【摘要】：本文以人肝臟細(xì)胞HepaRG和人星形細(xì)胞HSC為基礎(chǔ),利用懸滴技術(shù)進(jìn)行了3D模型的構(gòu)建,其原理是依靠細(xì)胞重力懸滴技術(shù)形成3D微組織球體。在3D懸滴模型建立完成后,對其功能表達(dá)進(jìn)行評價,白蛋白和尿素分泌,CYP酶和轉(zhuǎn)運體的基因表達(dá),并利用3D模型對納米顆粒的潛在毒性進(jìn)行研究。實驗結(jié)果表明,依靠細(xì)胞重力作用在懸滴板上形成3D微組織球體,微組織能夠在無依附、不解聚情況下培養(yǎng)數(shù)周,而且能夠精確控制細(xì)胞數(shù)量,增強(qiáng)細(xì)胞與細(xì)胞之間的聯(lián)系,HSC細(xì)胞的加入使形成的微組織體結(jié)構(gòu)更加緊密。通過對模型的評價,發(fā)現(xiàn)懸滴技術(shù)培養(yǎng)的3D細(xì)胞模型與常規(guī)2D細(xì)胞模型相比,能夠持續(xù)培養(yǎng)15天以上并維持較高的白蛋白和尿素分泌水平,還能高表達(dá)絕大多數(shù)藥物代謝酶和藥物轉(zhuǎn)運體,為長期重復(fù)給藥實驗提供了條件。我們分別用兩種模型對肝毒陽性藥鹽酸胺碘酮和異煙肼進(jìn)行了毒性檢測,實驗發(fā)現(xiàn)在2D模型中異煙肼未表現(xiàn)出毒性反應(yīng),而在3D模型中長期重復(fù)給藥時表現(xiàn)出明顯的毒性反應(yīng)。因此,3D模型在肝臟毒性評價中更加靈敏,特別是對需要肝臟代謝才能顯示出毒性的藥物和需要長期給藥的藥物是一種理想的肝毒性評價模型。進(jìn)一步利用該3D模型對納米顆粒的潛在毒性進(jìn)行了研究。實驗選取兩種納米氧化鐵顆粒、金納米顆粒和銀包金納米顆粒進(jìn)行研究。3D模型細(xì)胞乳酸脫氫酶釋放實驗中,高濃度納米氧化鐵在給藥后48 h產(chǎn)生了一定毒性,恢復(fù)4天后毒性消失,說明納米氧化鐵引起肝臟毒性可恢復(fù),該結(jié)果與以往體內(nèi)實驗報道相符;納米銀包金顆粒在給藥48 h后也產(chǎn)生毒性,而且在恢復(fù)4天后毒性未見消失,這說明納米銀包金肝臟毒性不可恢復(fù)。3D模型細(xì)胞活性實驗結(jié)果顯示,恢復(fù)4天后,也只有納米銀包金在高劑量表現(xiàn)出毒性。進(jìn)一步利用透射電子顯微鏡觀察到納米顆粒細(xì)胞的內(nèi)吞,納米銀包金顆粒能夠被細(xì)胞內(nèi)吞,且多以團(tuán)聚體的形式存在。綜上所述,3D肝臟模型在預(yù)測體內(nèi)肝臟毒方面,比2D肝細(xì)胞培養(yǎng)有更大的優(yōu)勢。
【圖文】：

圖 2-1 HepaRG 細(xì)胞結(jié)構(gòu)圖（左：200×，右：400×）Figure 2-1 HepaRG cell morphology (left: 200 ×, right: 400 ×)2.3.2 HSC 細(xì)胞結(jié)構(gòu)在正常肝臟細(xì)胞大家族中，，HSC 細(xì)胞數(shù)量并不多，但是 HSC 細(xì)胞卻能伸展分布到覆蓋整個肝竇微循環(huán)。HSC 細(xì)胞其形態(tài)不規(guī)則，胞體呈圓形或不規(guī)則形，常伸出數(shù)個星狀胞突。在培育五天后，HSC 細(xì)胞伸出胞突與鄰近的 HSC 細(xì)胞相接觸[65]。

圖 2-1 HepaRG 細(xì)胞結(jié)構(gòu)圖（左：200×，右：400×）Figure 2-1 HepaRG cell morphology (left: 200 ×, right: 400 ×).3.2 HSC 細(xì)胞結(jié)構(gòu)在正常肝臟細(xì)胞大家族中，HSC 細(xì)胞數(shù)量并不多，但是 HSC 細(xì)胞卻能伸展分布蓋整個肝竇微循環(huán)。HSC 細(xì)胞其形態(tài)不規(guī)則，胞體呈圓形或不規(guī)則形，常伸出數(shù)個胞突。在培育五天后，HSC 細(xì)胞伸出胞突與鄰近的 HSC 細(xì)胞相接觸[65]。
【學(xué)位授予單位】：河北大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R99

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4 段自v

本文編號：2605170