【摘要】：目的:FA-QDs-FUA納米靶向給藥體系的制備與表征,并研究其體內(nèi)外抗肝癌作用及其作用機(jī)制。方法:1.FA-QDs-FUA納米給藥體系的制備:通過(guò)酰胺鍵將葉酸偶合到量子點(diǎn)表面,得到FA-QDs,再將經(jīng)溴乙酸修飾的5-氟尿嘧啶-1-乙酸(FUA)鍵合到QDs上,采用單因素輪換法優(yōu)化FA-QDs-FUA制備的條件,在優(yōu)化的條件下成功制備了FA-QDs-FUA納米給藥體系。2.FA-QDs-FUA納米給藥體系理化性質(zhì)及其體外生物相容性的表征研究:通過(guò)紫外(UV)光譜和熒光光譜表征FA-QDs-FUA的光學(xué)特性;采用紅外光譜確定FA-QDs-FUA的化學(xué)結(jié)構(gòu);利用掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)表征FA-QDs-FUA的形貌特征;通過(guò)納米粒度儀來(lái)表征FA-QDs-FUA的粒徑分布;通過(guò)紫外分光光度法測(cè)定FA-QDs-FUA的載藥量及其在不同p H下的藥物釋放性能;利用溶血實(shí)驗(yàn)考察FA-QDs-FUA的生物相容性。3.FA-QDs-FUA納米給藥體系的體外抗腫瘤作用及其機(jī)制的研究:選用人正常肝細(xì)胞L02、人肝癌細(xì)胞Hep G2和SMMC-7721為體外實(shí)驗(yàn)對(duì)象,通過(guò)MTT法表征FA-QDs-FUA的體外腫瘤增殖抑制作用;利用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)FA-QDs-FUA抑制腫瘤細(xì)胞遷移的能力;采用Transwell實(shí)驗(yàn)觀察FA-QDs-FUA的抑制腫瘤細(xì)胞侵襲的能力。采用顯微熒光成像來(lái)評(píng)價(jià)FA-QDs-FUA對(duì)三種肝細(xì)胞的體外靶向性情況。5.FA-QDs-FUA納米給藥體系體內(nèi)組織分布及其抗腫瘤作用研究:通過(guò)建立SMMC-7721肝癌荷瘤裸鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,并對(duì)其隨機(jī)分組腹腔注射給藥,記錄其存活率、體重、瘤體積的變化,給藥21天后,取出腫瘤組織和動(dòng)物的肝、腎等主要器官,其中一部分用于組織切片HE染色然后觀察其形態(tài),評(píng)價(jià)FA-QDs-FUA對(duì)動(dòng)物其他器官的毒副作用,另一部分腫瘤組織和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的心、肝、脾、肺、腎等主要器官組織經(jīng)過(guò)消解用于FA-QDs-FUA納米給藥體系體內(nèi)組織分布的評(píng)價(jià);同時(shí)通過(guò)連續(xù)對(duì)SD大鼠給藥7天后取血,通過(guò)全自動(dòng)生化檢測(cè)儀測(cè)定主要臟器相關(guān)指標(biāo)參數(shù)用于評(píng)價(jià)FA-QDs-FUA毒副作用。結(jié)果:篩選出的合成FA-QDs-FUA納米給藥體系最優(yōu)條件是:配料比為FA:PEG-QDs:FUA=10:1:100,最適溫度為37℃,反應(yīng)時(shí)間為2 h。在最優(yōu)合成條件下獲得的FA-QDs-FUA納米給藥體系載藥量為36.85%(n=3),平均粒徑為220.28 nm,Zeta電位為-13.3 m V;透射電鏡結(jié)果顯示該納米給藥體系粒徑分布均勻;紅外、紫外和熒光光譜表明成功合成出FA-QDs-FUA且不改變量子點(diǎn)的熒光特性;動(dòng)態(tài)透析法結(jié)果表明FA-QDs-FUA的具有良好的緩釋效果;FA-QDs-FUA的溶血率在5%以下,說(shuō)明其具有良好的生物相容性;MTT法的結(jié)果表明QDs的濃度小于40 n M是安全的,FA-QDs-FUA對(duì)腫瘤細(xì)胞具有較好的增殖抑制作用并存在時(shí)間和劑量依賴(lài)性;劃痕愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明FA-QDs-FUA具有抑制肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞遷移和侵襲的能力;熒光拍照結(jié)果顯示FA-QDs-FUA對(duì)肝癌細(xì)胞具有良好的靶向性;體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,FA-QDs-FUA在一定程度上減少了5-FU對(duì)主要臟器的毒副作用。FA-QDs-FUA在體內(nèi)外均具有良好的抗腫瘤作用。結(jié)論:成功制備了肝癌靶向性的FA-QDs-FUA納米給藥體系,該體系生物相容性好、安全、緩釋并且具有良好的體內(nèi)外抗腫瘤效果。
【圖文】：

FA-QDs-FUA納米給藥體系的制備與其靶向肝癌示意圖

A-QDs-FUA 納米給藥體系的紅外外吸收光譜UA 和 FA-QDs-FUA 的紅外吸收光譜如圖 2.2 所示。從圖中4 cm-1(-COOH 伸縮振動(dòng)) 和 1603 cm-1(-NH2彎曲振動(dòng))。F圖 2.1 FA-QDs-FUA 納米給藥體系的紫外吸收光譜圖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2611033