【摘要】：目的建立衍生化毛細(xì)管氣相色譜法測定重組乙型肝炎疫苗[釀酒酵母或中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese hamster ovary,CHO)]中游離甲醛含量。方法應(yīng)用2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine,2,4-DNPH)衍生重組乙型肝炎疫苗中的游離甲醛后,環(huán)己烷萃取衍生物,HP-5毛細(xì)管色譜柱分離,電子捕獲檢測器測定,外標(biāo)法定量。色譜條件:初始溫度為150℃,保持1 min,再以20℃·min-1的速率升溫至250℃,保持10 min;檢測器溫度為350℃,尾吹60 m L·min-1;進(jìn)樣口溫度為300℃,分流比為50∶1;載氣為N2;進(jìn)樣量為1μL。結(jié)果游離甲醛質(zhì)量濃度在1.01~30.3 mg·L-1內(nèi),與峰面積呈良好的線性關(guān)系,回歸方程為A=3 968.5ρ-284.1(r=0.999 6)。低、中、高3個濃度的平均加樣回收率為99.1%,RSD值為2.87%。結(jié)論衍生化毛細(xì)管氣相色譜法可用于重組乙型肝炎疫苗中游離甲醛含量的質(zhì)量控制。
【圖文】：

母或CHO細(xì)胞)，首先按照“2.2.4”條處理樣品，然后按“2.1”條色譜條件測定，，游離甲醛衍生物與相鄰最近色譜峰的分離度均大于4.0，理論塔板數(shù)大于100000，主峰保留時間約為5.3min;由于在生產(chǎn)重組乙型肝炎疫苗(釀酒酵母或CHO細(xì)胞)過程中，容易引入甲醇和甲酸，在結(jié)構(gòu)上3種化合物接近，故同時取甲醇溶液(10mg·L－1)和甲酸溶液(10mg·L－1)按照“2.2.4”條進(jìn)行衍生化處理，結(jié)果證明甲醇和甲酸未發(fā)生衍生化反應(yīng)，所以不會干擾甲醛的含量測定。可見該系統(tǒng)能夠滿足甲醛衍生物和其他雜質(zhì)成分達(dá)到基線分離的要求(見圖1)。A—Blank;B—Formaldehydereference;C—Sample;D—Formicacid;E—MethanolFig．1Derivatizationcapillarygaschromatogramsoffreeformaldehyde圖1游離甲醛衍生化毛細(xì)管氣相色譜圖2.3.2衍生化反應(yīng)條件優(yōu)化取對照品溶液(5mg·L－1)，分別比較了不同超聲時間(2、5、10min)、衍生溫度(室溫、40℃、60℃)和萃取劑(環(huán)己烷、正己烷)對衍生化后測定靈敏度的影響，見圖2。290沈陽藥科大學(xué)學(xué)報第32卷

Fig．2Investigationresultsofderivatizationconditions圖2衍生條件的考察結(jié)果結(jié)果證明超聲時間對靈敏度影響不大，為保證反應(yīng)充分且節(jié)省時間，最終選取超聲時間為5min;衍生化溫度影響也不明顯，為避免室溫隨地區(qū)和季節(jié)的不同選定衍生化反應(yīng)溫度為60℃;比較環(huán)己烷和正己烷2種萃取溶劑，結(jié)果表明以環(huán)己烷作為萃取劑萃取率高于正己烷14%，因此萃取劑選取環(huán)己烷，最終確定了衍生化條件為溫度60℃，超聲5min和環(huán)己烷。2.3.3線性關(guān)系考察精密量取甲醛對照品貯備液，用純水逐步稀釋成系列質(zhì)量濃度為1.01、2.02、5.05、10.1、20.2、25.25和30.3mg·L－1的對照品濃溶液，按“2.2.4”條進(jìn)行衍生化反應(yīng)，以“2.1”條色譜條件進(jìn)樣測定，以甲醛質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得到的回歸方程為:A=3968.5ρ－284.1，r=0.9996。表明游離甲醛含量在1.01～30.30mg·L－1內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。2.3.4加樣回收率試驗精密量取9份0.5mL供試品溶液(批號201109078-1)，分別置15mL離心管中，再分別加入低、中、高3個質(zhì)量濃度(4、20、40mg·L－1)的甲醛對照品溶液0.5mL各3份，按“2.2.4”條衍生化后，以“2.1”條色譜條件進(jìn)樣測定峰面積，外標(biāo)法計算回收率，并計算ＲSD值，結(jié)果見表1。Table1Theresultsofrecoveriestestofformaldehyde表1甲醛的加樣回收率實驗結(jié)果moriginal/μgmadded/μgmmeasured/μgＲecovery/%Averagerecovery/%ＲSD/%0.57282.0002.492495.9899.12.90.57282.0002.497296.220.57282.0002.521297.420.572810.00010.6886101.160.572810.00010.8046102.320.572810.00010.7574101.850.572820.00019.737295.820.572820.00020.335698.810.572820.00021.0568102.

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