【摘要】：目的:探討沙利度胺在氧化應(yīng)激損傷過程中的作用以及初步探討其可能的作用機(jī)制。方法:體外氧化應(yīng)激損傷模型采用脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)構(gòu)建,分別用0.25μg/ml、0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml LPS處理6h、12h、24h,流式細(xì)胞術(shù)測定LPS最佳造模時(shí)間及濃度。MTT法測定沙利度胺的無細(xì)胞毒性濃度。本研究分為6組,分別為:Control組、模型組、沙利度胺單獨(dú)處理組、1μg/ml沙利度胺+1μg/ml LPS、10μg/ml沙利度胺+1μg/ml LPS、100μg/ml沙利度胺+1μg/mlLPS。沙利度胺分別預(yù)處理6h、12h、24h,LPS處理24h,TUNEL法與流式細(xì)胞儀測定沙利度胺最佳預(yù)處理時(shí)間及不同濃度沙利度胺的保護(hù)作用。Western Blot檢測NF-κB下游P65以及P-P65的表達(dá)量。流式細(xì)胞儀檢測ROS的產(chǎn)生量以及線粒體膜電位,Q-PCR檢測Bax、Bcl_2和Hif-1α的表達(dá)量。結(jié)果:MTT結(jié)果顯示沙利度胺濃度在0~125μg/ml范圍內(nèi)對(duì)HUVEC基本是無損傷的,故選取沙利度胺最大濃度作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的濃度。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,較低濃度的LPS即可引起凋亡,與處理6h,12h相比,0.25μg/ml、0.5μg/ml LPS分別處理HUVEC 24h后的凋亡率明顯增加(P0.05),且1μg/ml LPS處理HUVEC24h后凋亡率最高達(dá)到92%,相比處理6h和12h后的凋亡率,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2μg/ml LPS處理HUVEC在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與1μg/mlLPS處理后的凋亡率基本沒有差別。100μg/ml沙利度胺預(yù)處理6h后凋亡率明顯比模型組低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),但是與預(yù)處理12h、24h相比,凋亡率基本沒有改變,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。此外100μg/ml沙利度胺預(yù)處理后凋亡率(31.5%)相比10μg/ml(52.6%)和1μg/ml(68.6%)的沙利度胺預(yù)處理,凋亡率顯著下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。通過Western Blot檢測p-P65與P65的表達(dá)量,P65在15min是達(dá)到最大磷酸化水平,同時(shí)隨著沙利度胺的濃度的增加,P65的表達(dá)量沒有發(fā)生變化,p-P65的表達(dá)量逐漸降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P0.05)同時(shí)隨著沙利度胺預(yù)處理的濃度增加,ROS的產(chǎn)生量逐漸降低,線粒體膜電位有不同程度上升,與模型組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。同時(shí)通過檢測Bax、Bcl_2和Hif-1α的表達(dá)量,我們發(fā)現(xiàn),隨著沙利度胺濃度的上升,Bax的表達(dá)量逐漸下降,Bcl_2的表達(dá)量逐漸上升。差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)Hif-1α的表達(dá)量隨著沙利度胺的濃度增加而減少。結(jié)論:LPS可以成功構(gòu)建體外氧化應(yīng)激損傷模型,同時(shí)沙利度胺預(yù)處理可以通過調(diào)節(jié)Hif-1α/ROS之間的產(chǎn)生量來保護(hù)線粒體免于氧化應(yīng)激的損傷,為沙利度胺更好的應(yīng)用于臨床提供了研究基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1 LPS 最佳作用時(shí)間及濃度的確定Fig 1 Determination of optimal time and concentration of LPS4.2沙利度胺無細(xì)胞毒性濃度范圍的確定通過MTT法測定沙利度胺的無細(xì)胞毒性范圍，結(jié)果顯示，當(dāng)沙利度胺濃度為31μg/ml、62μg/ml、125μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞基本是無毒性作用的（P>0.05），故最終確定沙利度胺無細(xì)胞毒性濃度范圍為0~100μg/ml。見圖2。

通過MTT法測定沙利度胺的無細(xì)胞毒性范圍，結(jié)果顯示，當(dāng)沙利度胺濃度為31μg/ml、62μg/ml、125μg/ml時(shí)對(duì)細(xì)胞基本是無毒性作用的（P>0.05），故最終確定沙利度胺無細(xì)胞毒性濃度范圍為0~100μg/ml。見圖2。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2616146