【摘要】：目的本研究以中鏈甘油和甘油三酸酯混合脂質(zhì)為載體材料,采用乳化溶劑揮發(fā)法制備胃癌血管靶向肽GX1(CGNSNPKSC)修飾的紫杉醇納米脂質(zhì)載體(GX1-PTX-NLCs)和無(wú)修飾的紫杉醇納米脂質(zhì)載體(PTX-NLCs),并對(duì)二者制劑學(xué)性質(zhì)、體外釋放和穩(wěn)定性進(jìn)行考察,并通過(guò)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)其體內(nèi)抗腫瘤活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。方法將聚乙二醇2000(PEG_(2000))與硬脂酸(SA)連接生成中間體聚乙二醇單硬脂酸酯,后將羧基引入PEG末端,獲得聚乙二醇單硬脂酸酯羧基衍生物。接著與N末端用氨基乙酸衍生化的GX1環(huán)肽連接,得到目標(biāo)產(chǎn)物SA-PEG_(2000)-GX1。以紫杉醇(PTX)、中鏈甘油(MCT)、聚乙二醇硬脂酸酯(SA-PEG_(2000))、甘油三酸酯(TRIG)、乳化劑的用量或濃度為考察因素,以納米粒的Zeta電位、粒徑、包封率和載藥量為評(píng)價(jià)指標(biāo),通過(guò)單因素篩選實(shí)驗(yàn)得到制備PTX-NLCs的最優(yōu)處方。用等量SA-PEG_(2000)-GX1代替SA-PEG_(2000),制備GX1-PTX-NLCs。實(shí)驗(yàn)采用透射電子顯微顯微鏡觀察PTX-NLCs和GX1-PTX-NLCs的形態(tài),并考察其體外釋放和8d內(nèi)穩(wěn)定性。通過(guò)CCK8法探究了不同濃度的PTX、PTX-NLCs、GX1-PTX-NLCs和GX1修飾的空白納米脂質(zhì)載體對(duì)Co-HUVEC和SGC7901細(xì)胞的抑制情況和對(duì)兩種正常細(xì)胞(GES-1和HUVEC細(xì)胞)的毒性。此外,通過(guò)激光共聚焦顯微鏡定性觀察了納米脂質(zhì)載體的細(xì)胞攝取情況,并考察了不同濃度和時(shí)間對(duì)細(xì)胞攝取的影響。課題建立了荷人胃癌裸鼠移植瘤模型,成瘤后每隔兩天給藥一次,連續(xù)給藥5次,給藥期間測(cè)量裸鼠的體重及瘤體積。14d后處死裸鼠病剝離腫瘤組織塊、觀察計(jì)算帶瘤生長(zhǎng)裸鼠的存活率。結(jié)果核磁共振氫譜(~1H-NMR)證明SA-PEG_(2000)和SA-PEG_(2000)羧基化衍生物成功合成,基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜結(jié)果(MALDI-TOF-MS)表明GX1-SA-PEG_(2000)成功合成。PTX-NLCs的平均粒徑、Zeta電位、載藥量分別達(dá)到190.37±3.78nm、-11.69±0.40mV、0.45±0.017%,GX1-PTX-NLCs則分別達(dá)到222.41±2.02nm、-9.89±0.37mV、0.40±0.013%,二者的包封率均達(dá)到80%以上。透射電鏡下兩種納米脂質(zhì)載體呈球形,8d內(nèi)PTX-NLCs和GX1-PTX-NLCs的穩(wěn)定性良好,體外釋放實(shí)驗(yàn)表明兩種納米脂質(zhì)載體分散液相比原藥緩釋效果明顯。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明,78.2nmol/mL濃度下GX1-PTX-NLCs對(duì)Co-HUVEC細(xì)胞的抑制率最高(31.59±0.30%)、對(duì)GES-1細(xì)胞毒性最小(18.54±0.64%)。而在相同濃度下、攝取時(shí)間為3h時(shí)觀測(cè)到GX1-PTX-NLCs在Co-HUVEC細(xì)胞中大量聚集,細(xì)胞攝取率最高(85.26±0.23%)。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,相比于PTX和PTX-NLCs,GX1-PTX-NLCs對(duì)荷人胃癌裸鼠的腫瘤生長(zhǎng)有顯著抑制作用,抑制率達(dá)到69.70±4.37%,同時(shí)PTX-NLCs和GX1-PTX-NLCs均延長(zhǎng)了帶瘤裸鼠的存活時(shí)間。HE染色結(jié)果表明GX1-PTX-NLCs較PTX原藥和PTX-NLCs對(duì)腫瘤組織損傷顯著。結(jié)論本課題成功制備了胃癌血管靶向肽GX1修飾的紫杉醇納米脂質(zhì)載體(GX1-PTX-NLCs),包封率高、穩(wěn)定性好,體內(nèi)外抗腫瘤效果優(yōu)異、毒副作用低,證明其是一種潛在的高效靶向給藥系統(tǒng)。
【圖文】：

圖 1. GX1 修飾的紫杉醇納米脂質(zhì)載體（GX1-PTX-NLCs）制備路線Fig. 1 Schematic diagram of GX1-mediated paclitaxel targeting delivery system(GX1-PTX-NLCs).

圖 1.2 SA-PEG2000的1H-NMR 檢測(cè)結(jié)果Fig. 1.2 SA-PEG2000,1H-NMR result.1.3.2 SA-PEG2000羧基衍生物的結(jié)構(gòu)確認(rèn)核磁共振法（1H-NMR, 400 MHz, CDCl3）：δ4.17-4.14（m, 4H），，δ3.67-3.40（m,350H），δ2.28-2.24（m,2H），δ1.55-1.53（m,2H），δ1.21-1.18（m,24H），δ0.81（t,J=6.8Hz,3H）（圖 1.3）。分析結(jié)果可知，此步反應(yīng)合成得到的產(chǎn)物確為SA-PEG2000羧基衍生物。
【學(xué)位授予單位】：陜西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R914;R96

【參考文獻(xiàn)】

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1 惠曉麗;梁樹(shù)輝;劉洋;劉驚濤;吳開(kāi)春;;體內(nèi)示蹤技術(shù)評(píng)價(jià)噬菌體展示肽GX1特異靶向胃癌新生血管[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2015年14期

2 鄭召磊;李亞平;陳伶俐;;硫酸銨梯度法制備重酒石酸長(zhǎng)春瑞濱脂質(zhì)體及其在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2015年03期

3 鞏凱;陳潔;唐汝培;陳敬華;;紫杉醇生物素標(biāo)記衍生物的合成[J];化學(xué)試劑;2015年05期

4 付寒;胡關(guān)蓮;何勤;;細(xì)胞穿膜肽TAT和可斷裂PEG共修飾載紫杉醇脂質(zhì)體的制備及體外促細(xì)胞凋亡作用[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2014年07期

5 郭盼;李淑娟;于世慧;潘衛(wèi)三;楊星鋼;;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體靶向的紫杉醇膠束的制備及其緩釋效果[J];中國(guó)科技論文;2014年06期

6 趙珊珊;張強(qiáng);李靜;周艷秋;單文衛(wèi);管潔;張藜莉;趙平;;香豆素6膠束的制備及在單層上皮細(xì)胞攝取和跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)研究[J];中國(guó)藥學(xué)雜志;2014年10期

7 寇龍發(fā);高利芳;姚情;李東坡;孫進(jìn);;乳化溶劑揮發(fā)法制備紫杉醇PLGA納米粒及其體外評(píng)價(jià)[J];中國(guó)藥劑學(xué)雜志(網(wǎng)絡(luò)版);2014年02期

8 張玉巾;彭洪尚;黃世華;由芳田;;摻雜香豆素6的雜化納米顆粒的制備及熒光性能研究(英文)[J];發(fā)光學(xué)報(bào);2013年12期

9 楊艷芳;謝向陽(yáng);楊陽(yáng);張慧;梅興國(guó);;粒徑與表面電荷影響脂質(zhì)體體內(nèi)藥物靶向遞送的研究進(jìn)展[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2013年11期

10 于超;何冰;張華;代文兵;王學(xué)清;張強(qiáng);;載香豆素6的PEG-PCL膠束跨MDCK極性上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);2013年09期

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1 高琰;鬼臼毒素納米脂質(zhì)載體的制備及用于西藏小型豬宮頸黏膜的安全性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2600069