【摘要】：目的:血管性癡呆(Vascular dementia,VD)是腦卒中及其他類型腦組織灌注損傷后發(fā)生的一種異質(zhì)性腦功能障礙,它導致了至少20%的癡呆病例,使患者生活質(zhì)量大幅度不可逆轉(zhuǎn)的惡化。研究證明,腦血管損傷和內(nèi)皮細胞功能障礙是導致癡呆發(fā)生的主要原因之一。內(nèi)皮祖細胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)是血管內(nèi)皮細胞的前體細胞,對于血管損傷和內(nèi)皮細胞功能的恢復有重要作用。因此,尋找可以提高EPCs功能和數(shù)量的藥物對于治療VD具有重要意義。二氯乙酸鈉(Sodium dichloroacetate,DCA)是線粒體丙酮酸脫氫酶激酶抑制劑,具有潛在的血管保護作用,并且可以緩解腦缺血后VD引起的神經(jīng)功能的損傷。本課題旨在研究DCA對VD的保護作用以及對EPCs功能改善的角度探討其作用機制,為VD的預防和治療提供新的探索思路。方法:通過大腦中動脈閉塞(MCAO)制備腦缺血再灌注模型,再經(jīng)過21天飼養(yǎng)造就VD模型。大鼠隨機分為5組:假手術(shù)組,模型組(VD),DCA低劑量給藥組(50mg/kg),DCA中劑量給藥組(100mg/kg),DCA高劑量給藥組(200mg/kg),大鼠腦缺血再灌注后24h灌胃給藥,每24h給藥一次,連續(xù)給藥21天。之后進行Morris水迷宮實驗檢測各組大鼠的認知功能,TTC染色檢測不同時間的腦萎縮面積,應用HE染色、尼氏染色檢測腦組織病理改變,使用免疫組化檢測腦組織中CD31表達情況。應用ELISA檢測大鼠血清中VEGF和bFGF的水平,并使用流式細胞術(shù)檢測各組大鼠外周血中EPCs的數(shù)量。建立完善的BM-EPCs鑒別和培養(yǎng)方法,體外DCA直接干預BM-EPCs后比較其功能差異。比較不同組別來源的BM-EPCs的功能差異性(遷移、黏附、管腔形成),應用流式細胞術(shù)檢測各組BM-EPCs中ROS和NO的表達水平,利用Western blot實驗檢測氧化應激通路中AKT、p-AKT、eNOS、GSK-3β和Nrf2的蛋白水平表達變化。結(jié)果:1.Morris水迷宮實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),DCA可以改善VD大鼠的認知功能(逃避潛伏期時間明顯減少,P0.01),結(jié)果呈一定的劑量依賴關(guān)系。與模型組比較,DCA(50mg/kg)組的VD大鼠逃避潛伏期顯著縮短(P0.01),但對穿平臺次數(shù)無顯著影響(P0.05),而DCA(100mg/kg)和200mg/kg劑量組在逃避潛伏期測試和空間探索實驗中均呈現(xiàn)顯著的改善作用(P0.01);TTC染色結(jié)果表明DCA可以改善VD大鼠的腦萎縮面積。HE染色和尼氏染色結(jié)果顯示,VD組大鼠腦組織病理損傷明顯,如水腫、細胞核固縮等,海馬結(jié)構(gòu)完整性受到破壞,CA1區(qū)有明顯的損傷,而DCA治療組大鼠腦組織病理損傷得到改善,如水腫程度降低、海馬結(jié)構(gòu)完整等,CA1區(qū)損傷有明顯改善;免疫組化結(jié)果顯示,DCA治療后可以顯著增加VD大鼠的腦血管新生數(shù)量(P0.01)。2.DCA治療可以明顯升高VD大鼠血清中VEGF和bFGF的含量(P0.05),并且可以顯著提高VD大鼠外周血中EPCs的數(shù)量(P0.01);DCA體外干預可以顯著提高BM-EPCs功能。不同組BM-EPCs功能檢測實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn),與VD組的BM-EPCs相比,DCA治療組的BM-EPCs遷移和管腔形成功能得到顯著改善(P0.01),黏附功能有明顯改善(P0.05);流式細胞術(shù)檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),DCA治療組的VD大鼠BM-EPCs中ROS水平明顯降低(P0.05),NO水平顯著升高(P0.01);Western blot檢測各組大鼠BMEPCs中AKT、p-AKT、eNOS、GSK-3β和Nrf2表達,與模型組相比,DCA可以升高VD大鼠BM-EPCs中p-AKT、eNOS、Nrf2表達(P0.01)并且降低GSK-3β表達(P0.05)。結(jié)論:1.DCA(100mg/kg,200 mg/kg)對VD大鼠認知功能具有改善作用,并且可以促進VD大鼠的腦血管新生。2.DCA通過增加VD大鼠血清中VEGF、bFGF的含量以及外周血中EPCs數(shù)量來促進血管新生。DCA可能是通過調(diào)節(jié)氧化應激通路相關(guān)蛋白來改善VD大鼠的BM-EPCs功能。
【圖文】：

7]的方法，我們采用大腦中動脈線栓n，MCAO）制備大鼠腦缺血再灌注模型模型，Morris 水迷宮檢測大鼠認知功能觀察腦組織的病理變化。ium dichloroacetate, DCA）（產(chǎn)品批號株式會社）是一種小分子化合物，化學號：2156-56-1。分子結(jié)構(gòu)式如下圖：

圖 2 各組大鼠水迷宮實驗逃避潛伏期Fig2. Escape latency of water maze test in rats of each group圖 3 各組大鼠水迷宮實驗目標象限百分比
【學位授予單位】：安徽中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R96

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本文編號：2653407