【摘要】：蓮房原花青素(Lotus seedpod procyanidins,LSPCs)是從蓮房中提取的一種類多酚類物質(zhì),其分子結(jié)構(gòu)中含有富電子的羥基基團(tuán),具有很強(qiáng)的抗氧化能力,對(duì)神經(jīng)毒性具有預(yù)防作用,但目前對(duì)其預(yù)防機(jī)制的研究較少。丙烯酰胺(Acrylamide,ACR)是人們?nèi)粘Ｉ钪胁豢杀苊鈺?huì)攝入的一種食源性毒物,已知ACR能通過(guò)氧化應(yīng)激反應(yīng)引起神經(jīng)毒性。從天然產(chǎn)物中篩選具有預(yù)防ACR神經(jīng)毒性的營(yíng)養(yǎng)成分,已成為預(yù)防ACR食源性毒性的有效策略之一�；诖�,本論文利用化學(xué)體系和食品體系研究LSPCs對(duì)ACR生成的抑制或清除作用。在此基礎(chǔ)上,選取星型膠質(zhì)細(xì)胞/海馬神經(jīng)元共培養(yǎng)體系研究LSPCs對(duì)ACR致神經(jīng)毒性的預(yù)防作用及機(jī)制,為L(zhǎng)SPCs用于預(yù)防ACR神經(jīng)毒性產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)提供理論基礎(chǔ)和依據(jù)。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下:1.LSPCs對(duì)ACR生成的抑制或清除作用利用模擬體溫體系、美拉德反應(yīng)體系和食品體系研究LSPCs對(duì)ACR生成的抑制或清除作用。反應(yīng)體系中LSPCs的添加量為0.05%、0.1%、0.25%、0.5%、1.0%,反應(yīng)產(chǎn)物通過(guò)氣相色譜測(cè)定。結(jié)果,在模擬體溫體系中,LSPCs的不同添加量對(duì)ACR含量沒(méi)有顯著影響,表明LSPCs對(duì)已生成的ACR沒(méi)有清除作用。在果糖/天冬酰胺模擬的美拉德反應(yīng)體系中,100、120、140、160、180℃五種溫度下,LSPCs對(duì)模擬體系中ACR的生成均具有抑制作用,各溫度下最大抑制率分別為31.79%、34.0%、44.83%、42.42%、39.61%,但其抑制率與添加量并不呈線性關(guān)系。100℃、120℃條件下,隨著LSPCs劑量的增加,對(duì)ACR的抑制率不斷上升,當(dāng)溫度達(dá)到140℃后,高劑量組抑制率開(kāi)始出現(xiàn)不同程度的下降。在油炸薯片模擬的食品體系中,LSPCs的添加均能抑制ACR的生成,當(dāng)LSPCs的添加量低于1.0%時(shí),抑制率隨LSPCs添加量而增高,其最大抑制率達(dá)到43.21%,但當(dāng)LSPCs添加量超過(guò)1.0%時(shí),抑制率開(kāi)始下降。2.ACR致神經(jīng)細(xì)胞損傷模型的建立采用剛出生24h內(nèi)的SD大鼠,通過(guò)原位取材,建立星型膠質(zhì)細(xì)胞、海馬神經(jīng)元細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞/海馬神經(jīng)元共培養(yǎng)三種細(xì)胞模型,采用不同濃度的ACR(2、4、6、8、10μg/mL)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染毒,觀察細(xì)胞形態(tài),并用MTT法測(cè)定其存活率,對(duì)三種細(xì)胞模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果,星型膠質(zhì)細(xì)胞模型和海馬神經(jīng)元細(xì)胞模型細(xì)胞純度均能達(dá)到90%以上,ACR對(duì)三種細(xì)胞模型均具有明顯的損傷作用。其中,共培養(yǎng)細(xì)胞模型經(jīng)染毒后,細(xì)胞存活率穩(wěn)定性優(yōu)于其他兩種單一細(xì)胞培養(yǎng)模型,且更接近于人體的復(fù)雜環(huán)境,適用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。因此,以ACR的IC50值6.78μg/mL損傷共培養(yǎng)細(xì)胞48 h作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)條件。3.LSPCs對(duì)ACR致共培養(yǎng)細(xì)胞損傷的預(yù)防作用及機(jī)制研究實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、損傷組和預(yù)防組,對(duì)照組不做任何處理,損傷組以前文得出的損傷條件進(jìn)行處理,預(yù)防組采用終濃度分別為2.5、5、10μg/mL的LSPCs提前4 h預(yù)處理后,再加入ACR共同處理共培養(yǎng)細(xì)胞。(1)通過(guò)觀察共培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞存活率、細(xì)胞內(nèi)[Ca~(2+)]i、活性氧(ROS)含量變化、細(xì)胞線粒體膜電位變化、谷胱甘肽(GSH)及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)含量變化,研究LSPCs對(duì)ACR致神經(jīng)損傷的預(yù)防作用。結(jié)果,經(jīng)過(guò)LSPCs預(yù)處理后,神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)顯著改善,細(xì)胞存活率提升。同時(shí)與損傷組相比,線粒體膜電位顯著上升(P0.01),[Ca~(2+)]i、ROS含量顯著下降(P0.01),GSH含量和GSH-Px活力顯著上升(P0.01)。綜上,LSPCs對(duì)ACR的神經(jīng)毒性具有良好的預(yù)防作用。(2)采用Western blot測(cè)定共培養(yǎng)細(xì)胞氧化應(yīng)激相關(guān)蛋白(Nrf2、HO-1、胞漿Nrf2),炎癥因子NF-κB,神經(jīng)細(xì)胞突觸功能相關(guān)蛋白(包括突觸可塑性相關(guān)蛋白SYN、Arc和β-Ⅲ-Tubulin以及突觸后致密區(qū)蛋白PSD95)等蛋白含量的變化,研究LSPCs對(duì)ACR致神經(jīng)損傷的預(yù)防機(jī)制。結(jié)果,共培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)ACR損傷后,Nrf2、HO-1及胞漿Nrf2表達(dá)量顯著上調(diào)(P0.01),同時(shí)總NF-κB及胞漿NF-κB表達(dá)顯著上調(diào)(P0.01),經(jīng)LSPCs預(yù)處理后,HO-1表達(dá)量下調(diào)(P0.01),胞漿中Nrf2和NF-κB發(fā)生核轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。ACR損傷后突觸功能相關(guān)蛋白表達(dá)量均下降,LSPCs預(yù)處理組表達(dá)量上調(diào)。表明,ACR損傷神經(jīng)細(xì)胞可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS大量蓄積,谷胱甘肽大量耗竭,引起HO-1大量消耗,氧化應(yīng)激通路被激活,神經(jīng)突觸功能受到損傷。經(jīng)LSPCs預(yù)處理后,促進(jìn)了Nrf2和NF-κB的核轉(zhuǎn)移,神經(jīng)突觸功能受到保護(hù)。
【圖文】：

μL；進(jìn)樣口溫度：240℃；檢測(cè)器：FID；檢測(cè)器溫度：280℃程序：55℃ (1 min) → 15℃/min → 170℃ (3 min) → 3℃/min →n → 220℃ (6 min)。據(jù)統(tǒng)計(jì)中每組數(shù)據(jù)重復(fù)測(cè)定至少 3 次，采用 SPSS 16.0 軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)間差異分析采用單因素方差分析，P<0.05 及 P<0.01 被認(rèn)。與分析-DBPA 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制DBPA 標(biāo)準(zhǔn)溶液氣相色譜圖如圖 2.1 所示，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖 2.2 所=1385.2x+6609.4，R2=0.9961。

3-DBPA 溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig 2.2 Standard curve of 2,3-DBPA同體系下蓮房原花青素對(duì)丙烯酰胺生成或清除的影響溫環(huán)境體系 2.3 可以看出，，37℃條件下，ACR 的含量并不受 LSPCs 濃度量下，ACR 含量雖有波動(dòng)，但其含量并未明顯下降。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R99

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2627290