【摘要】：多沙唑嗪（doxazosin，Dox）為喹唑啉環(huán)衍生物，屬長效、高選擇性α1受體阻斷藥，其分子結(jié)構(gòu)中存在一個手性碳原子，為手性藥物，臨床使用其消旋體[(±)Dox]，是治療良性前列腺增生合并下尿路癥狀（BPH/LUTS）的一線用藥，也是治療高血壓的常用添加藥物（add-ondrugs）。 眾所周知，藥物的效應與血藥濃度密切相關(guān)，因此分析和了解體內(nèi)(±)Dox的血藥濃度變化，對(±) Dox治療BPH及高血壓時的臨床療效和不良反應十分必要。本文建立了大鼠血漿中消旋多沙唑嗪濃度的非手性液相分析測定方法，并將該方法用于研究大鼠口服與靜脈注射消旋多沙唑嗪后的藥代動力學。 多沙唑嗪為手性藥物，而通常手性藥物的體內(nèi)處置過程存在立體選擇性。這是由于生物體內(nèi)廣泛存在具有手性識別能力的生物大分子，當手性藥物與其相互作用時將產(chǎn)生立體選擇性，從而體現(xiàn)不同的藥代動力學和藥效學特征。因此，，分析多沙唑嗪對映體的體內(nèi)過程特別是血藥濃度變化，對進一步研究兩對映體的血藥濃度與臨床療效的關(guān)系十分重要。本文用卵粘蛋白手性柱建立了大鼠血漿中多沙唑嗪對映體的手性高效液相色譜分析測定方法，并用該方法研究了多沙唑嗪對映體在體內(nèi)及體外的手性轉(zhuǎn)化情況。 第一部分多沙唑嗪非手性高效液相色譜分析方法的建立 目的：建立消旋多沙唑嗪的非手性高效液相色譜熒光檢測方法。 方法：優(yōu)化消旋多沙唑嗪的熒光檢測波長，選定哌唑嗪作為內(nèi)標物質(zhì)，考察不同流動相組成、流速、緩沖鹽溶液濃度及pH對分離效果的影響。 結(jié)果：確定了高效液相熒光色譜法的色譜條件：色譜柱為Agilent C18柱，柱溫30℃，流動相為buffer-甲醇（44：56，v/v；buffer：30mmol·L-1的磷酸鹽緩沖液，pH3.1），流速為1.0mL·min-1，激發(fā)波長255nm，發(fā)射波長385nm，內(nèi)標物為哌唑嗪。 結(jié)論：該方法獲得的色譜圖基線平穩(wěn)，內(nèi)標哌唑嗪與多沙唑嗪達到基線分離，二者峰形良好。 第二部分大鼠口服與靜脈注射消旋多沙唑嗪后的藥動學研究 目的：建立大鼠血漿中消旋多沙唑嗪濃度的高效液相色譜熒光檢測方法，并用該方法研究大鼠口服與靜脈注射消旋多沙唑嗪后的藥代動力學。 方法：取SD（Sprague-Dawley）大鼠14只，隨機分為兩組，分別口服和尾靜脈注射消旋多沙唑嗪溶液，劑量為6mg·kg-1。液液萃取法進行血漿樣品預處理，所選萃取液為正己烷及乙酸乙酯（1：1）混合液。高效液相熒光色譜法的色譜條件：色譜柱為Agilent C18，柱溫30℃，流動相為buffer-甲醇（44：56，v/v；buffer：30mmol·L-1的磷酸鹽緩沖液，pH3.1），流速為1.0mL·min-1，熒光檢測激發(fā)波長255nm，發(fā)射波長385nm，內(nèi)標物為哌唑嗪。用WinNonlin軟件計算口服和靜脈注射給藥后的藥動學參數(shù)，并算出大鼠口服消旋多沙唑嗪的生物利用度。 結(jié)果：消旋多沙唑嗪檢測濃度在4-4000ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，消旋多沙唑嗪平均回收率為101.8%，RSD為5.7%�？诜o藥后，血漿中消旋多沙唑嗪的t1/2為（2.19±0.35）h，AUC為（1939.14±0.19）h·ng·mL-1；靜脈注射給藥后，血漿中消旋多沙唑嗪的t1/2為（1.41±0.15）h，AUC為（4271.80±0.09）h·ng·mL-1。 結(jié)論：該分析方法選擇性強、準確度高、重現(xiàn)性好，適用于消旋多沙唑嗪在大鼠血漿中的分析測定。依據(jù)口服與靜脈注射給藥得出的藥動學參數(shù)，算得大鼠口服消旋多沙唑嗪的生物利用度為45.4%。 第三部分多沙唑嗪手性高效液相色譜分析方法的建立 目的：建立多沙唑嗪對映體的手性高效液相色譜熒光測定方法。 方法：考察流動相pH及流速、有機改性劑種類對多沙唑嗪對映體分離度的影響。 結(jié)果：確定了多沙唑嗪對映體的手性分離色譜條件：色譜柱為卵黏蛋白手性柱，柱溫30℃；熒光檢測激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為255nm、385nm；流動相為buffer-乙腈（85：15，v/v；buffer：20mmol·L-1的磷酸鹽緩沖液，pH5.3），流速0.8mL·min-1。 結(jié)論：利用卵粘蛋白手性柱建立了消旋多沙唑嗪的手性高效液相色譜分析方法，消旋多沙唑嗪兩個對映體在11min內(nèi)出峰完全，峰形良好且達到了基線分離。 第四部分多沙唑嗪對映體在大鼠血漿中的測定及手性轉(zhuǎn)化研究 目的：建立大鼠血漿中多沙唑嗪對映體的高效液相色譜熒光測定方法，并研究多沙唑嗪對映體在體內(nèi)和體外的手性轉(zhuǎn)化情況。 方法：液液萃取法進行血漿樣品預處理，所選萃取液為正己烷及乙酸乙酯（1：1）混合液。色譜條件：卵黏蛋白手性色譜柱，柱溫30℃；熒光檢測激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為255nm、385nm；流動相為buffer-乙腈（85：15，v/v；buffer：20mmol·L-1的磷酸鹽緩沖液，pH5.3），流速0.8mL·min-1；內(nèi)標為哌唑嗪。體外研究：將分別加入左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪的大鼠血漿于37℃水浴溫育2天、5天、10天后測定；體內(nèi)研究：SD大鼠分別連續(xù)口服左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪溶液1個月，于最后一次給藥8h后腹主動脈取血測定。 結(jié)果：多沙唑嗪兩種對映體檢測濃度在4-2000ng·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，左旋多沙唑嗪平均回收率為99.5%，RSD為3.6%；右旋多沙唑嗪平均回收率為99.3%，RSD為4.3%。多沙唑嗪對映體與大鼠血漿的體外共同溫育實驗中，未觀察到轉(zhuǎn)化現(xiàn)象；大鼠連續(xù)口服左旋或右旋多沙唑嗪1個月，血漿中也未觀察到手性轉(zhuǎn)化現(xiàn)象。 結(jié)論：該分析方法選擇性強、準確度高、重現(xiàn)性好，適用于多沙唑嗪對映體在大鼠血漿中的測定研究。體內(nèi)、體外研究表明多沙唑嗪對映體不易發(fā)生相互轉(zhuǎn)化。
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R969.1

【參考文獻】

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本文編號：2572243