【摘要】：目的:通過小鼠腹腔注射抗腫瘤藥物紫杉醇建立外周神經(jīng)痛模型,研究二甲雙胍緩解紫杉醇引起神經(jīng)痛的作用并探討可能的機(jī)制。通過紫杉醇與二甲雙胍聯(lián)合作用于人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞,探討二甲雙胍增敏紫杉醇抗癌活性的作用機(jī)制。方法:60只小鼠動物房適應(yīng)性飼養(yǎng)3-5天,篩選出基礎(chǔ)痛閾值合格的小鼠50只,隨機(jī)將其分成5組:對照組、紫杉醇組(100 mg/kg)、秋水仙堿組(100μg/mg)、紫杉醇+秋水仙堿組和紫杉醇+二甲雙胍組(200 mg/kg)。紫杉醇隔天腹腔注射1次誘導(dǎo)外周神經(jīng)病理性疼痛;二甲雙胍和秋水仙堿于造模前1天開始腹腔注射,每天1次。分別在實(shí)驗(yàn)的第1、3、5、7、9、11、13天用紅外熱刺痛儀(紅外強(qiáng)度為40%)和機(jī)械針刺激檢測小鼠的熱痛閾值和機(jī)械痛閾值。人神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251分為4組:對照組、紫杉醇組、二甲雙胍組和紫杉醇+二甲雙胍組。藥物處理48 h后CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞的增殖抑制率;α-tubulin免疫熒光染色法檢測細(xì)胞微管的形態(tài)和數(shù)量變化;蛋白免疫印跡法檢測細(xì)胞游離和聚合微管的含量、自噬相關(guān)蛋白p62、LC3B的以及、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP和PERK的水平。結(jié)果:與對照組相比,紫杉醇腹腔注射可明顯誘導(dǎo)小鼠外周神經(jīng)病理性疼痛,降低機(jī)械痛閾值和熱痛閾值(P0.05)。與紫杉醇組相比,秋水仙堿和二甲雙胍可顯著改善紫杉醇誘導(dǎo)的神經(jīng)病理性疼痛,增加小鼠的機(jī)械痛閾值和熱刺痛閾值(P0.05)。CCK-8檢測結(jié)果顯示二甲雙胍和紫杉醇抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長U251的最佳給藥濃度分別是10 mM和1μM;二甲雙胍可顯著增強(qiáng)紫杉醇的抗癌作用,且聯(lián)合用藥的抑制效應(yīng)強(qiáng)于單一給藥組(P0.05)。U251細(xì)胞α-tubulin免疫熒光染色結(jié)果顯示:對照組微管形態(tài)規(guī)則,數(shù)量較多,染色均勻,微管從微管組織中心呈放射狀散發(fā)充滿胞質(zhì)直達(dá)細(xì)胞邊緣,呈清晰絲狀,圍繞在細(xì)胞核周圍,形成完整的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu);紫杉醇組的微管則呈現(xiàn)無規(guī)則的形態(tài)聚集在細(xì)胞核的周圍,結(jié)構(gòu)不清晰,細(xì)胞失去極性;Nocodazole組微管可見到密度較低呈現(xiàn)絲狀的梭形圍繞在細(xì)胞核外圍;紫杉醇和二甲雙胍聯(lián)合給藥組較紫杉醇單獨(dú)給藥組相比,微管數(shù)量減少,纖維稀疏、細(xì)長,重新向細(xì)胞兩極分布,呈束狀,熒光強(qiáng)度變?nèi)酢５鞍酌庖哂≯E結(jié)果顯示,紫杉醇可促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞微管的聚合,顯著降低游離態(tài)微管蛋白水平(P0.05);與紫杉醇組相比,二甲雙胍明顯逆轉(zhuǎn)紫杉醇誘導(dǎo)的微管聚合,降低穩(wěn)定微管含量,升高游離態(tài)微管水平(P0.05);二甲雙胍組、Nocodazole組游離微管含量高于聚合微管的含量。此外,與紫杉醇組相比,二甲雙胍和紫杉醇聯(lián)合給藥組GRP78、CHOP、PERK以及LC3B蛋白的表達(dá)量明顯高于單獨(dú)給藥組(P0.05),自噬底物p62蛋白的含量顯著低于單獨(dú)給藥組(P0.05),提示二甲雙胍可調(diào)控紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬活性的改變。結(jié)論:二甲雙胍可增敏化療藥物紫杉醇的抗癌活性,并減輕紫杉醇誘導(dǎo)的外周神經(jīng)病理性疼痛,其作用機(jī)制可能與其調(diào)控細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和自噬,誘導(dǎo)細(xì)胞微管蛋白的動態(tài)變化有關(guān)。
【圖文】：

50值為 16 nM, 其 95%置信區(qū)間為 14 nM~19 nM。圖4 二甲雙胍聯(lián)合紫杉醇對人神經(jīng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞增殖抑制的影響 (x±s, n=4)。與Met+Pac組相比，**P<0.01。-11 -10 -9 -8 -7 -6 -5020406080lgCInhibitionratio(%)

26聯(lián)合紫杉醇對 U251 細(xì)胞 PERK、CHOP、GRP7、LC3B 和 p62；聯(lián)合使用自嗜抑制劑 CQ 處理對 U251 細(xì)胞增殖抑制率的影響比，*P<0.05,**P<0.01；與pac組相比，，#P<0.05,##P<0.01。與Met組相比 P<0.01。ct of metformin in combination with paclitaxel on the expressionss-related proteins PERK, CHOP, GRP78 and autophagy-related procells. (A, C) Representative immunoblots of PERK, CHOP, GRP78ins. (B, D) Densitometric analysis of intracellular PERK, CHOP, GR
【學(xué)位授予單位】：湖北科技學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R965

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 毛建平;陳立軍;;臨床腫瘤免疫治療研究進(jìn)展[J];國際藥學(xué)研究雜志;2013年02期

2 陳治軍;田玉科;羅放;曹菲;王平;;紫杉醇致大鼠外周神經(jīng)病理性疼痛模型的建立[J];華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年06期

本文編號：2604528