【摘要】：目的建立衍生化毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定重組乙型肝炎疫苗[釀酒酵母或中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary,CHO)]中游離甲醛含量。方法應(yīng)用2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine,2,4-DNPH)衍生重組乙型肝炎疫苗中的游離甲醛后,環(huán)己烷萃取衍生物,HP-5毛細(xì)管色譜柱分離,電子捕獲檢測(cè)器測(cè)定,外標(biāo)法定量。色譜條件:初始溫度為150℃,保持1 min,再以20℃·min-1的速率升溫至250℃,保持10 min;檢測(cè)器溫度為350℃,尾吹60 m L·min-1;進(jìn)樣口溫度為300℃,分流比為50∶1;載氣為N2;進(jìn)樣量為1μL。結(jié)果游離甲醛質(zhì)量濃度在1.01~30.3 mg·L-1內(nèi),與峰面積呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為A=3 968.5ρ-284.1(r=0.999 6)。低、中、高3個(gè)濃度的平均加樣回收率為99.1%,RSD值為2.87%。結(jié)論衍生化毛細(xì)管氣相色譜法可用于重組乙型肝炎疫苗中游離甲醛含量的質(zhì)量控制。
【圖文】：

母或CHO細(xì)胞)，首先按照“2.2.4”條處理樣品，然后按“2.1”條色譜條件測(cè)定，，游離甲醛衍生物與相鄰最近色譜峰的分離度均大于4.0，理論塔板數(shù)大于100000，主峰保留時(shí)間約為5.3min;由于在生產(chǎn)重組乙型肝炎疫苗(釀酒酵母或CHO細(xì)胞)過程中，容易引入甲醇和甲酸，在結(jié)構(gòu)上3種化合物接近，故同時(shí)取甲醇溶液(10mg·L－1)和甲酸溶液(10mg·L－1)按照“2.2.4”條進(jìn)行衍生化處理，結(jié)果證明甲醇和甲酸未發(fā)生衍生化反應(yīng)，所以不會(huì)干擾甲醛的含量測(cè)定�？梢娫撓到y(tǒng)能夠滿足甲醛衍生物和其他雜質(zhì)成分達(dá)到基線分離的要求(見圖1)。A—Blank;B—Formaldehydereference;C—Sample;D—Formicacid;E—MethanolFig．1Derivatizationcapillarygaschromatogramsoffreeformaldehyde圖1游離甲醛衍生化毛細(xì)管氣相色譜圖2.3.2衍生化反應(yīng)條件優(yōu)化取對(duì)照品溶液(5mg·L－1)，分別比較了不同超聲時(shí)間(2、5、10min)、衍生溫度(室溫、40℃、60℃)和萃取劑(環(huán)己烷、正己烷)對(duì)衍生化后測(cè)定靈敏度的影響，見圖2。290沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)第32卷

Fig．2Investigationresultsofderivatizationconditions圖2衍生條件的考察結(jié)果結(jié)果證明超聲時(shí)間對(duì)靈敏度影響不大，為保證反應(yīng)充分且節(jié)省時(shí)間，最終選取超聲時(shí)間為5min;衍生化溫度影響也不明顯，為避免室溫隨地區(qū)和季節(jié)的不同選定衍生化反應(yīng)溫度為60℃;比較環(huán)己烷和正己烷2種萃取溶劑，結(jié)果表明以環(huán)己烷作為萃取劑萃取率高于正己烷14%，因此萃取劑選取環(huán)己烷，最終確定了衍生化條件為溫度60℃，超聲5min和環(huán)己烷。2.3.3線性關(guān)系考察精密量取甲醛對(duì)照品貯備液，用純水逐步稀釋成系列質(zhì)量濃度為1.01、2.02、5.05、10.1、20.2、25.25和30.3mg·L－1的對(duì)照品濃溶液，按“2.2.4”條進(jìn)行衍生化反應(yīng)，以“2.1”條色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以甲醛質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到的回歸方程為:A=3968.5ρ－284.1，r=0.9996。表明游離甲醛含量在1.01～30.30mg·L－1內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.3.4加樣回收率試驗(yàn)精密量取9份0.5mL供試品溶液(批號(hào)201109078-1)，分別置15mL離心管中，再分別加入低、中、高3個(gè)質(zhì)量濃度(4、20、40mg·L－1)的甲醛對(duì)照品溶液0.5mL各3份，按“2.2.4”條衍生化后，以“2.1”條色譜條件進(jìn)樣測(cè)定峰面積，外標(biāo)法計(jì)算回收率，并計(jì)算ＲSD值，結(jié)果見表1。Table1Theresultsofrecoveriestestofformaldehyde表1甲醛的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果moriginal/μgmadded/μgmmeasured/μgＲecovery/%Averagerecovery/%ＲSD/%0.57282.0002.492495.9899.12.90.57282.0002.497296.220.57282.0002.521297.420.572810.00010.6886101.160.572810.00010.8046102.320.572810.00010.7574101.850.572820.00019.737295.820.572820.00020.335698.810.572820.00021.0568102.

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 吳孟李;范坤;聶錦鳳;劉格辛;;自動(dòng)靜態(tài)頂空-毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定污水中甲醛的研究[J];長(zhǎng)春大學(xué)學(xué)報(bào);2006年06期

2 張藝濱;吳傳楠;楊慧敏;郝德;張林枝;王勝;顧饒勝;;甲醛毒性作用的研究進(jìn)展[J];吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào);2008年04期

3 何鵬;洪小栩;李志剛;宋俐霏;梁爭(zhēng)論;陳偉;胡忠玉;;不同比色方法測(cè)定疫苗中游離甲醛殘留量的比較[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2012年06期

4 陳金元,耿毅,鄭菊梅;CHO-C_(28)細(xì)胞收集液中乙型肝炎病毒表面抗原收率的研究[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2001年01期

5 都麗萍;梅丹;;免疫接種的安全性及不良事件[J];藥物不良反應(yīng)雜志;2010年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉明星;韋正友;;醫(yī)學(xué)院校解剖實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣中甲醛的測(cè)定及防護(hù)措施[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年06期

2 徐守群;;社區(qū)嬰幼兒免疫接種認(rèn)知情況調(diào)查[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2011年15期

3 鄭健;;甲醛與人體健康[J];大學(xué)化學(xué);2009年01期

4 錢疆;黃杰;盧聲宇;藍(lán)錦昌;;液相電化學(xué)方法檢測(cè)食品中甲醛合次硫酸氫鈉[J];福建分析測(cè)試;2008年03期

5 燕翔;王瀚;王都留;;童裝甲醛污染與兒童健康[J];甘肅科技;2009年15期

6 尹艷鳳;王安群;李倦生;陳小明;;吹掃捕集-氣相色譜法測(cè)定空氣中的甲醛含量[J];湖南工程學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年03期

7 王志;;宜昌市疑似預(yù)防接種異常反應(yīng)監(jiān)測(cè)的知信行調(diào)查[J];公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué);2013年06期

8 李建軍;賈國(guó)倫;王君;梁建強(qiáng);楊麗;;金銀花不同種質(zhì)花蕾的形態(tài)和品質(zhì)成分比較分析[J];廣西師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年04期

9 宋新;王冰;丁璞;李先寬;陳婷;吳亞男;;1.8%復(fù)硝酚鈉脅迫對(duì)五味子木脂素類成分含量的影響[J];北方園藝;2014年02期

10 何夢(mèng)玲;何芳;熊洋;馬嘉瑜;龔偉駿;嚴(yán)寒靜;;茉莉酸甲酯對(duì)廣藿香葉中百秋里醇含量的影響[J];北方園藝;2014年05期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊彬;崔樹玉;王志玉;李愛萍;劉文杰;董非;孫啟華;;低溫甲醛蒸汽滅菌器滅菌效果觀察[A];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)消毒分會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

2 張稀雯;黃志軍;向陽;郭慧娟;熊莉;許沛虎;;驅(qū)白巴布期片質(zhì)量控制研究[A];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

3 王曉飛;葛海生;于玲;柴江平;;柴辛鼻敏康膠囊初步穩(wěn)定性研究[A];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

4 王曉冬;田源紅;張英;劉贅;馬敬原;熊燦霞;;馬蘭草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[A];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

5 張芳;;復(fù)方氫氯噻嗪片中4-氨基-6-氯-1,3-苯二磺酰胺的檢查[A];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

6 劉會(huì)茹;王艷清;盧學(xué)軍;;熱毒寧注射液與甲硝唑和替硝唑氯化鈉注射液的配伍穩(wěn)定性研究[A];醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)(2013年8月第32卷增刊)[C];2013年

7 周述香;程鋼;曾玲;;1例嚴(yán)重骨外傷繼發(fā)重癥感染患者的藥學(xué)服務(wù)[A];2012年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第十二屆中國(guó)藥師周論文集[C];2012年

8 顧嘉欽;朱s

本文編號(hào)：2585233