【摘要】：1目的本課題通過制備符合預期要求的二氫卟吩e6(Ce6)磁性聲敏脂質(zhì)體,建立BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌皮下腫瘤模型,采用微透析技術為采樣方法,對二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體制劑進行腫瘤局部藥動學研究,以評價其在腫瘤局部的靶向性和聲敏性,并彌補傳統(tǒng)血藥濃度法無法科學評價腫瘤靶向制劑的不足,同時基于血藥濃度法和血液微透析法對制劑在大鼠體內(nèi)的整體藥動學進行研究,以全面描述藥物的體內(nèi)過程及靶向分布特性,為進一步深入研究聲動力治療技術相關的腫瘤靶向釋藥體系奠定基礎。2方法2.1二氫卟吩e6分析方法的建立采用紫外分光光度法和高相液相色譜法兩種方法對Ce6進行含量測定,并分別進行方法學考察。2.2二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評價采用薄膜分散法制備磁性Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體,對制備的Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體凍干前后的包封率、粒徑、電勢、滲漏率及體外聲敏釋藥特性測定以評價制劑的質(zhì)量。2.3二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)整體藥動學研究對12 h內(nèi)血液探針Ce6在體外、大鼠體內(nèi)微透析回收率穩(wěn)定性進行考察,采用血藥濃度法和血液微透析法對Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體及Ce6溶液劑在大鼠體內(nèi)整體藥動學過程進行研究,繪制相關的藥時曲線,采用DAS 2.1.1軟件對藥動學參數(shù)進行計算并比較分析。2.4二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體荷瘤裸鼠腫瘤局部藥動學研究建立BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌皮下腫瘤模型;將線性探針植入荷瘤裸鼠皮下腫瘤組織進行腫瘤局部藥動學過程,藥動學實驗分四組(A.Ce6溶液劑外加磁場組,B.Ce6磁性聲敏脂質(zhì)不加磁場組,C.Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體不加磁場組;D.Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體外加磁場超聲組),給藥方式為腹腔注射,給藥劑量為10 mg.kg~(-1)(按Ce6計算),以改良林格氏液為灌流液,流速為2μL·min~(-1),利用反透析法測定體內(nèi)回收率,HPLC測量并計算藥物濃度,繪制藥時曲線,采用軟件DAS 2.1.1計算藥動學參數(shù)。3結果3.1 Ce6檢測方法的建立分別建立了紫外分光光度法和高效液相色譜法檢測Ce6含量的方法。就紫外分光光度法而言,在檢測波長為403nm的條件下,Ce6線性范圍、穩(wěn)定性、回收率、儀器精密度等均符合實驗要求。高效液相色譜法分析條件為:Agilent1260高效液相色譜系統(tǒng),DAD檢測器;檢測波長為403nm;柱溫為25℃;色譜柱為WondaSil C18-WR柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流動相為乙腈-0.2%磷酸水(50:50);流速為1 mL·min~(-1)。在此色譜條件下,Ce6改良林格氏液、Ce6含藥血漿樣品峰形尖銳且對稱,出峰時間分別為5.78,6.66 min,與雜質(zhì)分離度良好,其線性范圍、檢測限及定量限等均滿足實驗要求。3.2 Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評價采用薄膜分散法制備的Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體凍干前后包封率為92.21±1.13%,91.89±0.99%,Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體凍干前后粒徑分別為157.90±3.66 nm、177.63±4.94nm,Zeta電勢分別為-20.70±0.92 mV及-7.77±0.85 mV;在超聲頻率為1.0 MHz,超聲強度為2.0 W/cm~2,超聲時間分別為2.5,5,8,12 min范圍內(nèi),在2.5~8 min隨著超聲時間的增加,Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體體外累計釋放度逐漸增大,8~12 min體外累計釋放度增加不明顯。3.3二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)整體藥動學研究無論是血液微透析法還是血藥濃度法,Ce6溶液劑和Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體經(jīng)腹腔或尾靜脈注射后在大鼠體內(nèi)的藥動學房室模型都符合二室模型。在相同劑型同種給藥方式的情況下,血液微透析法的AUC、Cmax均比血藥濃度法組稍大,考慮是血藥濃度法需要對大鼠進行不斷采血使血容量減少所導致;血藥濃度法CL、MRT更大,則可能是麻醉狀態(tài)下(本研究血液微透析法是在麻醉大鼠進行)機體的代謝通常會減弱所導致;其余各參數(shù)值差異不是很明顯,表明微透析采樣技術對動物本身的生理狀態(tài)影響不大,而其操作除了血液探針的植入稍難,其樣品無需再處理便可直接進高效液相色譜儀或液質(zhì)聯(lián)用儀檢測,其樣品收集過程則完全可以借助自動采樣器自動采集,這進一步驗證了血液微透析法在大鼠體內(nèi)進行藥動學研究的可行性與優(yōu)越性。給予相同劑型(Ce6溶液劑或脂質(zhì)體制劑),腹腔注射給藥都有一個相對短暫的吸收過程,而尾靜脈給藥(直接入血沒有吸收過程)后血藥濃度能迅速達到最大值,相對腹腔注射而言其Cmax更大,生物利用度更高,其分布相半衰期t1/2α和消除相半衰期t1/2β更短,體內(nèi)滯留時間MRT0-∞更短,并能夠更快速地代謝。相同給藥方式(尾靜脈注射或腹腔注射給藥),血藥濃度法Ce6脂質(zhì)體消除相半衰期t1/2β(Ce6脂質(zhì)體的t1/2β是分別溶液劑的1.24,1.48倍)更長,體內(nèi)滯留時間(Ce6脂質(zhì)體的MRT0-∞是溶液劑的1.50,1.68倍)也更長,說明制備的Ce6脂質(zhì)體能夠延長藥物在體內(nèi)的時間,具有良好的緩釋作用。3.4二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體腫瘤局部藥動學研究A、B、C、D四組藥物在腫瘤局部藥動學分布過程均符合二房室開放模型,各組Tmax依次為2.6±0.279,1.667±0.236,1.467±0.183 h,1.734±0.149 h,A組與其他三組相比,達峰時間更慢,表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體分布更快。C組比B組達峰時間更快,表明磁性聲敏脂質(zhì)體在磁場的作用下能更快速地聚集到腫瘤組織。而脂質(zhì)體外加磁場溶液劑組分布相半衰期t_(1/2α)較其脂質(zhì)體組更長,消除項半衰期t_(1/2β)較其他組都要短很多,體內(nèi)滯留時間MRT_(0-∞)值及AUC_(0-∞)最小,說明脂質(zhì)體制劑使藥物分布更快,相除更慢,體內(nèi)滯留時間增大(緩釋),生物利用度更高。脂質(zhì)體外加磁場組比脂質(zhì)體不加磁場組,t_(1/2α)更小,t_(1/2β)、MRT_(0-∞)值及AUC_(0-∞)更大,表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體具有良好的磁靶向性,外加磁場使該其分布更快,消除更慢,體內(nèi)滯留時間增長,生物利用度增加。由于外加磁場組的t_(max)為1.467 h,所以選擇給藥1 h后給予脂質(zhì)體外加磁場超聲組腫瘤局部超聲處理,而得到的藥動學參數(shù)Cmax比脂質(zhì)體外加磁場組更大,且其后4 h內(nèi)藥物濃度對比脂質(zhì)體外加磁場組更大,而其t_(1/2β)、MRT_(0-∞)值稍小,表明超聲促進了脂質(zhì)體中藥物的釋放(突釋)。由裸鼠腫瘤局部藥物濃度—時間曲線結果可知,對荷瘤裸鼠進行聲動力療法時可將Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體的t_(max)(1.467 h)作為超聲輻照時間點。裸鼠腫瘤局部藥動學參數(shù)結果表明,Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體具有良好的緩釋性,磁靶向性,聲敏突釋性。4結論4.1采用紫外分光光度法能滿足體外包封率、磁相應試驗等含量測定要求;在既定的色譜條件下,采用高效液相色譜法,無論是血藥濃度法還是微透析法,在一定濃度范圍內(nèi),Ce6的濃度與其峰面積線性關系良好,方法專屬性、精密度、穩(wěn)定性等均能夠滿足本研究的檢測要求,采用高效液相色譜法能準確穩(wěn)定地對Ce6進行定量分析。4.2采用薄膜分散法制備的脂質(zhì)體凍干前包封率、粒徑、電勢均變化不大,其值大小均符合預期要求,體外釋放度實驗表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體具有明顯的緩釋與突釋性(超聲波激發(fā))。4.3血液微透析法與傳統(tǒng)血藥濃度法相比,相關藥動學參數(shù)差異不是很大,證實了微透析法應用到Ce6體內(nèi)藥動學研究的可行性和可靠性;兩種方法藥動學參數(shù)表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體能夠延長藥物在體內(nèi)的時間,具有良好的緩釋作用。4.4 BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌癌細胞皮下腫瘤模型成模周期短,成瘤率高,適合微透析研究進行腫瘤局部藥動學研究。4.5自制的二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體在外加磁場的條件下,能迅速地聚集到靶部位,腫瘤靶向性高。在脂質(zhì)體外加磁場組Tmax超聲輻照后其腫瘤局部藥物濃度明顯提高,這表明Ce6脂質(zhì)體具有良好的聲敏性(超聲波可以促進Ce6脂質(zhì)體釋藥)。4.6本課題建立了基于微透析采樣技術的新型抗腫瘤藥物靶向給藥系統(tǒng)腫瘤局部藥動學研究的一般研究方法,為今后結合聲動力療法腫瘤局部藥動學研究奠定了基礎。
【圖文】：

透析技術應用于二氫卟吩 e6 磁性聲敏脂質(zhì)體的藥動學研二章 二氫卟吩 e6 檢測方法的建lorin e6，Ce6）是一種四吡咯化合物，其制、提煉和修飾而得的單體，研究顯示瘤、膀胱癌、肺癌等）的藥理作用。和易氧化的特點，其難溶于水，溶于甲H36N4O6，分子量為 596.67，其結構見下圖

圖 2-3 UV 法測定 Ce6 標準曲線密度試驗2.2.4項下配制的0.368，2.30，9.20 μg/mL低中高三種濃度Ce6甲醇溶液計算日內(nèi)精密度，連續(xù)5天測定，計算日間精密度。結果（見表2-1）日別為2.61%、1.22%、1.39%，，日間精密度RSD分別為3.31%、1.33%、1.41度良好。表2-1 UV法測定Ce6精密度結果/μg·mL-1日內(nèi)精密度 日間精密度測得濃度/μg·mL-1RSD（%） 測得濃度/μg·mL-1RSD（680.3852.610.3883.30.377 0.3820.362 0.3590.379 0.3780.365 0.391
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R943;R965

【參考文獻】

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本文編號：2638903