發(fā)布時(shí)間：2020-05-16 13:23

【摘要】：目的研究β-酪啡肽-7的攝入對(duì)自然衰老的機(jī)體腸組織形態(tài)、腸上皮淋巴細(xì)胞、腸黏膜免疫細(xì)胞因子、腸黏膜氧化應(yīng)激的影響,初步研究β-酪啡肽-7影響腸黏膜免疫的分子機(jī)制,為進(jìn)一步深入開發(fā)利用β-酪啡肽-7提供科學(xué)資料。方法48只老年雄性昆明小鼠、12只青年雄性昆明小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,44只老年小鼠隨機(jī)分為低、中、高劑量組和老年模型組四組,每組各11只;11只青年小鼠設(shè)為青年對(duì)照組。將干粉β-CM-7以生理鹽水配制成低、中、高濃度分別為0.2×10-64mol/L、1×10-6 mol/L、5× 10-6 mol/L的溶液,劑量組每只每天灌胃β-CM-7溶液0.5ml,青年對(duì)照組和老年模型組灌胃等體積的0.9%生理鹽水。每周稱重一次,連續(xù)灌胃30天后頸椎脫臼處死。取小鼠十二指腸、空腸、回腸腸段,采用HE染色法測(cè)定小腸VH、CD、V/C、黏膜厚度、腸上皮淋巴細(xì)胞;取小鼠空腸黏膜測(cè)定小腸黏膜中IL-2、TNF-α、SIgA、SOD、MDA、CAT含量,并采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定NF-κB、TRAF6及TLR4基因的相對(duì)表達(dá)量。結(jié)果1.β-酪啡肽-7對(duì)衰老小鼠腸組織形態(tài)、淋巴細(xì)胞的影響老年模型組與青年組相比,十二指腸段上皮淋巴細(xì)胞數(shù)量降低(P0.01),腸黏膜厚度增加(P0.05),V/C值顯著降低(P0.05);空腸段上皮淋巴細(xì)胞數(shù)量降低(P0.05),V/C值降低(P0.01);回腸段黏膜厚度、絨毛長(zhǎng)度、V/C值降低(P0.01),隱窩深度升高(P0.01)。劑量組與模型組相比,各劑量組均能提高十二指腸上皮淋巴細(xì)胞數(shù)量(P0.01)、空腸上皮淋巴細(xì)胞數(shù)量(P0.05)和回腸上皮淋巴細(xì)胞數(shù)量,其中高劑量組有差異(P0.05)。低劑量組能顯著提高小鼠十二指腸、空腸絨毛長(zhǎng)度(P0.05),提高三個(gè)腸段的V/C值(P0.01);中劑量組能顯著增加回腸黏膜厚度(P0.01),提高十二指腸、回腸絨毛長(zhǎng)度(P0.05),降低回腸隱窩深度(P0.05),提高十二指腸V/C值(P0.05)和空腸、回腸V/C值(P0.01);高劑量組能提高回腸腸絨毛長(zhǎng)度及空腸和回腸的V/C值(P0.01)。2.β-酪啡肽-7對(duì)衰老小鼠腸黏膜免疫細(xì)胞因子的影響老年模型組TNF-α含量高于青年對(duì)照組(P0.01)。劑量組與老年模型組相比,低、中劑量組能顯著降低TNF-α含量(P0.05);低劑量組能顯著提高衰老小腸黏膜IL-2的含量(P0.05)。低、中劑量組SIgA含量略微降低(P0.05),高劑量組SIgA含量略升高(P0.05)。3.β-酪啡肽-7對(duì)衰老小鼠體質(zhì)量、腸黏膜氧化應(yīng)激的影響劑量組、老年模型組干預(yù)結(jié)束時(shí)體重相比初始體重略微下降,青年對(duì)照組小鼠干預(yù)結(jié)束時(shí)體重相比初始體重略微上升,但差異均不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。老年模型組小鼠腸黏膜SOD、CAT活性顯著低于青年對(duì)照組(P0.01),MDA含量顯著高于青年對(duì)照組(P0.01)。劑量組與老年模型組相比,低、中劑量組均能顯著提高小腸黏膜SOD活性(P0.01),降低MDA含量(P0.05);低劑量組能顯著提高CAT活性(P0.01);高劑量組能顯著降低MDA含量(P0.01)。4.β-酪啡肽-7對(duì)衰老小鼠腸黏膜TLR4、TRAF6、NF-κB的影響老年模型組腸黏膜TLR4、TRAF6、NF-κB相對(duì)表達(dá)量低于青年對(duì)照組,其中TRAF6、NF-κB的差異有顯著性(P0.05或P0.01)。劑量組與模型組相比,低劑量組能上調(diào)TLR4、TRAF6相對(duì)表達(dá)量(P0.01)和NF-κB相對(duì)表達(dá)量(P0.05);中劑量能上調(diào)TLR4、NF-κB相對(duì)表達(dá)量(P0.01)和TRAF6相對(duì)表達(dá)量(P0.05)。結(jié)論機(jī)體衰老導(dǎo)致小腸組織結(jié)構(gòu)改變,抗氧化酶的含量減少,腸道黏膜處于氧化應(yīng)激狀態(tài),小腸黏膜中促炎細(xì)胞因子的濃度增加,免疫因子的分泌減少,抑制免疫發(fā)揮作用途徑中相關(guān)因子的活化,降低了小腸黏膜免疫系統(tǒng)的功能。β-CM-7可以緩解衰老對(duì)小腸組織結(jié)構(gòu)的損傷,刺激小腸上皮淋巴細(xì)胞的分化,顯著提高小腸黏膜抗氧化應(yīng)激酶的活性,減少過氧化引起的細(xì)胞損傷,提高小腸黏膜免疫因子的活性,降低小腸黏膜中促炎因子的含量,提高免疫相關(guān)基因的活化程度,從而增強(qiáng)小腸黏膜免疫功能。提示β-CM-7對(duì)衰老小腸黏膜免疫系統(tǒng)有一定的保護(hù)作用。
【圖文】：

圖２－１小鼠十二指腸組織結(jié)構(gòu)（ＨＥ染色）（２0ｘ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－１邋Ｔｉｓｓｕｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ｍｏｕｓｅ邋ｄｕｏｄｅｎｕｍ邋（ＨＥ邋ｓｔａｉｎｉｎｇ）邋（２0ｘ）逡逑由圖２－１可以看出，青年對(duì)照組十二指腸絨毛細(xì)長(zhǎng)，，排列較整齊；老年模型組十二指逡逑腸絨毛寬度增加、長(zhǎng)度縮短，排列稀疏，上皮細(xì)胞間排列不整齊，間質(zhì)萎縮；各Ｐ＊ＣＭ－７逡逑干預(yù)組十二指腸絨毛較老年模型組絨毛勻稱細(xì)長(zhǎng)，結(jié)構(gòu)完整，排列恢復(fù)整齊。逡逑表２－３為各組小鼠十二指腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度及Ｖ／Ｃ值的數(shù)據(jù)結(jié)果。逡逑表２－３邋ｐ－酪啡肽－７對(duì)小鼠十二指腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度及Ｖ／Ｃ值的影響逡逑Ｔａｂｌｅ邋２－３邋Ｅｆｆｅｃｔ邋ｏｆ邋Ｐ－Ｃｙｔｏｍｏｒｐｈｉｎ－７邋ｏｎ邋ｄｕｏｄｅｎａｌ邋ｖｉｌｌｕｓ邋ｌｅｎｇｔｈ，邋ｃｒｙｐｔ邋ｄｅｐｔｈ邋ａｎｄ邋Ｖ／Ｃ邋ｖａｌｕｅ邋ｉｎ邋ｍｉｃｅ逡逑組別邐絨毛長(zhǎng)度４？ｎ邐Ｉｔ、窩深度／Ｈｍ逡逑青年對(duì)照組邐１８丨．７４±５４．６９邐４３．４９±１３．０９邐４．２６±０．９９＊逡逑老年模型組邐１６２．５９±５３．２８邐５３．０３±１４．１６邐３．１３±１．０５逡逑低劑量組邐２４９．６３±４３．５３＊邐４８．５９±７．３９邐５．２２±１．１３＊＊逡逑中劑量組邐２３３．３３±４５．１５＊邐５２．６８±２．７９邐４．４４±０．９０＊逡逑高劑量組邐２２７．４１±７２．０８邐５１．４３±８．２２邐４．３５±０．７８逡逑注：＊與老年模型組相比，尸＜0．0５；邋＊＊與老年模型組相比，Ｐ＜０．０１。逡逑由表２－３可知，老年模型組與青年對(duì)照組相比，老年模型組小鼠腸黏膜絨毛長(zhǎng)度低于逡逑青年對(duì)照組

年模型組之間差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（辦0．0５）。逡逑２．３．２空腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度及Ｖ／Ｃ值逡逑圖２－２為各組小鼠空腸切片的ＨＥ染色結(jié)果。逡逑（ａ）青年對(duì)照組邐（ｂ）老年模型組逡逑ｍｍｍ逡逑（ｃ）低劑量組邐（ｄ）中劑量組邐（ｅ）高劑量組逡逑圖２－２小鼠空腸組織結(jié)構(gòu)（ＨＥ染色）（２０＞＜）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２－２邋Ｍｏｕｓｅ邋ｊｅｊｕｎａｌ邋ｔｉｓｓｕｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋（ＨＥ邋Ｓｔａｉｎｉｎｇ）邋（２0ｘ）逡逑由圖２－２可以看出，青年對(duì)照組空腸絨毛均勻細(xì)長(zhǎng)，呈指狀、整齊排列；衰老模型組逡逑空腸絨毛脫落、缺損，肥大腫脹，長(zhǎng)度縮短，排列稀疏，黏膜厚度增加、密度降低，間質(zhì)逡逑明顯萎縮；Ｐ＾ＣＭ－７干預(yù)組空腸絨毛較老年模型組絨毛間隙明顯縮小，腫脹現(xiàn)象減輕。逡逑表２＊４為Ｐ－酪啡肽－７對(duì)各組小鼠空腸絨毛長(zhǎng)度、隱窩深度及Ｖ／Ｃ值影響的數(shù)據(jù)結(jié)果。逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：2666797