發(fā)布時(shí)間：2020-04-30 19:00

【摘要】：細(xì)菌感染導(dǎo)致嚴(yán)重的健康問題,危害人類的生命安全,特別是由革蘭氏陽(yáng)性菌引起的感染可引起多種嚴(yán)重疾病,例如敗血癥、菌血癥、肺炎、骨髓炎和心內(nèi)膜炎等。從1942年發(fā)現(xiàn)青霉素至今,先后就有近20類上百種抗菌藥物應(yīng)用于臨床,在治療感染,控制細(xì)菌性傳染病流行等方面發(fā)揮了積極作用。但是,由于細(xì)菌敏感性變遷,臨床不合理使用抗生素等導(dǎo)致多重耐藥菌(MDR)的出現(xiàn),并且由MDR所引起的細(xì)菌感染死亡率逐年上升,使得感染性疾病的治療與控制面臨極大的挑戰(zhàn)。此外,快速準(zhǔn)確地鑒別病原體類別,對(duì)癥下藥,既可以提高救治重癥細(xì)菌感染患者的成功率,也可以避免抗生素的濫用從而導(dǎo)致細(xì)菌耐藥現(xiàn)象的發(fā)生,在臨床治療細(xì)菌感染方面具有重要的意義。熒光標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)靈敏度高、速度快,在細(xì)菌鑒定方面具有廣闊的應(yīng)用前景。帶有熒光功能的抗菌劑既能夠通過熒光技術(shù)鑒定細(xì)菌,又能夠成功滅活它們。因此,設(shè)計(jì)與合成熒光抗菌劑能夠?yàn)槿找鎳?yán)峻的細(xì)菌感染問題提供診療手段�；谏鲜鲅芯磕繕�(biāo),本文合成兩種帶有熒光功能的抗菌劑,通過抗菌劑攜帶的官能團(tuán)與細(xì)菌作用進(jìn)行細(xì)菌成像和鑒定,以及滅活。主要研究?jī)?nèi)容涵蓋以下兩部分:1.萬(wàn)古霉素修飾的聚噻吩用于革蘭氏陽(yáng)性菌的鑒定和滅活:水溶性聚噻吩是一種重要的熒光共軛聚合物,而萬(wàn)古霉素能與革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁上的D-丙氨酸-D-丙氨酸(D-Ala-D-Ala)單元相結(jié)合,達(dá)到靶向作用功效。在這項(xiàng)工作中,作者采用Fe~(3+)催化氧化聚合法制備了一種含活性五氟苯酯(PFP)的活性聚噻吩衍生物。該聚合物與萬(wàn)古霉素以及α-甲氧基-ω-氨基聚(乙二醇)(mPEG-NH_2)通過氨基-活性酯反應(yīng),制備具有良好水溶性且能發(fā)出熒光的萬(wàn)古霉素修飾的聚噻吩(PTPVan)。為了檢查結(jié)合萬(wàn)古霉素的PTPVan是否能抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng),本工作首先評(píng)價(jià)了PTPVan的抗菌性能。因?yàn)槿f(wàn)古霉素能夠選擇性識(shí)別革蘭氏陽(yáng)性菌,本工作還通過肉眼、熒光光譜法以及共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)觀察了細(xì)菌與PTPVan孵育后細(xì)菌顏色和熒光變化情況。上述研究結(jié)果顯示PTPVan對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有抑制生長(zhǎng)的作用且能選擇性識(shí)別革蘭氏陽(yáng)性菌。2.水熱衍生的原卟啉納米顆粒用于細(xì)菌的成像和滅活:原卟啉(PPIX)是一種常見的光敏劑(PS),能夠發(fā)射出紅色熒光,在可見光或近紅外光照射情況下能產(chǎn)生活性氧自由基(ROS),所產(chǎn)生的ROS可用于光動(dòng)力抗菌化學(xué)療法(PACT)。聚乙烯亞胺(PEI)是水溶性高分子,帶有正電荷,可以增強(qiáng)光敏劑與細(xì)菌的作用。本項(xiàng)工作中,作者采用簡(jiǎn)單的水熱法,利用PEI與PPIX之間的酰胺化作用制備含有豐富氨基和原卟啉基團(tuán)的原卟啉納米顆粒(PPIX-PEI NPs)。利用X射線光電子能譜、紫外-可見吸收分光光度計(jì)、熒光分光光度計(jì)、粒度/Zeta電位儀和透射電子顯微鏡對(duì)PPIX-PEI NPs的粒徑、形貌、表面電位、光學(xué)性能和化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。通過最低抑菌濃度實(shí)驗(yàn)(MIC)和生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)測(cè)試PPIX-PEI NPs的抗菌性能,PPIX-PEI NPs對(duì)E.coli、P.aeruginosa、S.aureus和S.epidermidis四種細(xì)菌的MIC值分別為850,212.5,425和26.6μg/mL。結(jié)果顯示:PPIX-PEI NPs對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌均有抑制作用。在635 nm激光照射下,低于MIC濃度(10μg/mL)的PPIX-PEI NPs產(chǎn)生ROS,能夠完全抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)。由此可知PPIX-PEI NPs對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌存在光動(dòng)力協(xié)同抗菌活性。此外,PPIX-PEI NPs發(fā)射出的紅色熒光有助于通過流式細(xì)胞儀和CLSM識(shí)別不同種類的細(xì)菌。
【圖文】：

圖 1.2 PCR 擴(kuò)增反應(yīng)的基本過程取材可以是病理生理標(biāo)本，如細(xì)胞、血液、羊水細(xì)胞真菌等病原體標(biāo)本。PCR 技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中最具病。PCR 技術(shù)在診斷感染性疾病中的應(yīng)用解決了免疫判斷疾病是否處于亞臨床或隱性狀態(tài)提供依據(jù)。但該方行，所需儀器多，耗時(shí)長(zhǎng)，操作復(fù)雜，復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)過果，假陽(yáng)性偏高[22]。R）的發(fā)展已經(jīng)有 50 多年的歷史。NMR 的原理主要是在外加恒定磁場(chǎng)的作用下原子核能級(jí)會(huì)產(chǎn)生分裂，用激發(fā)自旋系統(tǒng)，當(dāng)電磁波能量與能級(jí)差相同時(shí)，原子產(chǎn)生共振吸收信號(hào)。NMR 技術(shù)由于具有檢測(cè)速度快、，使其在物理、化學(xué)、生物、地質(zhì)、計(jì)量以及醫(yī)學(xué)等[23, 24]。

了它們的廣泛應(yīng)用。熒光標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)標(biāo)記檢測(cè)技術(shù)可分為有機(jī)染料標(biāo)記細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)和包裹有機(jī)熒光染標(biāo)記細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)。有機(jī)染料標(biāo)記細(xì)菌檢測(cè)技術(shù)：常用于標(biāo)記細(xì)菌熒光素類[31]，菁染料[32]，羅丹明類[33]等。其中，有機(jī)染料標(biāo)記可分直接連接和對(duì)細(xì)菌核酸進(jìn)行標(biāo)記兩種標(biāo)記模式。最早使用熒光標(biāo)記熒光素，熒光產(chǎn)率較高，但容易發(fā)生猝滅，通常與生物分子進(jìn)一步穩(wěn)定性。羅丹明類的穩(wěn)定性優(yōu)于熒光素，，不易光降解，但是羅丹明性差，在生化領(lǐng)域的應(yīng)用受到限制。異硫氰酸熒光素與羅丹明 6G 的，Wang 課題組[34]使用在中性溶液中帶正電荷的羅丹明 6G，成功地coli（圖 1.3），B. subtilis 和 S. aureus 等細(xì)菌進(jìn)行熒光檢測(cè)。常應(yīng)用于行標(biāo)記的有機(jī)染料主要有菁染料，吖啶橙（AO），SYTO 染料[35]，S 染料[36]以及 SYTOX 染料等。這些染料與細(xì)菌 DNA 作用后，熒光強(qiáng)從而實(shí)現(xiàn)細(xì)菌的檢測(cè)[37]。
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R978

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 吳他山;范桂松;;原卟啉鈉制備方法的改進(jìn)[J];生化藥物雜志;1987年04期

2 凌樹森,方群,楊芹,孫維林;原卟啉對(duì)家兔、小鼠肝臟損害的保護(hù)作用[J];中國(guó)藥理學(xué)通報(bào);1988年04期

3 鐘綿華;大氣中鉛對(duì)人體生物指標(biāo)的影響[J];環(huán)境與健康雜志;1989年02期

4 吳蔭云;;錫-原卟啉治療高膽紅素血癥[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));1989年02期

5 郭興家;李曉舟;徐淑坤;佟健;姜玉春;康平利;;人體血清中原卟啉Ⅸ自體熒光光譜研究[J];光譜學(xué)與光譜分析;2007年05期

6 何英;鐵缺乏癥小兒血清鋅與血清鋅原卟啉關(guān)系探討[J];中國(guó)婦幼保健;2004年07期

7 范巧云;劉群紅;李朝品;梁勇;;非抗凝動(dòng)物血制備原卟啉二鈉的方法改進(jìn)[J];熱帶病與寄生蟲學(xué);2006年03期

8 馬良娟;栗玉珍;;鈷原卟啉誘導(dǎo)血紅素氧合酶-1表達(dá)對(duì)豚鼠銀屑病樣模型的影響[J];中國(guó)麻風(fēng)皮膚病雜志;2010年10期

9 王自明;張陽(yáng)德;何剪太;林伶;;藥物誘導(dǎo)大鼠大腸癌組織原卟啉Ⅸ積聚的定量分析[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2010年01期

10 劉群紅,李朝品,張超,華慶平,霍震,童燕;非抗凝動(dòng)物血提取原卟啉二鈉的實(shí)驗(yàn)研究[J];淮南工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年04期

相關(guān)會(huì)議論文 前6條

1 T3建中;丁延yD;;偶氮染料姌v|肝癌及注射甲r老偎卮笫蟮母臥策鴠a

本文編號(hào)：2646079