【摘要】：本研究以亨氏馬尾藻為原料采用超聲輔助熱水浸提的方式得到粗多糖,命名為F。采用DEAE C-52柱層析法對F分級純化得到組分FD1、FD2、FD3;對F及FD1采用Sepharose CL-6B柱層析法純化得到組分FS1、FS2及FS11。測定了以上各巖藻聚糖硫酸酯組分的化學(xué)組成,結(jié)果表明各組分的多糖含量、硫酸基含量、巖藻糖含量和糖醛酸含量差異較大。紅外光譜分析表明各組分均有多糖特征官能團。I-KI試驗和剛果紅試驗表明巖藻聚糖硫酸酯具有多條復(fù)雜支鏈結(jié)構(gòu),但僅FS2具有三股螺旋構(gòu)象。采用HPLC法測定各巖藻聚糖硫酸酯組分的單糖組成及分子量,結(jié)果表明各組分幾乎不含阿拉伯糖,FS2為葡聚糖,其它組分的特征單糖均為巖藻糖,各組分的分子量范圍在1.06×10~5-3.14×10~5Da。采用經(jīng)分離、純化等步驟制得不同純化程度的巖藻聚糖硫酸酯,通過作用于兩種血栓形成途徑來研究其抗血栓效果。即建立小鼠黑尾血栓模型,探討各純化組分的體內(nèi)抗血栓效果;培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和人肺微血管內(nèi)皮細胞(HMVEC),探究各純化組分對這兩種血管內(nèi)皮細胞的體外抗血栓效果。通過建立角叉菜膠誘導(dǎo)的小鼠黑尾血栓模型以對F、FD1和FS1進行抗血栓效果的初步評價,同時采用毛細管法測定各組小鼠的凝血時間。結(jié)果表明:造模后的24 h、48 h和72 h,F、FD1和FS1的各劑量組小鼠黑尾長度均短于同時期的模型對照組,且FD1和FS1抑制小鼠黑尾的效果均比粗多糖F顯著(p0.05,p0.01),其中15 mg/kg劑量的FS1抑制黑尾的效果最佳(p0.01)。馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯各劑量組均可延長小鼠的凝血時間,效果由高到低依次為FS1FD1F。通過建立氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)的細胞損傷模型以探究馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯對人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和人肺微血管內(nèi)皮細胞(HMVEC)的損傷保護作用,結(jié)果表明氧化型低密度脂蛋白能極顯著(p0.01)損傷兩種血管內(nèi)皮細胞并引起增殖率下降,而各巖藻聚糖硫酸酯組均能極顯著(p0.01)保護細胞不受氧化型低密度脂蛋白的影響,使細胞的增殖率維持在正常細胞水平。試劑盒法測定了兩種細胞的血栓素(TXA_2)和前列環(huán)素(PGl_2)的分泌量,結(jié)果表明馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯不能有效地調(diào)控HUVEC關(guān)于TXA_2和PGl_2的分泌,但能有效促進HMVEC對PGl_2的分泌并抑制TXA_2的分泌。
【圖文】：

馬尾藻巖藻聚糖硫酸酯對血栓及 HUVEC 和 HMVEC 的作用研究子的釋放及相互作用，是血栓生成的主要因素。血液流變學(xué)改變表現(xiàn)在血液流動速度變慢、粘度變大、易形成渦流，導(dǎo)致血凝塊不能被血流沖走從而聚集變大形成血栓，是血栓生成的重要原因[48]。血栓生成是由三大途徑共同調(diào)控的[4,47-48]，如圖 1-1 所示。

廣東海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文多糖含量測定（苯酚硫酸法）驗原理：在快速加入濃硫酸后，多糖迅速脫水生成糖醛以及糖醛衍生物生物能與苯酚生成一種橙紅色絡(luò)合物，并且在一定的可測濃度范圍內(nèi)，還原糖的含量成正比，并存在良好的線性關(guān)系，在 490nm 的波長下有值。驗試劑：100μg/ml 巖藻糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：1g 巖藻糖加水定容至 100ml，取 1 100ml，即得 100μg/ml 巖藻糖標(biāo)準(zhǔn)溶液；6%苯酚溶液：稱取重蒸酚 6g容至 100ml。準(zhǔn)曲線的制作：分別吸取 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml 的巖藻糖標(biāo)準(zhǔn)液， 1ml，加入 1ml 6%苯酚溶液，搖勻，立即迅速加入 5ml 濃硫酸，混勻5min，冷卻至室溫，用移液槍分別注入到 96 孔板中，200μl/孔。以蒸餾，使用酶標(biāo)儀在 490nm 的波長下測定吸光值。以巖藻糖濃度為橫坐標(biāo)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，，得回歸方程，如圖 2-1。
【學(xué)位授予單位】：廣東海洋大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R96

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本文編號：2590221