【摘要】：1目的本課題通過(guò)制備符合預(yù)期要求的二氫卟吩e6(Ce6)磁性聲敏脂質(zhì)體,建立BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌皮下腫瘤模型,采用微透析技術(shù)為采樣方法,對(duì)二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體制劑進(jìn)行腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)研究,以評(píng)價(jià)其在腫瘤局部的靶向性和聲敏性,并彌補(bǔ)傳統(tǒng)血藥濃度法無(wú)法科學(xué)評(píng)價(jià)腫瘤靶向制劑的不足,同時(shí)基于血藥濃度法和血液微透析法對(duì)制劑在大鼠體內(nèi)的整體藥動(dòng)學(xué)進(jìn)行研究,以全面描述藥物的體內(nèi)過(guò)程及靶向分布特性,為進(jìn)一步深入研究聲動(dòng)力治療技術(shù)相關(guān)的腫瘤靶向釋藥體系奠定基礎(chǔ)。2方法2.1二氫卟吩e6分析方法的建立采用紫外分光光度法和高相液相色譜法兩種方法對(duì)Ce6進(jìn)行含量測(cè)定,并分別進(jìn)行方法學(xué)考察。2.2二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)采用薄膜分散法制備磁性Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體,對(duì)制備的Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體凍干前后的包封率、粒徑、電勢(shì)、滲漏率及體外聲敏釋藥特性測(cè)定以評(píng)價(jià)制劑的質(zhì)量。2.3二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)整體藥動(dòng)學(xué)研究對(duì)12 h內(nèi)血液探針Ce6在體外、大鼠體內(nèi)微透析回收率穩(wěn)定性進(jìn)行考察,采用血藥濃度法和血液微透析法對(duì)Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體及Ce6溶液劑在大鼠體內(nèi)整體藥動(dòng)學(xué)過(guò)程進(jìn)行研究,繪制相關(guān)的藥時(shí)曲線,采用DAS 2.1.1軟件對(duì)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行計(jì)算并比較分析。2.4二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體荷瘤裸鼠腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)研究建立BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌皮下腫瘤模型;將線性探針植入荷瘤裸鼠皮下腫瘤組織進(jìn)行腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)過(guò)程,藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)分四組(A.Ce6溶液劑外加磁場(chǎng)組,B.Ce6磁性聲敏脂質(zhì)不加磁場(chǎng)組,C.Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體不加磁場(chǎng)組;D.Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體外加磁場(chǎng)超聲組),給藥方式為腹腔注射,給藥劑量為10 mg.kg~(-1)(按Ce6計(jì)算),以改良林格氏液為灌流液,流速為2μL·min~(-1),利用反透析法測(cè)定體內(nèi)回收率,HPLC測(cè)量并計(jì)算藥物濃度,繪制藥時(shí)曲線,采用軟件DAS 2.1.1計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。3結(jié)果3.1 Ce6檢測(cè)方法的建立分別建立了紫外分光光度法和高效液相色譜法檢測(cè)Ce6含量的方法。就紫外分光光度法而言,在檢測(cè)波長(zhǎng)為403nm的條件下,Ce6線性范圍、穩(wěn)定性、回收率、儀器精密度等均符合實(shí)驗(yàn)要求。高效液相色譜法分析條件為:Agilent1260高效液相色譜系統(tǒng),DAD檢測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng)為403nm;柱溫為25℃;色譜柱為WondaSil C18-WR柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水(50:50);流速為1 mL·min~(-1)。在此色譜條件下,Ce6改良林格氏液、Ce6含藥血漿樣品峰形尖銳且對(duì)稱,出峰時(shí)間分別為5.78,6.66 min,與雜質(zhì)分離度良好,其線性范圍、檢測(cè)限及定量限等均滿足實(shí)驗(yàn)要求。3.2 Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)采用薄膜分散法制備的Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體凍干前后包封率為92.21±1.13%,91.89±0.99%,Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體凍干前后粒徑分別為157.90±3.66 nm、177.63±4.94nm,Zeta電勢(shì)分別為-20.70±0.92 mV及-7.77±0.85 mV;在超聲頻率為1.0 MHz,超聲強(qiáng)度為2.0 W/cm~2,超聲時(shí)間分別為2.5,5,8,12 min范圍內(nèi),在2.5~8 min隨著超聲時(shí)間的增加,Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體體外累計(jì)釋放度逐漸增大,8~12 min體外累計(jì)釋放度增加不明顯。3.3二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體大鼠體內(nèi)整體藥動(dòng)學(xué)研究無(wú)論是血液微透析法還是血藥濃度法,Ce6溶液劑和Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體經(jīng)腹腔或尾靜脈注射后在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)房室模型都符合二室模型。在相同劑型同種給藥方式的情況下,血液微透析法的AUC、Cmax均比血藥濃度法組稍大,考慮是血藥濃度法需要對(duì)大鼠進(jìn)行不斷采血使血容量減少所導(dǎo)致;血藥濃度法CL、MRT更大,則可能是麻醉狀態(tài)下(本研究血液微透析法是在麻醉大鼠進(jìn)行)機(jī)體的代謝通常會(huì)減弱所導(dǎo)致;其余各參數(shù)值差異不是很明顯,表明微透析采樣技術(shù)對(duì)動(dòng)物本身的生理狀態(tài)影響不大,而其操作除了血液探針的植入稍難,其樣品無(wú)需再處理便可直接進(jìn)高效液相色譜儀或液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè),其樣品收集過(guò)程則完全可以借助自動(dòng)采樣器自動(dòng)采集,這進(jìn)一步驗(yàn)證了血液微透析法在大鼠體內(nèi)進(jìn)行藥動(dòng)學(xué)研究的可行性與優(yōu)越性。給予相同劑型(Ce6溶液劑或脂質(zhì)體制劑),腹腔注射給藥都有一個(gè)相對(duì)短暫的吸收過(guò)程,而尾靜脈給藥(直接入血沒(méi)有吸收過(guò)程)后血藥濃度能迅速達(dá)到最大值,相對(duì)腹腔注射而言其Cmax更大,生物利用度更高,其分布相半衰期t1/2α和消除相半衰期t1/2β更短,體內(nèi)滯留時(shí)間MRT0-∞更短,并能夠更快速地代謝。相同給藥方式(尾靜脈注射或腹腔注射給藥),血藥濃度法Ce6脂質(zhì)體消除相半衰期t1/2β(Ce6脂質(zhì)體的t1/2β是分別溶液劑的1.24,1.48倍)更長(zhǎng),體內(nèi)滯留時(shí)間(Ce6脂質(zhì)體的MRT0-∞是溶液劑的1.50,1.68倍)也更長(zhǎng),說(shuō)明制備的Ce6脂質(zhì)體能夠延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的時(shí)間,具有良好的緩釋作用。3.4二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)研究A、B、C、D四組藥物在腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)分布過(guò)程均符合二房室開放模型,各組Tmax依次為2.6±0.279,1.667±0.236,1.467±0.183 h,1.734±0.149 h,A組與其他三組相比,達(dá)峰時(shí)間更慢,表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體分布更快。C組比B組達(dá)峰時(shí)間更快,表明磁性聲敏脂質(zhì)體在磁場(chǎng)的作用下能更快速地聚集到腫瘤組織。而脂質(zhì)體外加磁場(chǎng)溶液劑組分布相半衰期t_(1/2α)較其脂質(zhì)體組更長(zhǎng),消除項(xiàng)半衰期t_(1/2β)較其他組都要短很多,體內(nèi)滯留時(shí)間MRT_(0-∞)值及AUC_(0-∞)最小,說(shuō)明脂質(zhì)體制劑使藥物分布更快,相除更慢,體內(nèi)滯留時(shí)間增大(緩釋),生物利用度更高。脂質(zhì)體外加磁場(chǎng)組比脂質(zhì)體不加磁場(chǎng)組,t_(1/2α)更小,t_(1/2β)、MRT_(0-∞)值及AUC_(0-∞)更大,表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體具有良好的磁靶向性,外加磁場(chǎng)使該其分布更快,消除更慢,體內(nèi)滯留時(shí)間增長(zhǎng),生物利用度增加。由于外加磁場(chǎng)組的t_(max)為1.467 h,所以選擇給藥1 h后給予脂質(zhì)體外加磁場(chǎng)超聲組腫瘤局部超聲處理,而得到的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax比脂質(zhì)體外加磁場(chǎng)組更大,且其后4 h內(nèi)藥物濃度對(duì)比脂質(zhì)體外加磁場(chǎng)組更大,而其t_(1/2β)、MRT_(0-∞)值稍小,表明超聲促進(jìn)了脂質(zhì)體中藥物的釋放(突釋)。由裸鼠腫瘤局部藥物濃度—時(shí)間曲線結(jié)果可知,對(duì)荷瘤裸鼠進(jìn)行聲動(dòng)力療法時(shí)可將Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體的t_(max)(1.467 h)作為超聲輻照時(shí)間點(diǎn)。裸鼠腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果表明,Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體具有良好的緩釋性,磁靶向性,聲敏突釋性。4結(jié)論4.1采用紫外分光光度法能滿足體外包封率、磁相應(yīng)試驗(yàn)等含量測(cè)定要求;在既定的色譜條件下,采用高效液相色譜法,無(wú)論是血藥濃度法還是微透析法,在一定濃度范圍內(nèi),Ce6的濃度與其峰面積線性關(guān)系良好,方法專屬性、精密度、穩(wěn)定性等均能夠滿足本研究的檢測(cè)要求,采用高效液相色譜法能準(zhǔn)確穩(wěn)定地對(duì)Ce6進(jìn)行定量分析。4.2采用薄膜分散法制備的脂質(zhì)體凍干前包封率、粒徑、電勢(shì)均變化不大,其值大小均符合預(yù)期要求,體外釋放度實(shí)驗(yàn)表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體具有明顯的緩釋與突釋性(超聲波激發(fā))。4.3血液微透析法與傳統(tǒng)血藥濃度法相比,相關(guān)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)差異不是很大,證實(shí)了微透析法應(yīng)用到Ce6體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)研究的可行性和可靠性;兩種方法藥動(dòng)學(xué)參數(shù)表明Ce6磁性聲敏脂質(zhì)體能夠延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的時(shí)間,具有良好的緩釋作用。4.4 BALB/c裸鼠SPCA-1人肺腺癌癌細(xì)胞皮下腫瘤模型成模周期短,成瘤率高,適合微透析研究進(jìn)行腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)研究。4.5自制的二氫卟吩e6磁性聲敏脂質(zhì)體在外加磁場(chǎng)的條件下,能迅速地聚集到靶部位,腫瘤靶向性高。在脂質(zhì)體外加磁場(chǎng)組Tmax超聲輻照后其腫瘤局部藥物濃度明顯提高,這表明Ce6脂質(zhì)體具有良好的聲敏性(超聲波可以促進(jìn)Ce6脂質(zhì)體釋藥)。4.6本課題建立了基于微透析采樣技術(shù)的新型抗腫瘤藥物靶向給藥系統(tǒng)腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)研究的一般研究方法,為今后結(jié)合聲動(dòng)力療法腫瘤局部藥動(dòng)學(xué)研究奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

透析技術(shù)應(yīng)用于二氫卟吩 e6 磁性聲敏脂質(zhì)體的藥動(dòng)學(xué)研二章 二氫卟吩 e6 檢測(cè)方法的建lorin e6，Ce6）是一種四吡咯化合物，其制、提煉和修飾而得的單體，研究顯示瘤、膀胱癌、肺癌等）的藥理作用。和易氧化的特點(diǎn)，其難溶于水，溶于甲H36N4O6，分子量為 596.67，其結(jié)構(gòu)見(jiàn)下圖

圖 2-3 UV 法測(cè)定 Ce6 標(biāo)準(zhǔn)曲線密度試驗(yàn)2.2.4項(xiàng)下配制的0.368，2.30，9.20 μg/mL低中高三種濃度Ce6甲醇溶液計(jì)算日內(nèi)精密度，連續(xù)5天測(cè)定，計(jì)算日間精密度。結(jié)果（見(jiàn)表2-1）日別為2.61%、1.22%、1.39%，，日間精密度RSD分別為3.31%、1.33%、1.41度良好。表2-1 UV法測(cè)定Ce6精密度結(jié)果/μg·mL-1日內(nèi)精密度 日間精密度測(cè)得濃度/μg·mL-1RSD（%） 測(cè)得濃度/μg·mL-1RSD（680.3852.610.3883.30.377 0.3820.362 0.3590.379 0.3780.365 0.391
【學(xué)位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R943;R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2638903