【摘要】：目的:蠶絲蛋白肽(silk fibroin peptide,SFP)是由清華大學(xué)生物力學(xué)與醫(yī)學(xué)工程研究所趙紅平課題組通過(guò)水解法提取的一種多肽,前期已經(jīng)證明蠶絲蛋白肽具有抗腫瘤、抗氧化、提高正常小鼠以及免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)功能,本課題的主要目的是研究SFP在腫瘤環(huán)境下對(duì)小鼠免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)效應(yīng),并初步探索其作用機(jī)制,在此基礎(chǔ)上研究SFP與化療藥物聯(lián)用是否有解毒增效作用。方法:1.為評(píng)價(jià)SFP的抗腫瘤作用,選用BALB/C小鼠,構(gòu)建S180皮下實(shí)體瘤模型,隨機(jī)分成對(duì)照組(生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照藥胸腺五肽組(1mg/kg)、SFP低劑量(300 mg/kg)和高劑量組(600 mg/kg),腹腔注射連續(xù)給藥28天,給藥期間記錄小鼠體重、攝食飲水量及腫瘤體積變化,觀察小鼠生命體征,結(jié)束后檢測(cè)血常規(guī)并解剖觀察主要臟器有無(wú)病變,剝離瘤塊計(jì)算抑瘤率。2.為研究SFP對(duì)荷瘤小鼠的免疫調(diào)節(jié)功能,選用BALB/C小鼠,構(gòu)建S180皮下實(shí)體瘤模型,隨機(jī)分成對(duì)照組(生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照藥胸腺五肽組(1 mg/kg)、SFP低劑量(300 mg/kg)和高劑量組(600 mg/kg),腹腔注射連續(xù)給藥28天后解剖小鼠,取脾臟、胸腺計(jì)算免疫臟器指數(shù);提取脾淋巴細(xì)胞,通過(guò)MTT、流式等方法分別檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖能力和細(xì)胞亞群分布,血凝法檢測(cè)血清溶血素的含量,流式細(xì)胞儀檢測(cè)血清中IL-2、IL-4、IL-5、IFN-γ、TNF等細(xì)胞因子的含量,明確SFP對(duì)特異性免疫功能的影響;MTT方法檢測(cè)NK細(xì)胞活性,小鼠眼內(nèi)眥靜脈叢注射墨汁檢測(cè)碳粒廓清指數(shù),明確SFP對(duì)非特異性免疫功能的影響;取小鼠腫瘤組織做切片,通過(guò)H-E染色觀察淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況。3.為研究SFP與化療藥聯(lián)用后對(duì)機(jī)體毒性、抗腫瘤效果及免疫器官的影響,選用BALB/C小鼠,構(gòu)建S180皮下實(shí)體瘤模型,隨機(jī)分成對(duì)照組(生理鹽水)、不同劑量的SFP和環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)單獨(dú)用藥、聯(lián)合給藥組,腹腔注射給藥,給藥期間記錄小鼠體重、攝食飲水量及腫瘤體積變化,觀察小鼠生命體征。結(jié)束后摘眼球取血檢測(cè)血常規(guī)并解剖小鼠觀察主要臟器顏色及形態(tài)大小變化,取脾臟、胸腺計(jì)算免疫臟器指數(shù),剝離瘤塊計(jì)算抑瘤率。結(jié)果:1.小鼠皮下移植瘤實(shí)驗(yàn)表明,給藥期間小鼠體重均呈現(xiàn)穩(wěn)定增長(zhǎng)趨勢(shì),攝食飲水量在一定范圍內(nèi)平穩(wěn)波動(dòng),生命體征無(wú)異常狀況,血常規(guī)各項(xiàng)指標(biāo)及解剖后小鼠臟器顏色及形態(tài)大小均正常,SFP給藥組腫瘤明顯減小,由此說(shuō)明SFP具有較好的體內(nèi)抗腫瘤活性,而且不影響小鼠的一般狀態(tài)。2.SFP使免疫臟器指數(shù)增加,說(shuō)明SFP在體內(nèi)能促進(jìn)荷瘤小鼠免疫臟器的正常發(fā)育;MTT實(shí)驗(yàn)和流式結(jié)果表明,SFP能促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖,提高CD4+T、CD8+T亞群比例,增加IL-2、IL-4、TNF等細(xì)胞因子的含量,從而增強(qiáng)機(jī)體特異性免疫功能;SFP能增加碳粒廓清指數(shù),從而提高巨噬細(xì)胞的吞噬功能,H-E染色結(jié)果表明SFP能募集腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞到瘤組織中。綜上所述,SFP能保護(hù)并增強(qiáng)荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)功能。3.SFP與低劑量CTX(10 mg/kg)聯(lián)用可以明顯緩解CTX所致的骨髓抑制毒性和免疫器官衰退;與中劑量CTX(15 mg/kg)聯(lián)用對(duì)小鼠生命體征、血常規(guī)、臟器指數(shù)等指標(biāo)無(wú)顯著改善;而與高劑量CTX(20 mg/kg)聯(lián)用則明顯增強(qiáng)CTX所致的毒副作用。SFP與各劑量CTX聯(lián)用能夠不同程度地增強(qiáng)抗腫瘤效果,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.SFP具有較好的體內(nèi)抗腫瘤活性,而且不影響小鼠的一般狀態(tài)。2.SFP能夠顯著增強(qiáng)荷瘤小鼠的免疫功能,通過(guò)促進(jìn)免疫器官正常發(fā)育、調(diào)節(jié)機(jī)體的細(xì)胞免疫、體液免疫及非特異性免疫、促進(jìn)腫瘤組織T細(xì)胞浸潤(rùn)等多途徑發(fā)揮抗腫瘤免疫調(diào)節(jié)功能。3.SFP與CTX聯(lián)用的安全性和有效性,因CTX劑量不同而呈現(xiàn)不同表現(xiàn)。SFP對(duì)化療藥物的減毒增效作用尚需進(jìn)一步明確。
【圖文】：

圖 1 小鼠腹水瘤和皮下移植瘤模型1.2.3 實(shí)驗(yàn)分組與給藥1.2.3.1 實(shí)驗(yàn)小鼠購(gòu)買(mǎi)與飼養(yǎng)30 只雌性 BALB/C 小鼠，體重約 18~22 g，在天津市藥物研究院 SPF 級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，飼養(yǎng)間的溫度為 20~26℃，相對(duì)濕度為 40%~70%，晝夜相等時(shí)間的明暗交替，正常投放充足的飼料，自由飲水，在該條件下飼養(yǎng) 3-5 天使小鼠適應(yīng)新環(huán)境再進(jìn)行模型構(gòu)建。1.2.3.2 實(shí)驗(yàn)小鼠分組與給藥小鼠皮下移植瘤模型構(gòu)建成功后，選取瘤塊形態(tài)規(guī)則、大小均一的 24只小鼠按體重分層隨機(jī)分為 4 組，，分別為模型對(duì)照組（Control，生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照藥胸腺五肽組（TP-5，1 mg/kg）、蠶絲蛋白肽低劑量組（SFP (L)，300mg/kg）、蠶絲蛋白肽高劑量組（SFP (H)，600 mg/kg），每組 6 只小鼠，用棉簽蘸取適量 0.2% 品紅溶液給小鼠染色編號(hào)，編號(hào)順序分別為左上肢、左下肢、右上肢、右下肢、頭部、背部，分別代表 1-6。實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射方式給藥，根據(jù)小鼠體重配制適宜濃度的藥物，每只小鼠腹腔注射 0.2 ml 藥物溶液，

作用于實(shí)驗(yàn)小鼠后，不僅不會(huì)減輕小鼠的體重，還具有使表 1 荷瘤小鼠體重變化（mean ± SD，n=6）ay) Control (g) TP-5 (g) SFP (L) (g) S18.91±1.34 18.96±1.29 18.80±0.96 119.49±0.94 20.01±1.35 19.80±1.04 119.79±0.94 20.24±1.23 20.04±0.89 220.09±1.70 20.80±1.64 20.59±1.19 220.01±1.67 20.98±1.66 20.20±1.09 220.33±1.93 21.10±1.46 20.34±1.19 220.70±1.96 21.78±1.59 20.96±1.57 220.93±2.01 21.56±1.88 21.03±1.65 221.46±2.26 21.68±2.16 21.41±1.81 222.14±2.25 22.73±2.36 22.36±1.47 2照組相比無(wú)顯著性差異（P＞0.05）
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2626555