;;半導(dǎo)體量子點(diǎn)熒光探針用于細(xì)胞生物學(xué)成像的研究[A];第10屆全國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2005年

7 張棟林;吳超超;張君濤;張超;李思迪;原繼波;尚曼;;淫羊藿苷與透明質(zhì)酸結(jié)合物的制備及其在體對兔膝軟骨組織細(xì)胞作用對照研究[A];第七屆全國中西醫(yī)結(jié)合骨科微創(chuàng)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2017年

8 吳兵;劉方蕾;王晶;侯亞莉;趙志強(qiáng);楊明;崔萱林;謝貴林;;C群奈瑟氏腦膜炎球菌結(jié)合疫苗工藝穩(wěn)定性及免疫原性研究[A];2011中國生物制品年會暨第十一次全國生物制品學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2011年

9 任濤;唐秀麗;曹欣;胡鵬;郝倩;張明華;張美香;何佳琦;韓菲;王婷婷;魏文進(jìn);;13價(jià)肺炎結(jié)合疫苗研制[A];第五次全國免疫診斷暨疫苗學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

10 劉超;費(fèi)爾康;賈娜麗;王洪楓;陶瑞松;Atsushi Iwata;Nobuyuki Nukina;周江寧;王光輝;;磷酸化α-突觸核蛋白對63位賴氨酸鏈接的泛素結(jié)合物的促成提示路易小體的形成機(jī)制[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 本報(bào)記者 魯日峰;莫斯科：歐洲最大的城鄉(xiāng)結(jié)合物[N];中國經(jīng)濟(jì)導(dǎo)報(bào);2008年

2 王大椿;不宜同服的中藥和西藥[N];大眾科技報(bào);2000年

3 唐嘯;不宜同服的中藥和西藥[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2002年

4 ;隨“機(jī)”應(yīng)“飾”[N];重慶商報(bào);2000年

5 ;提醒病人按時(shí)吃藥南非醫(yī)生發(fā)明高招[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2005年

6 馮翔 中國科學(xué)院自然科學(xué)史研究所;發(fā)現(xiàn)水的組成[N];中國社會科學(xué)報(bào);2010年

7 ;借力合作謀求發(fā)展[N];科技日報(bào);2006年

8 郭立場;校企“聯(lián)姻”應(yīng)謹(jǐn)慎[N];濟(jì)南日報(bào);2007年

9 溧陽市光華高級中學(xué) 趙春梅;培養(yǎng)學(xué)生良好的學(xué)習(xí)習(xí)慣[N];成才導(dǎo)報(bào).教育周刊;2007年

10 金慰鄂;服藥期間，少吃油鹽醬醋[N];健康時(shí)報(bào);2006年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 劉金鋒;組織靶向肝素-SOD及季銨化殼聚糖-SOD結(jié)合物的制備及其對ROS誘導(dǎo)損傷的作用與機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2009年

2 朱清;益母草堿在大鼠體內(nèi)藥動學(xué)及代謝研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 畢言鋒;基于高分辨質(zhì)譜技術(shù)的β-受體激動劑在豬體內(nèi)的代謝研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 徐柳;阿霉素多肽結(jié)合物長效遞釋系統(tǒng)的研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 滕雯迪;萊菔素、萊菔素—谷胱甘肽結(jié)合物抗癌活性評價(jià)及分子機(jī)制研究[D];北京化工大學(xué);2016年

3 傅葉R，

本文編號：2667738