【摘要】：目的:二甲雙胍是使用最廣泛的抗糖尿病藥物之一,也是一種新型的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑。最近的研究證明使用二甲雙胍可降低某些癌癥的發(fā)病率,并且越來越多的證據(jù)表明該藥物作為抗癌藥物具有其潛在功效。因此,本研究探討了二甲雙胍對人肺癌細(xì)胞HCC827的抗腫瘤作用,并探討其可能的抗腫瘤作用機(jī)制。方法:CCK-8法檢測不同濃度二甲雙胍作用于HCC827細(xì)胞24 h、48h、72 h后對細(xì)胞增殖的影響;DAPI(4',6-二脒基-2-苯基吲哚)染色檢測細(xì)胞凋亡;JC-1(線粒體膜電位)試劑盒檢測細(xì)胞線粒體膜電位;流式細(xì)胞儀定量分析各組細(xì)胞的凋亡率;DCFH-DA(2,7-二氫二氯熒光黃雙乙酸鈉)熒光探針檢測ROS(活性氧);Dihydroethidium熒光探針檢測細(xì)胞內(nèi)超氧陰離子;脂質(zhì)氧化檢測試劑盒檢測MDA(丙二醛);實(shí)時(shí)PCR檢測BAX,BCL-2 mRNA轉(zhuǎn)錄情況,western blot檢測AMPK/mTOR通路蛋白,凋亡相關(guān)基因BAX、BCL-2以及DNA損傷蛋白p-H2A.X。結(jié)果:1.二甲雙胍對HCC827細(xì)胞增殖的作用HCC827細(xì)胞經(jīng)不同濃度二甲雙胍處理后,細(xì)胞生長速度減慢,提示二甲雙胍對HCC827細(xì)胞的生長有明顯的抑制作用,并且呈現(xiàn)濃度和時(shí)間的依賴性。2.DAPI染色檢測細(xì)胞凋亡對照組細(xì)胞形態(tài)為圓形,染色均勻,而經(jīng)不同濃度二甲雙胍處理的細(xì)胞,HCC827細(xì)胞呈現(xiàn)出典型凋亡特征:細(xì)胞變小,染色質(zhì)濃縮,邊緣化甚至產(chǎn)生凋亡小體。3.線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1試劑盒)檢測線粒體膜電位經(jīng)二甲雙胍干預(yù)的實(shí)驗(yàn)組綠/紅熒光比值比陰性對照組變大,提示二甲雙胍可降低腫瘤細(xì)胞線粒體膜電位(P0.01)。4.流式細(xì)胞儀檢測HCC827細(xì)胞凋亡情況結(jié)果顯示,10 mM、20 mM、40 mM組的細(xì)胞早期凋亡比例呈現(xiàn)上升趨勢,與對照組相比,實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率有顯著性差異(P0.01)。5.二甲雙胍對HCC827細(xì)胞ROS和MDA的影響從結(jié)果我們可以看出,與對照組相比,二甲雙胍干預(yù)后,細(xì)胞內(nèi)的活性氧隨著給藥濃度的升高而增加;二甲雙胍干預(yù)后,細(xì)胞中MDA水平升高(P0.05)。6.二甲雙胍對DNA損傷標(biāo)志物p-H2A.X的作用二甲雙胍可誘導(dǎo)ROS升高而引起HCC827細(xì)胞DNA損傷,結(jié)果顯示二甲雙胍可誘導(dǎo)DNA損傷標(biāo)志物p-H2A.X表達(dá)增加(P0.01)。7.二甲雙胍對AMPK/mTOR蛋白通路的作用HCC827細(xì)胞經(jīng)二甲雙胍干預(yù)48 h后,與對照組相比,p-AMPK表達(dá)上調(diào)(P0.05),p-mTOR的表達(dá)無明顯變化。8.二甲雙胍對細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的作用HCC827細(xì)胞經(jīng)二甲雙胍處理48 h后,與對照組相比,細(xì)胞凋亡基因BAX表達(dá)增高且其對應(yīng)的mRNA表達(dá)也升高、BCL-2表達(dá)降低且其mRNA也表達(dá)降低。結(jié)論:1.二甲雙胍能夠抑制人肺癌細(xì)胞HCC827的增殖,并且呈現(xiàn)出劑量與時(shí)間的依賴性。2.二甲雙胍能夠誘導(dǎo)人肺癌細(xì)胞HCC827細(xì)胞凋亡。二甲雙胍誘導(dǎo)HCC827細(xì)胞的凋亡機(jī)制與P-AMPK蛋白、BAX/BCL-2的表達(dá)上調(diào)和誘發(fā)活性氧的生成有關(guān)。
【圖文】：

CCK-8法測定二甲雙胍對人肺癌細(xì)胞HCC827增值的影響

Fig.1 The effect of metformin on the proliferation of human lung cancerHCC827 cells was detected by CCK-8Assay.Metformin was in 6 concentration gradients of 0 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM40 mM, and 80 mM. HCC827 cells were treated for 24 h, 48 h and 72 h. Dawere presented as mean ± SEM, n=3. *P < 0.05 vs control; **P < 0.01 control.
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Cheng-Chia Tsai;Tang-Wei Chuang;Li-Jen Chen;Ho-Shan Niu;Kun-Ming Chung;Juei-Tang Cheng;Kao-Chang Lin;;Increase in apoptosis by combination of metformin with silibinin in human colorectal cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2015年14期

2 ;Metformin induces apoptosis of pancreatic cancer cells[J];World Journal of Gastroenterology;2008年47期

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本文編號：2607501