【摘要】：肝癌是世界上最常見的癌癥之一,也是癌癥死亡的第三大常見原因。肝癌在全球范圍內(nèi)患病率很高,其中東亞,非洲等發(fā)展中國(guó)家的肝癌發(fā)病率位居全球前列。肝臟是一種易受氧化損傷影響的器官。當(dāng)ROS過(guò)多時(shí),動(dòng)態(tài)平衡將受到干擾,導(dǎo)致氧化應(yīng)激。氧化應(yīng)激在肝臟疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著至關(guān)重要的作用。高水平的氧化應(yīng)激導(dǎo)致氨基酸殘基的氧化修飾,從而誘導(dǎo)DNA突變和細(xì)胞凋亡。細(xì)胞凋亡被廣泛認(rèn)為是大多數(shù)肝損傷的形式。細(xì)胞內(nèi)線粒體代謝紊亂或活性氧(ROS)過(guò)度引起線粒體損傷,導(dǎo)致細(xì)胞色素C釋放和caspase-3活化,從而激活caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)。目前肝癌的主要治療手段包括物理療法與化學(xué)治療。在治療過(guò)程中,患者會(huì)出現(xiàn)多種不良反應(yīng)以及耐受性降低,因而迫切的需要治療肝癌的新型的毒性較低治療劑�；瘜W(xué)治療藥物通過(guò)觸發(fā)殺死癌細(xì)胞細(xì)胞凋亡在抗腫瘤中發(fā)揮著重要作用。因此,新的治療靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)與研究,為治療肝癌提供一種新的合理的方法。小分子作為抗癌藥物具有克服耐藥性的特點(diǎn),改善癌癥患者的預(yù)后和生存,其可以作為癌癥的新治療方法。許多研究表明吲哚基衍生物及查耳酮衍生物都具有抗腫瘤和促癌細(xì)胞凋亡的作用。由此,我們猜測(cè)吲哚基查耳酮衍生物可能也是一種抗癌藥物。本研究對(duì)吉林大學(xué)化學(xué)學(xué)院合成了一系列吲哚基查耳酮衍生物進(jìn)行體外細(xì)胞毒性篩選。我們發(fā)現(xiàn)篩選出的化合物5h2c對(duì)肝癌細(xì)胞具有有效的細(xì)胞毒性。隨后我們通過(guò)MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證5h2c抑制HepG2和PLC/PRF/5兩種肝癌細(xì)胞增殖。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)線粒體膜電位及DCFH-DA熒光探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧結(jié)果顯示,5h2c能夠改變線粒體膜電位和誘導(dǎo)ROS的生成。除此之外,通過(guò)流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)以及流式凋亡實(shí)驗(yàn),證實(shí)了5h2c能引起肝癌細(xì)胞G0/G1期阻滯,并促進(jìn)肝癌細(xì)胞凋亡。同時(shí)我們從Transwell實(shí)驗(yàn)和傷口愈合實(shí)驗(yàn)結(jié)果中發(fā)現(xiàn),5h2c能夠抑制HepG2和PLC/PRF/5細(xì)胞的遷移。接著我們選用凋亡陣列試劑盒用以尋找5h2c誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的分子靶點(diǎn)。檢測(cè)結(jié)果顯示5h2c能夠引起多種蛋白質(zhì)差異表達(dá)。Bcl-2家族蛋白和熱休克蛋白是由5h2c誘導(dǎo)變化最為顯著兩種的蛋白質(zhì)。我們對(duì)Western blot結(jié)果分析發(fā)現(xiàn),5h2c能夠增加Bax/Bcl-2比值,抑制熱休克蛋白的表達(dá),引發(fā)線粒體和死亡受體介導(dǎo)的凋亡。此外,我們還通過(guò)建立了肝癌細(xì)胞裸鼠異種移植瘤模型,證實(shí)5h2c抑制體內(nèi)肝癌腫瘤進(jìn)展。與此同時(shí),5h2c處理后并未引起裸鼠體重顯著變化也沒有產(chǎn)生副作用。綜上所述,5h2c可能是一種治療肝癌的潛在抗癌候選藥物。
【圖文】：

第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果第 3 章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果2c 在 HepG2 和 PLC/ PRF/ 5 細(xì)胞中表現(xiàn)出細(xì)胞毒性HepG2細(xì)胞用以探究10個(gè)不同的合成的化學(xué)衍生物是否能影能力。我們采用 MTT 的方法，評(píng)價(jià)濃度為 50 μM 的不同化條件下對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用。實(shí)驗(yàn)獨(dú)立重復(fù)三次。如圖 3.物都具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。相對(duì)其他化合物，劑量為育 24 小時(shí)和 48 小時(shí)后，，表現(xiàn)出對(duì) HepG2 細(xì)胞最強(qiáng)抑制

圖 3.2 5h2c 對(duì) HepG2 細(xì)胞生存能力的影響Figure 3.2 The effect on cell viability of HepG2 cell after 5h2c treatment圖 3.3 5h2c 對(duì) PLC/ PRF/ 5 細(xì)胞生存能力的影響Figure 3.3 The effect on cell viability of PLC/ PRF/ 5 cell after 5h2c treatment
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 Abhijeet Waghray;Arvind R Murali;KV Narayanan Menon;;Hepatocellular carcinoma: From diagnosis to treatment[J];World Journal of Hepatology;2015年08期

2 呂桂帥;陳磊;王紅陽(yáng);;我國(guó)肝癌研究的現(xiàn)狀與前景[J];生命科學(xué);2015年03期

3 Halina Cichoz-Lach;Agata Michalak;;Oxidative stress as a crucial factor in liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年25期

4 李敏;林俊;;細(xì)胞凋亡途徑及其機(jī)制[J];國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志;2014年02期

5 黃凱;李燕;;對(duì)氧磷酶與慢性肝損傷[J];國(guó)際藥學(xué)研究雜志;2011年02期

6 石玉;李yN亮;劉巍;鄒美香;趙樂晶;;2-羥基查耳酮類衍生物的合成與抗腫瘤活性篩選[J];現(xiàn)代藥物與臨床;2010年01期

7 許旭東;胡曉茹;楊峻山;;抗腫瘤藥用植物有效成分研究概況[J];中國(guó)中藥雜志;2008年17期

8 曹靜;;吲哚類化合物抗腫瘤作用研究進(jìn)展[J];齊魯藥事;2006年09期

本文編號(hào)：2589903